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細(xì)胞工程一、植物細(xì)胞工程 (一)植物組織培養(yǎng)技術(shù)1、理論基礎(chǔ)(原理):_細(xì)胞具有全能性的原因:_全能性表達(dá)的難易程度:受精卵、生殖細(xì)胞、干細(xì)胞、體細(xì)胞;植物細(xì)胞、動物細(xì)胞,請排序_2、過程:離體的植物器官、組織或細(xì)胞(又稱_) 愈傷組織 胚狀體試管苗 植物體 愈傷組織的特點(diǎn):_脫分化:_再分化_3、用途:A植物繁殖微型繁殖:可以高效快速地實(shí)現(xiàn)種苗的大量繁殖作物脫毒:采用莖尖組織培養(yǎng)來除去病毒(因?yàn)橹参锓稚鷧^(qū)附近的病毒極少或沒有)人工種子:以植物組織培養(yǎng)得到的胚狀體、不定芽、頂芽和腋芽等為材料,經(jīng)人工薄膜包裝得到的種子。優(yōu)點(diǎn):完全保持優(yōu)良品種的遺傳特性,不受季節(jié)的限制;方便儲藏和運(yùn)輸。B作物新品種培育c單倍體育種:1、過程:植株(AaBb)通過減數(shù)分裂得到花粉(AB、Ab、aB、ab四種類型);對花粉進(jìn)行_(技術(shù)是植物組織培養(yǎng));得到單倍體植株;對其幼苗時(shí)期進(jìn)行_處理;得到了正常的_植株(AABB、AAbb、aaBB、aabb四種類型)。2、優(yōu)點(diǎn):_(二)植物體細(xì)胞雜交技術(shù)1、過程:2、植物誘導(dǎo)融合的方法:物理法包括 等?;瘜W(xué)法一般是用_作為誘導(dǎo)劑。3、注意:a生理基礎(chǔ):_ ,_ b植物細(xì)胞融合前需用_ 和_ 除去細(xì)胞壁4、意義:_ _ 。二、動物細(xì)胞工程(一)動物細(xì)胞培養(yǎng)(1)動物細(xì)胞培養(yǎng)的流程:取動物組織塊(動物胚胎或幼齡動物的器官或組織)剪碎用_處理分散成單個(gè)細(xì)胞制成細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中進(jìn)行_培養(yǎng)貼滿瓶壁的細(xì)胞重新用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞繼續(xù)_培養(yǎng)。(2)動物細(xì)胞培養(yǎng)需要滿足以下條件:無菌、無毒的環(huán)境:培養(yǎng)液應(yīng)進(jìn)行 處理。通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的 ,以防培養(yǎng)過程中的污染。此外,應(yīng)定期 ,防止代謝產(chǎn)物積累對細(xì)胞自身造成危害。營養(yǎng)物質(zhì):合成培養(yǎng)基成分:糖、氨基酸、促生長因子、無機(jī)鹽、微量元素等。通常需加入等天然成分。溫度和PH:適宜溫度:哺乳動物多是36.50.5;pH:7.27.4。氣體環(huán)境:95%空氣5%CO2。O2是 所必需的,CO2的主要作用是 。(3)動物細(xì)胞培養(yǎng)與組織培養(yǎng)的主要區(qū)別是_。(二)動物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動物1、哺乳動物核移植可以分為胚胎細(xì)胞核移植(比較容易)和體細(xì)胞核移植(比較難)。2、選用去核卵(母)細(xì)胞的原因:卵(母)細(xì)胞比較大,容易操作;卵(母)細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)多,營養(yǎng)豐富; 。3、體細(xì)胞核移植的大致過程是:(右圖)注意:(1)_ _ (2)原理:_ 全能性;克隆羊性別:_ (三)動物細(xì)胞融合1、動物細(xì)胞融合與植物原生質(zhì)體融合的原理基本相同,誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合的方法與植物原生質(zhì)體融合的方法類似,常用的誘導(dǎo)因素_ _等。2、動物細(xì)胞融合的意義:克服了_,成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物新品種培育的重要手段。3、動物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的比較:(重點(diǎn)記憶)細(xì)胞工程植物體細(xì)胞雜交動物細(xì)胞融合理論基礎(chǔ)細(xì)胞的全能性、細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞增殖、細(xì)胞膜的流動性融合前處理酶解法去除細(xì)胞壁(纖維素酶、果膠酶)注射特定抗原,免疫處理正常小鼠誘導(dǎo)手段物理法:離心、振動、電激化學(xué)法:聚乙二醇(PEG)物理法:離心、振動、電激化學(xué)法:聚乙二醇生物法:滅活的病毒(滅活的仙臺病毒)誘導(dǎo)過程第一步:原生質(zhì)體的制備(酶解法)第二步:原生質(zhì)體融合 (物、化法)第三步:雜種細(xì)胞的篩選和培養(yǎng)第四步:雜種植株的誘導(dǎo)與鑒定正常小鼠免疫處理動物細(xì)胞的融合(物、化、生法)雜交瘤細(xì)胞的篩選與培養(yǎng)專一抗體檢驗(yàn)陽性細(xì)胞培養(yǎng)單克隆抗體的提純用途和意義克服遠(yuǎn)緣雜交的不親和障礙,大大擴(kuò)展雜交的親本組合范圍應(yīng)用:白菜-甘藍(lán)等雜種植株(1) 制備單克隆抗體(2) 診斷、治療、預(yù)防疾病,例如“生物導(dǎo)彈”治療癌癥4.單克隆抗體(1)a.抗體:一個(gè)B淋巴細(xì)胞只分泌一種_。從血清中分離出的抗體 。b.B淋巴細(xì)胞特點(diǎn):可以產(chǎn)生_ ,但不能 ;骨髓瘤細(xì)胞特點(diǎn):能_ ,但不能 。(2)單克隆抗體的制備過程:注入小鼠細(xì)胞融合分離抗原注入小鼠體內(nèi)B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)養(yǎng)選擇培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)基體內(nèi)培養(yǎng)體外培養(yǎng)從腹水提取從培養(yǎng)液提取單克隆抗體(3)雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn):既能大量_,又能產(chǎn)生_。(4)單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn):_。(5)單克隆抗體的作用: 作為診斷試劑:準(zhǔn)確識別各種物質(zhì)的細(xì)微差異,并跟 發(fā)生特異性結(jié)合,具有 的優(yōu)點(diǎn)。 用于治療疾病和運(yùn)載藥物:主要用于治療癌癥治療,可制成“ ”(_),也有少量用于治療其它疾病。補(bǔ)充: 淋巴因子中的干擾素是治療病毒的特效藥,通常只能從體內(nèi)獲得,且數(shù)量非常的少,為了在體外獲
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