SYKmRNA在卵巢癌組織中的表達(dá)及其臨床意義.doc

SYKmRNA在卵巢癌組織中的表達(dá)及其臨床意義作者：仵妍,馬德花,趙淑萍單位：青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院婦科， 山東 青島 266003【摘要】 目的：探討SYKmRNA在卵巢癌組織中的表達(dá)及其與臨床病參數(shù)之間的關(guān)系。方法: 采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)測定40例卵巢癌組織、20例卵巢良性上皮性腫瘤組織及20例正常卵巢組織中SYKmRNA的表達(dá)。結(jié)果: 卵巢癌組織中SYKmRNA的表達(dá)水平明顯低于正常卵巢組織及卵巢良性上皮性腫瘤組織，差異有顯著性意義(P<0.05);SYKmRNA的表達(dá)水平在卵巢良性腫瘤及正常卵巢組織之間無明顯差異(t=0.21,P>0.05)SYKmRNA陽性表達(dá)率與卵巢癌的臨床分期、組織分級、淋巴轉(zhuǎn)移均高度相關(guān)(P<0.01)。漿液性卵巢癌中SYKmRNA陽性表達(dá)率明顯低于其在粘液性卵巢癌中的表達(dá)率(X2=4.57，P<0.05)。結(jié)論: SYKmRNA表達(dá)缺失或減少可能與卵巢癌的發(fā)生、浸潤、轉(zhuǎn)移及惡性程度密切相關(guān)，可能是一潛在腫瘤抑制因子。 【關(guān)鍵詞】 卵巢腫瘤; SYK; 腫瘤抑制因子The Relation Between the Expression of SYKmRNA in OvarianCarcinoma Tissues and the Clinical SignificanceWU Yan, MA De-hua, ZHAO Shu-ping(The Affiliated Hospital of Medical College of Qingdao University ,Shandong Qingdao 266003, China)Abstract： Objective:To study the expression of SYKmRNA in ovarian carcinoma tissues and its relation with the clinicopathological features. Method: The expression of SYK gene in ovarian carcinoma tissue (n=40), benign epithelial neoplasms(n=20) and normal ovarian tissue(n=20) were detected by RT-PCR technique. Result: The level of the SYKmRNA was obviously lower than that in the benign ovarian tumor and the normal ovarian tissue(P<0.05);but the difference of the SYKmRNA levels between the benign ovarian tumor and the normal ovarian tissue had no significance(t=0.21,P>0.05). The positive rate of SYKmRNA in ovarian carcinoma was significant associated with the clinical stage. histologic grade and lymph node metastasis (P<0.01);The positive rate of SYKmRNA was lower in ovarian serous carcinoma than that in ovarian mucinous carcinoma(X2=4.57，P<0.05).Conclusion: The miss of SYKmRNA the reduced of SYKmRNA may be associated with the occurrence, invasion, metastasis and the malignant of ovarian carcinoma, SYK may be a potential tumor suppressor in ovarian carcinoma.Key words： Ovarian neoplasms; SYK; Tumor suppressor卵巢癌是一種嚴(yán)重威脅婦女健康的惡性腫瘤，絕大多數(shù)卵巢癌患者早期癥狀不明顯，約有70%的患者就診時已屬晚期，具有惡性程度高、病情發(fā)展快、預(yù)后差的特點，死亡率居女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤首位，5年生存率僅2530%。因此，研究卵巢癌的發(fā)病機(jī)制，阻斷其發(fā)生過程的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，尋找新的治療靶點至關(guān)重要。近年來研究發(fā)現(xiàn)脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase , SYK)能抑制某些惡性腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移，其表達(dá)缺失與某些惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及腫瘤的侵襲性有關(guān)1。本研究通過逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測卵巢上皮性癌組織、卵巢良性上皮性腫瘤及正常卵巢組織中SYKmRNA 表達(dá)水平，分析其與卵巢癌患者臨床病理特征的關(guān)系，探討SYK基因在卵巢上皮腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的可能作用。1 資料與方法1.1 材 料1.1.1 標(biāo)本來源：40例卵巢上皮性癌、20例良性卵巢上皮性腫瘤、20例正常卵巢組織標(biāo)本均來源于2005年6月至2007年10月于青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院婦科的手術(shù)患者，所有標(biāo)本均經(jīng)病理證實，卵巢癌患者年齡2474歲，中位年齡50歲。卵巢癌患者的臨床分期：I-II期11例，IIIIV期29例;病理類型：漿液性腺癌22例，粘液性腺癌18例。細(xì)胞分化程度：高分化14例，中分化11例，低分化15例。術(shù)后證實無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移16例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移24例。所有患者術(shù)前均未進(jìn)行任何放療、化療及激素治療。1.1.2 主要試劑：RNA提取試劑盒Trizol Reagant為美國Gibco公司產(chǎn)品，引物由上海生物化工有限公司合成，QIAGEN OneStep RT-PCR Kit購自德國QIAGEN公司。1.2 方 法1.2.1 總RNA提?。好糠堇鋬鰳?biāo)本取100 mg，應(yīng)用Trizol Reagant試劑盒，按說明書要求提取RNA，紫外線分光光度計檢測RNA濃度和純度，放置-70冰箱保存。1.2.2 RT-PCR反應(yīng):取0.18 ug總RNA，于50ul體系中擴(kuò)增，SYK引物序列Primer 1：5’-TTCTCCAGCAAAAGCGATGTCT-3’Primer 2: 5’-TTTCCACATCGTATGTCCAGCA -3’,RT-PCR產(chǎn)物長度為199bp，反應(yīng)條件：5O 反轉(zhuǎn)錄30 min ;94預(yù)變性5min;94變性30s,57退火30s,72延伸1min ，共35個循環(huán);72 延伸10min。內(nèi)對照看家基因GAPDH 引物序列Primer 1：5’-ACTGCCACCCAGAAGACT-3’ ， Prim er 2： 5’-GCTCA GTGTAGCCCAGGAT-3’ ，RT-PCR產(chǎn)物長度292 bp，GAPDH擴(kuò)增反應(yīng)條件：5O反轉(zhuǎn)錄30 min，95預(yù)變性15 min;然后94 變性1 min，62 退火1 min，72延伸1 min，27個循環(huán)，最后72延伸10 min。1.2.3 RT-PCR半定量分析:取3ul PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，經(jīng)20 g/l瓊脂糖電泳后，置于凝膠成像分析儀下經(jīng)Biocaptmw 軟件分析。分別將SYK mRNA與GAPDH PCR產(chǎn)物電泳條帶掃描灰度值相比，其比值作為SYK基因表達(dá)的數(shù)值并進(jìn)行半定量分析。1.3 統(tǒng)計學(xué)處理:采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計數(shù)資料的比較采用X2檢驗，計量資料的比較采用單因素方差檢驗。2 結(jié) 果2.1 SYK在不同卵巢組織中的表達(dá):統(tǒng)計學(xué)分析表明，SYKmRNA的陽性表達(dá)率及其表達(dá)水平在卵巢癌中明顯低于其卵巢良性腫瘤及正常卵巢組織中的表達(dá)(P<0.01);SYKmRNA的表達(dá)水平在卵巢良性腫瘤及正常卵巢組織之間無明顯差異(t=0.21,P>0.05)，見表1。表1 各組組織中SYKmRNA表達(dá)水平的比較2.2 SYKmRNA的表達(dá)與卵巢癌臨床病理參數(shù)間的關(guān)系:統(tǒng)計學(xué)分析表明，卵巢癌中SYKmRNA的陽性表達(dá)率與腫瘤的臨床分期、組織學(xué)分級及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均高度相關(guān)(P<0.01)。SYKmRNA的陽性表達(dá)率在高分化卵巢癌明顯高于中分化卵巢癌(X2=4.81，P<0.05)，而在中分化卵巢癌中的陽性表達(dá)率明顯高于低分化卵巢癌(X2=4.63，P<0.05);SYKmRNA在漿液性卵巢癌中的陽性表達(dá)率明顯低于其在粘液性卵巢癌中的陽性表達(dá)率(X2=4.57，P<0.05)，見表2。表2 SYKmRNA表達(dá)與卵巢癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系3 討 論蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinases ,PTKs) 是一組能催化底物蛋白酪氨酸殘基磷酸化的蛋白酶,參與許多信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,并在控制細(xì)胞分化、增殖和擴(kuò)散中起重要作用。SYK作為一種非受體型的蛋白酪氨酸激酶，在配體結(jié)構(gòu)缺乏的跨膜受體信號傳導(dǎo)等許多方面發(fā)揮著重要作用2。近年來,有研究認(rèn)為其在多種惡性腫瘤的發(fā)病過程中起著極為重要的作用3。本研究發(fā)現(xiàn)，SYKmRNA在卵巢正常組織及卵巢良性腫瘤中的表達(dá)明顯高于卵巢癌組織中的表達(dá)，提示SYKmRNA的表達(dá)缺失可能與卵巢癌的發(fā)生有關(guān)。這與Sada等1研究結(jié)果相符，后者認(rèn)為SYK的表達(dá)缺失會導(dǎo)致免疫細(xì)胞發(fā)育、成熟障礙,重者會導(dǎo)致重癥聯(lián)合免疫缺陷病(SCID)，由于機(jī)體免疫細(xì)胞成熟障礙，機(jī)體免疫監(jiān)測下降，從而對突變及異常增生的細(xì)胞失去免疫力，導(dǎo)致腫瘤的易發(fā)4。同時本研究還發(fā)現(xiàn)，SYKmRNA的表達(dá)在卵巢上皮性良性腫瘤中的表達(dá)與正常卵巢組織中無明顯差異，結(jié)合臨床上卵巢上皮性良、惡性腫瘤的特點，提示SYK可能具有抑制細(xì)胞非限制性生長及惡性生物學(xué)行為有關(guān)，這與Zyss D等5研究結(jié)果相符。通過對SYK與卵巢癌臨床病理參數(shù)的研究發(fā)現(xiàn)，卵巢癌的臨床分期越晚、組織分化程度越低，SYK的陽性表達(dá)率越低，由此提示SYK mRNA表達(dá)水平在一定程度上反映腫瘤的局部浸潤能力與轉(zhuǎn)移潛能，反映腫瘤的負(fù)荷和腫瘤進(jìn)展的程度，與腫瘤的轉(zhuǎn)移、分期及預(yù)后密切相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)SYK在卵巢漿液性癌中的陽性表達(dá)率明顯低于卵巢粘液性癌，這與臨床上漿液性癌預(yù)后較差相符。同時研究還發(fā)現(xiàn)有淋巴轉(zhuǎn)移的卵巢癌組中SYKmRNA檢出率明顯低于無淋巴轉(zhuǎn)移組，提示SYKmRNA的表達(dá)缺失可能與卵巢癌的淋巴道轉(zhuǎn)移有關(guān)。 這與萬偉等6研究結(jié)果類似，后者研究發(fā)現(xiàn)SYK mRNA檢出率在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌中明顯低于無淋巴轉(zhuǎn)移組。但是，目前關(guān)于非受體型酪氨酸激酶SYK在抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移過程的具體信號傳導(dǎo)途徑尚不清楚。Carter WB7認(rèn)為SYK與HER2/neu一對功能相反的抑癌/癌基因，HER2/neu的過度表達(dá)可誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞的收縮，從而使腫瘤細(xì)胞易于穿過血管屏障，易于發(fā)生轉(zhuǎn)移，而SYK可抑制HER2/neu的收縮血管內(nèi)皮細(xì)胞作用，從而抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移?？傊琒YK基因的表達(dá)缺失或低表達(dá)可能與卵巢癌的發(fā)生、浸潤、轉(zhuǎn)移及惡性程度密切相關(guān)，關(guān)于SYK在卵巢癌發(fā)生的相關(guān)信號通路及在腫瘤轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制的尚需進(jìn)一步研究，對SYK的進(jìn)一步深入研究，可能將會為卵巢癌的治療提供新的策略?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1 Sada K, Takano T, Yanagi S, et al .Structure and function of SYK protein-tyrosine kinase J. Biochem，2001,130(2):177-186.2 Li X, Martin F, Oliver AM,et al. Antigen receptor proximal signaling in splenic B-2 cell subsetsJ.Immunol，2001,166(5):3122-3129.3 Coopman PJ, Mueller SC. The Syk tyrosine kinase: a new negative regulator in tumor growth and progressionJ. Cancer Lett，2006 ,241(2):159-173.4 Djeu JY, Jiang K, Wei S. A view to a kill: signals triggering cytotoxicityJ. Clin Cancer Res，2002,8(3):636-640.5 Zyss D, Montcourrier P, Vidal B,et al. The Syk tyrosine kinase localizes to the centrosomes and negatively affects mitotic progressionJ