微生物除去實(shí)驗(yàn)方法20151015.doc

空氣凈化器對(duì)微生物去除的試驗(yàn)方法1.試驗(yàn)原理空氣凈化器機(jī)器內(nèi)的微風(fēng)扇使室內(nèi)空氣循環(huán)流動(dòng)，污染的空氣通過(guò)機(jī)內(nèi)的空氣過(guò)濾器后將各種污染物清除或吸附，再經(jīng)過(guò)裝在出風(fēng)口的負(fù)離子發(fā)生器，將空氣不斷電離，產(chǎn)生大量負(fù)離子，被微風(fēng)扇送出，形成負(fù)離子氣流，達(dá)到清潔、凈化空氣的目的。此處采用對(duì)照試驗(yàn)，分別對(duì)兩組完全相同環(huán)境的氣霧艙和細(xì)菌濃度進(jìn)行有空氣凈化器凈化作用和無(wú)凈化狀態(tài)下進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)，得出空氣凈化器對(duì)微生物去除效率。2.試驗(yàn)的一般條件2.1模擬試驗(yàn)艙：2.11試驗(yàn)艙的溫度為2025，相對(duì)濕度為RH50%-70%；2.12試驗(yàn)艙一般要求：采用相鄰的一對(duì)氣霧艙，兩者所處環(huán)境(包含溫度、濕度、潔凈度、光照、密封性、通風(fēng)條件等)應(yīng)一致，并在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中保持穩(wěn)定。試驗(yàn)艙設(shè)計(jì)和結(jié)構(gòu)應(yīng)保證艙內(nèi)微生物氣體不外泄，所用材料應(yīng)耐腐蝕、易清洗；2.13試驗(yàn)艙容積:（3. 5 mX3. 4 mX2. 5 m=30 m3）；2.14圍護(hù)結(jié)構(gòu)(包括壁面、頂棚、地面):應(yīng)采用低污染或無(wú)污染且低吸附率的材料(如不銹鋼、聚四氟乙烯、鋼化玻璃等)；2.15密封填縫材料：用硅橡膠條及玻璃密封膠；2.16空氣攪拌裝置：小吊扇；2.17空氣循環(huán)系統(tǒng):試驗(yàn)艙內(nèi)設(shè)獨(dú)立的空氣循環(huán)系統(tǒng)，經(jīng)過(guò)濾凈化后艙內(nèi)空氣潔凈度應(yīng)達(dá)到萬(wàn)級(jí)以上，實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前通過(guò)自動(dòng)控制閥使試驗(yàn)艙完全密閉，試驗(yàn)艙外操作間應(yīng)保持正壓，防止微生物氣溶膠外泄。2.2試驗(yàn)機(jī)組的安裝：兩個(gè)艙里面都放一臺(tái)相同型號(hào)、同批次的產(chǎn)品，將對(duì)照試驗(yàn)艙空氣凈化器所有具有除菌、殺菌功能的零部件拆除或者將除菌、殺菌功能設(shè)定為不工作狀態(tài)。2.3白色葡萄球菌菌懸液菌懸液的制備：按照消毒技術(shù)規(guī)范（2002）2.1.1.2進(jìn)行制備。2.4 試驗(yàn)的大致所需時(shí)間：見(jiàn)附表二3.試驗(yàn)的設(shè)備撞擊式空氣微生物采樣器：對(duì)空氣中細(xì)菌的捕獲率大于95%噴霧染菌裝置(氣溶膠噴霧器)：噴出的氣溶膠微粒的直徑90%以上應(yīng)小于10 um高壓蒸汽滅菌器恒溫培養(yǎng)箱干熱滅菌器高效濾器顆粒計(jì)數(shù)器（稀釋器）溫濕計(jì)空氣壓力計(jì)冷藏箱氣霧艙（試驗(yàn)艙）抽風(fēng)機(jī)紫光燈小吊扇硅橡膠條玻璃密封膠鋼化玻璃菌落計(jì)數(shù)器4實(shí)驗(yàn)材料牛肉膏 10.0g蛋白胨 20.0g氯化鈉 10.0g瓊脂 15.0g蒸餾水 2000ml白色葡萄球菌菌懸液5.試驗(yàn)步驟5.1滅菌：用高壓蒸汽滅菌器對(duì)試驗(yàn)中要用到的試驗(yàn)器皿進(jìn)行滅菌，時(shí)間大約1h。（采樣器、冷藏箱、小吊扇、空氣壓力計(jì)、抽風(fēng)機(jī)等） 5.2通過(guò)高效過(guò)濾器對(duì)氣霧艙空氣進(jìn)行凈化除菌，約0.5h，使其潔凈度不低于7級(jí)（萬(wàn)級(jí)）【1】 5.3調(diào)節(jié)氣霧艙的溫度和相對(duì)濕度，約20min，維持穩(wěn)定一段時(shí)間后，10min，(以保證整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中溫度和相對(duì)濕度相對(duì)恒定)氣霧艙密閉，整個(gè)試驗(yàn)中不得再次打開(kāi)。 5.4打開(kāi)操作間的送風(fēng)裝置，約0.5h，送入經(jīng)過(guò)高效過(guò)濾器的循環(huán)風(fēng)以維持操作間的空氣壓力為正壓（15 Pa-30 Pa），防止試驗(yàn)艙中的微生物氣溶膠外泄。 5.5取試驗(yàn)菌懸液，用營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基【2】稀釋成所需濃度（需驗(yàn)證）。按照噴霧染菌裝置設(shè)定的壓力、氣體流量及噴霧時(shí)間噴霧染菌，約5min，要求邊噴霧，邊用空氣攪拌設(shè)備（如小吊扇）攪拌。噴霧染菌完畢，要求繼續(xù)攪拌10 min，然后靜置15 min。 5.6 同時(shí)對(duì)試驗(yàn)組和對(duì)照組氣霧室分別進(jìn)行運(yùn)行前細(xì)菌濃度采樣，采樣時(shí)間為1 min-5 min，采樣時(shí)采樣頭應(yīng)向上方。要求氣霧室內(nèi)空氣中各陽(yáng)性對(duì)照菌數(shù)應(yīng)為5.0104CFU/m3-5.0105CFU/m3，（此處需要實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證來(lái)確定菌落數(shù)的多少和步驟5中噴霧時(shí)間的長(zhǎng)短）否則試驗(yàn)無(wú)效。 5.7運(yùn)轉(zhuǎn)被測(cè)樣機(jī)至廠家規(guī)定的最高除菌條件狀態(tài)（如廠家沒(méi)有規(guī)定，以最高風(fēng)速、最大出風(fēng)狀態(tài)為準(zhǔn)）。對(duì)于空調(diào)器產(chǎn)品，根據(jù)送風(fēng)狀態(tài)進(jìn)行測(cè)試。 5.8測(cè)試時(shí)間計(jì)算：T=2500V/(152.7N) T-測(cè)試時(shí)間（h）,N-空氣凈化器功率（W）V-氣霧室容積（m3）測(cè)試時(shí)間最少不短于15 min，最長(zhǎng)不超過(guò)2h。根據(jù)測(cè)試時(shí)間長(zhǎng)短，設(shè)置2-3個(gè)采樣時(shí)間點(diǎn)。 5.9被測(cè)樣機(jī)運(yùn)行到規(guī)定測(cè)試時(shí)間后，對(duì)試驗(yàn)組和對(duì)照組氣霧室同時(shí)進(jìn)行采樣，采樣時(shí)間為1 min-5 min，采樣時(shí)采樣頭應(yīng)向上方。采樣過(guò)程中被測(cè)樣機(jī)應(yīng)停止運(yùn)行。 5.10在室溫狀態(tài)下，采樣營(yíng)養(yǎng)瓊脂【3】平板必須于采樣后盡快放入36士1培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h-48h，然后計(jì)數(shù)生長(zhǎng)菌落數(shù)(換算成CFU/m3，單位)，換算公式如式：空氣含菌量（CFU/m3）=采樣平板上總菌落數(shù)（CFU）/采樣流量（L/min）采樣時(shí)間（min）1000注：未用的同批培養(yǎng)基應(yīng)各取1份-2份，與試驗(yàn)采樣的樣本同時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)，作為陰性對(duì)照。陰性對(duì)照組不得出現(xiàn)細(xì)菌生長(zhǎng)，否則說(shuō)明培養(yǎng)基有污染，試驗(yàn)無(wú)效，應(yīng)取無(wú)污染的培養(yǎng)基重新進(jìn)行測(cè)試。 5.11試驗(yàn)完畢后，對(duì)氣霧艙空氣做最終消毒。打開(kāi)紫外燈，消毒lh-2h后，開(kāi)啟抽風(fēng)機(jī)，過(guò)濾除菌。 5.12試驗(yàn)應(yīng)重復(fù)進(jìn)行測(cè)試3次（每次試驗(yàn)間隔至少ld），分別計(jì)算除菌率（取3次試驗(yàn)結(jié)果的算術(shù)平均值為最后的試驗(yàn)結(jié)果）。 5.13試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理，得出試驗(yàn)結(jié)論自然消亡率=（對(duì)照組初始時(shí)菌落數(shù)-對(duì)照組結(jié)束時(shí)菌落數(shù)）/對(duì)照組初始時(shí)菌落數(shù)100%抗菌（除菌率）=實(shí)驗(yàn)組初始時(shí)菌落數(shù)（1-自然消亡率）-實(shí)驗(yàn)組結(jié)束時(shí)菌落數(shù)/實(shí)驗(yàn)組初始時(shí)菌落數(shù)（1-自然消亡率）100%6.試驗(yàn)結(jié)論 除菌率大于自然消亡率，則說(shuō)明空氣凈化器有除菌作用，除菌率與自然消亡率差距越大，表示該空氣凈化器除菌效果明顯；若除菌率幾乎等于自然消亡率，則說(shuō)明該空氣凈化器除菌效果不明顯?！?】7級(jí)（萬(wàn)級(jí)）表示空氣中懸浮粒子粒徑的最大上限為：0.5um粒徑粒子數(shù)為352000pc/m3,1um粒徑粒子數(shù)為83200 pc/m3，5um粒徑粒子數(shù)為2930 pc/m3。【2】營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基：取牛肉膏5.0g，蛋白胨10.0g，氯化鈉5.0g，蒸餾水1000ml，將所有溶于蒸餾水中，調(diào)PH為7.2-7.4，分裝，于121度蒸汽滅菌20min備用?！?】瓊脂培養(yǎng)基：取牛肉膏5.0g，蛋白胨10.0g，氯化鈉5.0g，瓊脂15.0g，蒸餾水1000ml，除瓊脂外其他都溶于蒸餾水中，調(diào)PH為7.2-7.4，加入瓊脂，加熱溶解，分裝，于121度蒸汽滅菌20min備用。附件一附件二 FA-1型六級(jí)篩孔撞擊式空氣微生物采樣器 溫濕度/風(fēng)速/風(fēng)壓技術(shù)參數(shù)原理：撞擊法捕獲率：98%采樣流量：28.3L/min電源：AC220V 35W尺寸：撞擊器108192mm主機(jī)200150125mm重量：4kg附件三 噴霧染菌裝置(氣溶膠噴霧器)主要參數(shù)粒譜直徑1 號(hào)噴嘴：10 5um, 用 于 吸 入 治 療 和 免 疫 給藥2 號(hào)噴嘴：20 10um, 用 于 空 氣 消 毒3 號(hào)噴嘴：5 0 1 0 u m , 用 于 表 面 消 毒4 號(hào)噴嘴：1 0 0 1 0 u m , 用 于 表 面 消 毒噴霧時(shí)間：1 號(hào)噴嘴約 30 m i n / L2 號(hào)噴嘴約 20 m i n / L3 號(hào)噴嘴約 10 m i n / L4 號(hào)噴嘴約 5 m i n / L藥液容量A 型1.5LB 、 C 型2.0LA 型制冷最低溫度10 靜風(fēng)噴霧射程 6 m工作溫度( 0 40 ) 主機(jī)尺寸 W D H( 520 142 230 ) mm儀器噪聲 80dB(A)整機(jī)重量約 3.5kg工作電源AC220V 10% ， 50Hz功耗 1000 W附件四 高壓蒸汽滅菌器高壓滅菌的原理是:在密閉的蒸鍋內(nèi)，其中的蒸汽不能外溢，壓力不斷上升，使水的沸點(diǎn)不斷提高，從而鍋內(nèi)溫度也隨之增加。在0.1MPa的壓力下，鍋內(nèi)溫度達(dá)121。在此蒸汽溫度下，可以很快殺死各種細(xì)菌及其高度耐熱的原理。步驟：1. 首先將內(nèi)層滅菌桶取出，再向外層鍋內(nèi)加入適量的水，使水面與三角擱架相平為宜。2.放回滅菌桶，并裝入待滅菌物品。注意不要裝得太擠，以免妨礙蒸汽流通而影響滅菌效果。三角燒瓶與試管口端均不要與桶壁接觸，以免冷凝水淋濕包口的紙而透入棉塞。3.加蓋，并將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層滅菌桶的排氣槽內(nèi)。再以兩兩對(duì)稱的方式同時(shí)旋緊相對(duì)的兩個(gè)螺栓，使螺栓松緊一致，勿使漏氣。4.用電爐或煤氣加熱，并同時(shí)打開(kāi)排氣閥，使水沸騰以排除鍋內(nèi)的冷空氣。待冷空氣完全排盡后，關(guān)上排氣閥，讓鍋內(nèi)的溫度隨蒸汽壓力增加而逐漸上升。當(dāng)鍋內(nèi)壓力升到所需壓力時(shí)，控制熱源，維持壓力至所需時(shí)間。5.滅菌所需時(shí)間到后，切斷電源或關(guān)閉煤氣，讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，當(dāng)壓力表的壓力降至0時(shí)，打開(kāi)排氣閥，旋松螺栓，打開(kāi)蓋子，取出滅菌物品。如果壓力未降到0時(shí)，打開(kāi)排氣閥，就會(huì)因鍋內(nèi)壓力突然下降，使容器內(nèi)的培養(yǎng)基由于內(nèi)外壓力不平衡而沖出燒瓶口或試管口，造成棉塞沾染培養(yǎng)基而發(fā)生污染。6.將取出的滅菌培養(yǎng)基放入 37溫箱培養(yǎng)24小時(shí)，經(jīng)檢查若無(wú)雜菌生長(zhǎng)，即可待用。附表一 試驗(yàn)器材一覽表序號(hào)產(chǎn)品圖片產(chǎn)品名稱/型號(hào)產(chǎn)品簡(jiǎn)單介紹1MOV-211S三洋干熱滅菌器/2恒溫培養(yǎng)箱溫控范圍:室溫 560溫度波動(dòng): 大不于0.5溫度均勻性: 1工作電源:交流220V, 50HZ3高效濾器高效過(guò)濾器主要用于捕集0.5um以下的顆粒灰塵及各種懸浮物。采用超細(xì)玻璃纖維紙作濾料，膠版紙、鋁膜等材料作分割板，與木框鋁合金膠合而成。4溫濕計(jì)溫度范圍0-50濕度范圍0%-100%5冷藏箱密封性好可以進(jìn)行消毒、殺菌6抽風(fēng)機(jī)/7紫光燈用來(lái)消毒、殺菌8硅橡膠條/9小吊扇/10菌落計(jì)數(shù)器將計(jì)數(shù)筆連接到計(jì)數(shù)器主機(jī)上，把培養(yǎng)皿放在白光板上，打開(kāi)白光燈和顯示屏電源，用計(jì)數(shù)筆觸動(dòng)(力量大小以顯示屏能計(jì)數(shù)為準(zhǔn))培養(yǎng)皿中的菌落，LED顯示屏顯示所點(diǎn)過(guò)的細(xì)菌數(shù)量；計(jì)數(shù)完成可用計(jì)數(shù)筆在稿紙上暫記總數(shù)，重新快關(guān)顯示屏電源，LED顯示屏自動(dòng)歸零，二次計(jì)數(shù)與稿紙上一次總數(shù)比較，數(shù)量相同可得較準(zhǔn)確的結(jié)果。本儀器配有減數(shù)系統(tǒng),若不慎誤點(diǎn)菌落,計(jì)數(shù)多出，可利用減數(shù)按鍵向下減數(shù)以恢復(fù)正常的計(jì)數(shù)值11LZJ