VE含量測(cè)定

維生素E的測(cè)定 劉深勇,一、概述 維生素是維持人體正常生命活動(dòng)所必需的一類天然有機(jī)化合物。其種類很多，目前已確認(rèn)的有30余種，其中被認(rèn)為對(duì)維持人體健康和促進(jìn)發(fā)育至關(guān)重要的有20余種。這些維生素結(jié)構(gòu)復(fù)雜，理化性質(zhì)及生理功能各異，有的屬于醇類，有的屬于胺類，有的屬于酯類，還有的屬于酚或醌類化臺(tái)物。,維生素都具有以下共同特點(diǎn)： 這些化合物或其前體化合物都在天然食物中存在；它們不能供給機(jī)體熱能。也不是構(gòu)成組織的基本原料，主要功用是通過(guò)作為輔酶的成份調(diào)節(jié)代謝過(guò)程，需要量極??；它們一般在體內(nèi)不能合成，或合成量不能滿足生理需要，必須經(jīng)常從食物中攝?。婚L(zhǎng)期缺乏任何一種維生素都會(huì)導(dǎo)致相應(yīng)的疾病。,我們?cè)谠u(píng)價(jià)食品的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，開(kāi)發(fā)利用高含量維生素的食品資源，指導(dǎo)人們合理調(diào)整膳食結(jié)構(gòu)，指導(dǎo)制定加工工藝或貯存條件，最大限量地保留各種維生素，還要控制強(qiáng)化食品中加入量，防中毒，都離不開(kāi)分析檢測(cè)工作。維生素分類：脂溶性（A、D、E、K） 水溶性（B族、C）,二、脂溶性V的測(cè)定,VA、VD、VE、VK與類脂物一起存于食物中，攝食時(shí)可吸收，可在體內(nèi)積貯。 脂溶性維生素具有以下理化性質(zhì)： 1.溶解性：脂溶性維生素不溶于水，易溶于脂肪、乙醇、丙酮、氯仿、乙醚、苯等有機(jī)溶劑。 2.耐酸堿性：維生素A、D對(duì)酸不穩(wěn)定， 對(duì)堿穩(wěn)定，維生素E對(duì)堿不穩(wěn)定，但在抗氧化劑存在下或惰性氣體保護(hù)下，也能經(jīng)受堿的煮沸。,耐熱性、耐氧化性 耐熱性 氧化性VA 好，能經(jīng)受煮沸 易被氧化（光、熱促進(jìn)其氧化）VD 好，能經(jīng)受煮沸 不易被氧化VE 好，能經(jīng)受煮沸 在空氣中能慢慢被氧化 （光、熱、堿促進(jìn)其氧化）VK 好，能經(jīng)受煮沸 易被光、氧化劑及醇破壞,維生素E含量測(cè)定應(yīng)該采用何種方法？根據(jù)化學(xué)性質(zhì)：1.可被硫酸鈰定量氧化. 鈰量法2.三氯化鐵反應(yīng)生成的亞鐵離子作用形成有色結(jié)合物間接測(cè)定（三氯化鐵2，2聯(lián)吡啶比色法）,（一）鈰量法 1、原理： VE用硫酸加熱回流，水解成生育酚，用硫酸鈰定量地 氧化為對(duì)一生育醌，過(guò)量的硫酸鈰氧化二苯胺指示劑而指示滴定終點(diǎn)。 終點(diǎn)：亮黃灰紫;空白試驗(yàn). 2、反應(yīng)條件 （1）VE在H2SO4酸性條件下水解為宜。 堿性溶液中游離生育酚易被氧化。Ce(SO4)2液滴定在酸性溶液中進(jìn)行,如在堿性中會(huì)生成堿式鹽而影響測(cè)定。 （2）Ce(SO4)2溶于酸水溶液，不溶于醇,-生育酚溶于酸而不溶于水, 滴定過(guò)程中應(yīng)有一定濃度的乙醇。 （3）本法適用于純度高的VE供試品。,檢查方法 取本品0.10g，加無(wú)水乙醇5ml溶解后，加二苯胺試液1滴，用硫酸鈰滴定液(0.01mol/L)滴定，根據(jù)消耗硫酸鈰滴定液的量來(lái)進(jìn)行計(jì)算,紫外分光光度法原理: 維生素E在堿性溶液中加熱水解生成游離生育酚，并被三氯化鐵氧化為對(duì)生育醌，同時(shí)生成亞鐵離子。后者與聯(lián)吡啶生成血紅色的配離子，再進(jìn)行比色測(cè)定。但由于操作麻煩，專屬性不高，又容易有干擾，現(xiàn)已被GC取代。,含量測(cè)定,根據(jù)物理化學(xué)性質(zhì)：1.紫外分光光度法: 不適用,2.色譜法 方法簡(jiǎn)便快速，專屬性 強(qiáng)。 特別適用于多種維生素 制劑中維生素E的測(cè)定。 3、熒光分光光度法, 氣相色譜法(ChP)六十年代起開(kāi)始研究維生素E的氣相色譜法。GC特點(diǎn),選擇性好 靈敏度高 速度快 分離效能好,氣相色譜法(GLC)測(cè)定維生素E的優(yōu)點(diǎn) 可分離維生素E、其異構(gòu)體及雜質(zhì)，可選擇性地測(cè)定維生素E 。適宜測(cè)定純度不高的維生素E及維生素E制劑。中國(guó)藥典測(cè)定維生素E及維生素E制劑均采用氣相色譜法。,（二）氣相色譜法 1、色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 色譜柱：2m4mmI.D.硼硅玻璃柱， 內(nèi)裝硅藻土（80-100目）或高分子多孔小球 固定相：硅酮（OV-17） 涂布濃度 2%的填充柱 固定液100%二甲基聚硅氧烷 毛細(xì)管柱 載氣：N2， 流速:含2%固定相：以18-20分鐘為宜；含5%固定相：以30- 32分鐘為宜 柱溫：265 內(nèi)標(biāo)：正三十二烷 檢測(cè)器：FID（氫火焰離子化檢測(cè)器）,4、溶液配制： 內(nèi)標(biāo)溶液：正三十二烷的環(huán)己烷溶液（1.0mg/ml） 對(duì)照溶液：對(duì)照品溶解于內(nèi)標(biāo)溶液中 (1mg/ml) 供試品溶液：供試品約50mg，用內(nèi)標(biāo)溶液，溶解并稀釋至50ml,3、供試品測(cè)定 f Ax Ms As Ax：供試品峰面積 F：校正因子 As:內(nèi)標(biāo)物的峰面積,2、系統(tǒng)適用性試驗(yàn)： n 500（按維生素E計(jì)算） R2 （維生素E與內(nèi)標(biāo)物 正三十二烷的分離度 ）,mg=,內(nèi)標(biāo)法,供試液（樣品+內(nèi)標(biāo)）,內(nèi)標(biāo)物,對(duì)照液（對(duì)照+內(nèi)標(biāo)）,是樣品中不存在的物質(zhì)與被測(cè)組分峰靠近能與各組分完全分離與被測(cè)組分的量接近,定量法: 內(nèi)標(biāo)法加校正因子,1,K,A,A,=,內(nèi),對(duì),2,K,A,A,=,內(nèi),樣,實(shí)際工作中的計(jì)算方法,本品含C31H52O3應(yīng)為96.0 102.0%,(二)HPLC用外標(biāo)法可以測(cè)定dl生育酚1、色譜條件：色譜柱：內(nèi)徑4mm,長(zhǎng)1530Cm的不銹鋼柱;填充以粒徑5l0m的十八烷基硅烷鍵合硅膠固定相流動(dòng)相：甲醇-水 (49:1)紫外檢測(cè)器;波長(zhǎng)為292nm維生素E比醋酸維生素E先出峰，且二峰的分離度應(yīng)大于2.6。需做重現(xiàn)性試驗(yàn)，即重復(fù)試驗(yàn)3次，峰高的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于0.8%。,2、測(cè)定方法：取供試品液和對(duì)照品液各20l注入高效液相色譜儀中，記錄峰高HX和Hr3、計(jì)算：供試品中維生素E的量mx(mg)=式中：mr為生育酚對(duì)照品的量，Hx、Hr為生育酚供試品、對(duì)照品中檢測(cè)得峰高。,維生素E的熒光分光光度法,同步掃描直接（內(nèi)源）熒光法原理：維生素大多含有芳香環(huán)結(jié)構(gòu)（大的共軛鍵結(jié)構(gòu)），本身具有較強(qiáng)的天然熒光，因此可以利用內(nèi)源 熒光檢測(cè)維生素。如血液中維生素E295nm激發(fā)，325nm處測(cè)量。,掃描過(guò)程中使激發(fā)波長(zhǎng)（ex）和發(fā)射波長(zhǎng)（em） 彼此間保持固定的波長(zhǎng)間隔em- ex= （本實(shí)驗(yàn)中為常數(shù)40nm ）在保持固定的情況下，同步熒光的信號(hào)強(qiáng)度便與待測(cè)物質(zhì)的濃度成正比,實(shí)驗(yàn)確定的原則:1.能消除或減小溶劑Raman光干擾2.兼顧方法靈敏度3.一般推薦選擇等于（或大略于）Stoke位移的.優(yōu)點(diǎn):有望獲得同步熒光信號(hào)最強(qiáng)、半高寬度最小的單峰同步熒光光譜。,直接295nm激發(fā)，325nm處測(cè)量。則溶劑Raman光譜嚴(yán)重干擾測(cè)定! 同步熒光掃描技術(shù)（可變角同步掃描技術(shù)）,（三）熒光