2016-2017高三生物選修3二輪復(fù)習(xí)練習(xí)題.doc

1（2016上海卷.九）回答下列有關(guān)遺傳信息傳遞與表達的問題。在圖27所示的質(zhì)粒PZHZ11（總長為3.6kb，1kb=1000對堿基因）中，lacZ基因編碼-半乳糖苷酶，后者催化生成的化合物能將白色的大腸桿菌染成藍色。（1）若先用限制酶BamHI切開pZHZ11，然后滅活BamHI酶，再加DNA連接酶進行連接，最后將連接物導(dǎo)入足夠數(shù)量的大腸桿菌細胞中，則含3.1kb質(zhì)粒的細胞顏色為；含3.6kb質(zhì)粒的細胞顏色為。（2）若將兩端分別用限制酶BamHI和BglHI切開的單個目的基因片段置換pZHZ11中0.5kb的BamHI酶切片段，形成4.9kb的重組質(zhì)粒，則目的基因長度為kb。（3）述4.9kb的重組質(zhì)粒有兩種形式，若用BamHI和EcoRI聯(lián)合酶切其中一種，只能獲得1.7kb和3.2kb兩種DNA片段；那么聯(lián)合酶切同等長度的另一種重組質(zhì)粒，則可獲得kb和kb兩種DNA片段。（4）若將人的染色體DNA片段先導(dǎo)入大腸桿菌細胞中克隆并鑒定目的基因，然后再將獲得的目的基因轉(zhuǎn)入植物細胞中表達，最后將產(chǎn)物的藥物蛋白注入小鼠體內(nèi)觀察其生物功能是否發(fā)揮，那么上述過程屬于。A.人類基因工程 B.動物基因工程 C.植物基因工程 D.微生物基因工程【來源】專題16 現(xiàn)代生物科技【答案】（1）白色 白色和藍色/白色或藍色（2）1.8（3）1.4 3.5（4）C【解析】（1）3.1kb質(zhì)粒lacZ基因被破壞，含3.1kb質(zhì)粒的細胞顏色為白色；加DNA連接酶進行連接，被切下的片段可能反向連接，所含3.6kb質(zhì)粒的細胞可能含有正常質(zhì)粒和異常質(zhì)粒，也可能只含有正常質(zhì)粒或異常質(zhì)粒，顏色為白色和藍色（白色或藍色）。（2）pZHZ11中0.5kb的BamHI酶切片段被切除后，剩余3.1kb，將兩端分別用限制酶BamHI和BglHI切開的單個目的基因插入，形成4.9kb的重組質(zhì)粒，則目的基因大小為4.9-3.1=1.8kb。（3）限制酶BamHI和BglHI切割產(chǎn)生的黏性末端可以進行連接，但連接后不能被兩者中的任何一個識別并切割，用BamHI切割4.9kb的重組質(zhì)粒，只有一個切割位點。用BamHI和EcoRI聯(lián)合酶切其中一種，只能獲得1.7kb和3.2kb兩種DNA片段；聯(lián)合酶切同等長度的另一種重組質(zhì)粒，可獲得1.7+1.8=3.5kb和3.2-18=1.4kb兩種DNA片段。（4）題干所述目的是讓人的基因在植物細胞中表達，屬于植物基因工程?！究键c定位】本題主要考查基因工程?！久麕燑c睛】本題考查限制酶和DNA連接酶的使用，屬于較難題。解答本題的關(guān)鍵是明確DNA連接酶在進行連接時，插入的片段可能有正反兩種插入方式。本題68題第二空、70題容易發(fā)生錯誤，錯因在于未能考慮到上述情況。2（2016江蘇卷.33）（9分）下表是幾種限制酶識別序列及其切割位點，圖1、圖2中標(biāo)注了相關(guān)限制酶的酶切位點，其中切割位點相同的酶不重復(fù)標(biāo)注。請回答下列問題：（1）用圖中質(zhì)粒和目的基因構(gòu)建重組質(zhì)粒，應(yīng)選用_兩種限制酶切割，酶切后的載體和目的基因片段，通過_酶作用后獲得重組質(zhì)粒。為了擴增重組質(zhì)粒，需將其轉(zhuǎn)入處于_態(tài)的大腸桿菌。（2）為了篩選出轉(zhuǎn)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌，應(yīng)在篩選平板培養(yǎng)基中添加_，平板上長出的菌落，常用PCR鑒定，所用的引物組成為圖2中_。（3）若BamH I酶切的DNA末端與Bcl I酶切的DNA末端連接，連接部位的6個堿基對序列為 ，對于該部位，這兩種酶 （填“都能”、“都不能”或“只有一種能”）切開。（4）若用Sau3A I切圖1質(zhì)粒最多可能獲得 種大小不同的DNA片段?！緛碓础繉ｎ}16 現(xiàn)代生物科技【答案】（1）BclI和Hind 連接 感受 （2）四環(huán)素 引物甲和引物丙（3） 都不能 （4）7【解析】（1）選擇的限制酶應(yīng)在目的基因兩端存在識別位點，但BamH I可能使質(zhì)粒中啟動子丟失，因此只能選BclI和Hind。酶切后的載體和目的基因片段，通過DNA連接酶酶作用后獲得重組質(zhì)粒。為了擴增重組質(zhì)粒，需將其轉(zhuǎn)入處于感受態(tài)的大腸桿菌。（2）為了篩選出轉(zhuǎn)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌，根據(jù)質(zhì)粒上的抗性基因，應(yīng)在篩選平板培養(yǎng)基中添加四環(huán)素。PCR技術(shù)要求兩種引物分別和目的基因的兩條單鏈結(jié)合，沿相反的方向合成子鏈。（3）根據(jù)BamH I和Bcl I的酶切位點，BamH I酶切的DNA末端與Bcl I酶切的DNA末端連接，連接部位的6個堿基對序列為，與兩種酶的酶切位點均不同。（4）根據(jù)BamH 、Bcl I和Sau3A I的酶切位點，Sau3A I在質(zhì)粒上有三個酶切位點，完全酶切可得到記為A、B、C三種片段，若部分位點被切開，可得到AB、AC、BC、ABC四種片段，所以用Sau3A I切圖1質(zhì)粒最多可能獲得7種大小不同的DNA片段。【考點定位】基因工程，限制酶，連接酶，重組質(zhì)粒【名師點睛】此題是對基因工程的考查，解答本題的關(guān)鍵在于理解重組質(zhì)粒中標(biāo)記基因的作用，在插入目的基因時不能破壞標(biāo)記基因，故選擇限制酶須注意；PCR擴增基因時，兩種引物結(jié)合的部位相反，延伸的方向相反；限制酶具有特異性，不同的限制酶識別不同的序列，判斷某種限制酶能否切割某片段，應(yīng)根據(jù)該片段中是否含有限制酶的識別序列。3（2016課標(biāo)1卷.40）某一質(zhì)粒載體如圖所示，外源DNA插入到Ampr或Tetr中會導(dǎo)致相應(yīng)的基因失活（Ampr表示氨芐青霉素抗性基因，Tetr表示四環(huán)素抗性基因）。有人將此質(zhì)粒載體用BamHI酶切后，與用BamHI酶切獲得的目的基因混合，加入DNA連接酶進行連接反應(yīng)，用得到的混合物直接轉(zhuǎn)化大腸桿菌，結(jié)果大腸桿菌有的未被轉(zhuǎn)化，有的被轉(zhuǎn)化。被轉(zhuǎn)化的大腸桿菌有三種，分別是含有環(huán)狀目的基因、含有質(zhì)粒載體、含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌?；卮鹣铝袉栴}：（1）質(zhì)粒載體作為基因工程的工具，應(yīng)具備的基本條件有_（答出兩點即可）。而作為基因表達載體，除滿足上述基本條件外，還需具有啟動子和終止子。（2）如果用含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基進行篩選，在上述四種大腸桿菌細胞中，未被轉(zhuǎn)化的和僅含有環(huán)狀目的基因的細胞是不能區(qū)分的，其原因是_；并且_和_的細胞也是不能區(qū)分的，其原因是_。在上述篩選的基礎(chǔ)上，若要篩選含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌的單菌落，還需使用含有是_的固體培養(yǎng)基。（3）基因工程中，某些噬菌體經(jīng)改造后可以作為載體，其DNA復(fù)制所需的原料來自于_【來源】專題16 現(xiàn)代生物科技【答案】（1）能夠自我復(fù)制、具有標(biāo)記基因、具有一個至多個限制酶切割位點（答出兩點即可）（2）二者均不含氨芐青霉素抗性基因，在該培養(yǎng)基上都不能生長 含有質(zhì)粒載體 含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒（或答含有重組質(zhì)粒） 二者都含氨芐青霉素抗性基因，在該培養(yǎng)基上均能生長 四環(huán)素 （3）受體細胞【解析】（1質(zhì)粒載體作為基因工程的工具，應(yīng)具備的基本條件有：能夠自我復(fù)制、具有標(biāo)記基因、具有一個至多個限制酶切割位點等。（2）依題意可知，目的基因插入后，導(dǎo)致四環(huán)素抗性基因（Tetr ）失活，而氨芐青霉素抗性基因（Ampr）仍能行使正常功能。如果用含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基進行篩選，在上述四種大腸桿菌細胞中，未被轉(zhuǎn)化的和僅含有環(huán)狀目的基因的細胞，因二者均不含氨芐青霉素抗性基因，在該培養(yǎng)基上都不能生長，所以是不能區(qū)分的；含有質(zhì)粒載體和含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的細胞，因二者都含氨芐青霉素抗性基因，在該培養(yǎng)基上都能生長，因此也是不能區(qū)分的。在上述篩選的基礎(chǔ)上，若要篩選含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌的單菌落，還需使用含有四環(huán)素的固體培養(yǎng)基；因目的基因插入后，導(dǎo)致四環(huán)素抗性基因（Tetr ）失活，含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌在該培養(yǎng)基中不能生長，而含有質(zhì)粒載體的則能正常生長。（3）噬菌體是專門寄生在細菌細胞中的病毒，在侵染細菌時，噬菌體的DNA進入到細菌細胞中，而蛋白質(zhì)外殼仍留在細胞外；在噬菌體的DNA的指導(dǎo)下，利用細菌細胞中的物質(zhì)來合成噬菌體的組成成分，據(jù)此可推知：基因工程中，某些噬菌體經(jīng)改造后可以作為載體，其DNA復(fù)制所需的原料來自于受體細胞?！究键c定位】基因工程【名師點睛】本題以圖文結(jié)合的形式，綜合考查學(xué)生對基因工程技術(shù)的熟記和理解能力。解決此類問題的關(guān)鍵是，熟記并理解相關(guān)的基礎(chǔ)知識、形成知識網(wǎng)絡(luò)，從題圖中挖掘出隱含的信息，據(jù)此結(jié)合每個問題情境進行圖文轉(zhuǎn)換、實現(xiàn)對知識的整合和遷移。4（2016新課標(biāo)卷.40）圖（a）中的三個DNA片段上依次表示出了EcoR I、BamH I和Sau3A I三種限制性內(nèi)切酶的識別序列與切割位點，圖（b）為某種表達載體示意圖（載體上的EcoR I、Sau3A I的切點是唯一的）。根據(jù)基因工程的有關(guān)知識，回答下列問題：（1）經(jīng)BamH I酶切割得到的目的基因可以與上述表達載體被_酶切后的產(chǎn)物連接，理由是_。（2）若某人利用圖（b）所示的表達載體獲得了甲、乙、丙三種含有目的基因的重組子，如圖（c）所示。這三種重組子中，不能在宿主細胞中表達目的基因產(chǎn)物的有_，不能表達的原因是_。（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有_和_，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是_?！緛碓础繉ｎ}16 現(xiàn)代生物科技【答案】（1）Sau3A 兩種梅切割后產(chǎn)生的片段具有相同的黏性末端（2）甲和丙 甲中目的基因插入在啟動子的上游， 丙中目的基因插入在終止子的下游，兩者目的基因均不能轉(zhuǎn)錄（3）EcoliDNA連接酶 T4DNA連接酶 T4DNA連接酶【解析】（1）由于限制酶Sau3A與BamH切割后產(chǎn)生的片段具有相同的黏性末端，所以經(jīng)BamH I酶切割得到的目的基因可以與上述表達載體被Sau3A酶切后的產(chǎn)物連接。（2）啟動子是一段有特殊序列的DNA片段，它是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，有了它才能驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終獲得所需要的蛋白質(zhì)。終止子也是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA短片段，相當(dāng)于一盞紅色信號燈，使轉(zhuǎn)錄在所需要的地方停止下來。在基因表達載體中，啟動子應(yīng)位于目的基因的首端，終止子應(yīng)位于目的基因的尾端，這樣目的基因才能表達。而圖甲中目的基因插入在啟動子的上游，丙中目的基因插入在終止子的下游，兩者目的基因均不能轉(zhuǎn)錄，所以都不能表達目的基因的產(chǎn)物。（3）常見DNA連接酶的有EcoliDNA連接酶和T4DNA連接酶，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是T4DNA連接酶?！究键c定位】基因工程的原理及技術(shù)【名師點睛】1確定限制酶的種類(1)根據(jù)目的基因兩端的限制酶切點確定限制酶的種類應(yīng)選擇切點位于目的基因兩端的限制酶，如圖甲可選擇Pst。不能選擇切點位于目的基因內(nèi)部的限制酶，如圖甲不能選擇Sma。為避免目的基因和質(zhì)粒的自身環(huán)化和隨意連接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，如圖甲也可選擇用Pst和EcoR兩種限制酶(但要確保質(zhì)粒上也有這兩種酶的切點)。(2)根據(jù)質(zhì)粒的特點確定限制酶的種類所選限制酶要與切割目的基因的限制酶相一致，以確保具有相同的黏性末端。質(zhì)粒作為載體必須具備標(biāo)記基因等，所以所選擇的限制酶盡量不要破壞這些結(jié)構(gòu)，如圖乙中限制酶Sma會破壞標(biāo)記基因；如果所選酶的切點不止一個，則切割重組后可能丟失某些片段，若丟失的片段含復(fù)制起點區(qū)，則切割重組后的片段進入受體細胞后不能自主復(fù)制。2基因表達載體中啟動子、終止子的來源(1)如果目的基因是從自然界中已有的物種中分離出來的，在構(gòu)建基因表達載體時，不需要在質(zhì)粒上目的基因的前后端接上特定的啟動子、終止子，因為目的基因中已含有啟動子、終止子。(2)如果目的基因是通過人工方法合成的，或通過cDNA文庫獲得的，則目的基因是不含啟動子和終止子的。若只將基因的編碼序列導(dǎo)入受體生物中，目的基因沒有啟動子、終止子，是無法轉(zhuǎn)錄的，因此，在構(gòu)建基因表達載體時，需要在與質(zhì)粒結(jié)合之前，在目的基因的前后端接上特定的啟動子、終止子。5（2016天津卷.7）人血清白蛋白(HSA) 具有重要的醫(yī)用價值，只能從血漿中制備。下圖是以基因工程技術(shù)獲取重組HSA（rHSA）的兩條途徑。（1）獲取HSA基因，首先需采集人的血液，提取_合成總cDNA，然后以cDNA為模板，采用PCR技術(shù)擴增HSA基因。下圖中箭頭表示一條引物結(jié)合模板的位置及擴增方向，請用箭頭在方框內(nèi)標(biāo)出標(biāo)出另一條引物的位置及擴增方向。（2）啟動子通常具有物種及組織特異性，構(gòu)建在水稻胚乳細胞內(nèi)特異表達rHSA的載體，需要選擇的啟動子是_（填寫字母，單選）。A.人血細胞啟動子 B.水稻胚乳細胞啟動子 C.大腸桿菌啟動子 D.農(nóng)桿菌啟動子 （3）利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化水稻受體細胞的過程中，需添加酚類物質(zhì)，其目的是_。（4）人體合成的初始HSA多肽，需要經(jīng)過膜系統(tǒng)加工形成正確的空間結(jié)構(gòu)才能有活性。與途徑II相比，選擇途徑I獲取rHSA的優(yōu)勢是_。（5）為證明rHSA具有醫(yī)用價值，須確認rHSA與_的生物學(xué)功能一致。【來源】專題16 現(xiàn)代生物科技【答案】（12分）（1）總RNA （或mRNA）（2）B（3）吸引農(nóng)桿菌移向水稻受體細胞，有利于目的基因成功轉(zhuǎn)化（4）水稻是真核生物，具有膜系統(tǒng)，能對初始rHSA多肽進行高效加工（5）HAS【解析】（1）合成總cDNA需提取細胞中所有的mRNA，然后通過逆轉(zhuǎn)錄過程。采用PCR技術(shù)擴增HSA基因時，兩條引物分別與模板鏈的5端結(jié)合，擴增方向相反。（2）根據(jù)啟動子通常具有物種及組織特異性，在水稻胚乳細胞內(nèi)特異表達rHSA，需選擇水稻胚乳細胞啟動子。（3）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化水稻受體細胞的過程中，酚類物質(zhì)可以吸引農(nóng)桿菌移向水稻受體細胞，有利于目的基因的轉(zhuǎn)移。（4）水稻是真核生物，具有膜系統(tǒng)，能對初始rHSA多肽進行高效加工，而大腸桿菌是原核生物，細胞中不具有膜結(jié)構(gòu)的細胞器。（5）為證明rHSA具有醫(yī)用價值，須確認rHSA與天然的HSA生物學(xué)功能一致。【考點定位】本題考查基因工程相關(guān)內(nèi)容?！久麕燑c睛】本題結(jié)合生產(chǎn)rHSA的實例考查目的基因的獲取、基因表達載體的構(gòu)建、轉(zhuǎn)化方法、受體細胞的選擇、目的基因的檢測與鑒定。屬于容易題。解題關(guān)鍵是明確PCR技術(shù)的原理，明確兩條引物結(jié)合位置和合成子鏈的方向相反。6（2016新課標(biāo)2卷.40)下圖表示通過核移植等技術(shù)獲得某種克隆哺乳動物（二倍體）的流程?；卮鹣铝袉栴}：（1）圖中A表示正常細胞核，染色體數(shù)為2n，則其性染色體的組成可為_。過程表示去除細胞核，該過程一般要在卵母細胞培養(yǎng)至適當(dāng)時期再進行，去核時常采用_的方法。代表的過程是_。（2）經(jīng)過多次傳代后，供體細胞中_的穩(wěn)定性會降低，因此，選材時必須關(guān)注傳代次數(shù)。（3）若獲得的克隆動物與供體動物性狀不完全相同，從遺傳物質(zhì)的角度分析其原因是_。（4）與克隆羊“多莉（利）”培養(yǎng)成功一樣，其他克隆動物的成功獲得也證明了_?！緛碓础繉ｎ}16 現(xiàn)代生物科技【答案】（15分）（1）XX或XY 顯微操作（去核法） 胚胎移植（2）遺傳物質(zhì) （3）卵母細胞的細胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)會對克隆動物的形狀產(chǎn)生影響（4）已經(jīng)分化的動物體細胞核具有全能性。【解析】（1）提供體細胞的供體可能為雌性，也可能為雄性，因此圖中A（正常細胞核）的性染色體組成為XX或XY。常采用顯微操作去核法來去除卵母細胞的細胞核。過程表示將早期胚胎移入受體，其過程為胚胎移植。（2）取供體動物的體細胞培養(yǎng)，一般選用傳代10代以內(nèi)的細胞，因為10代以內(nèi)的細胞一般能保持正常的二倍體核型，保證了供體細胞正常的遺傳基礎(chǔ)。超過10代繼續(xù)培養(yǎng)，則其遺傳物質(zhì)（或核型）的穩(wěn)定性會降低。 （3）克隆動物的細胞核基因來自供體，因此大部分性狀與供體相同，但細胞質(zhì)基因來源于受體（或提供卵母細胞的個體），即卵母細胞的細胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)會對克隆動物的形狀產(chǎn)生影響，這就決定了克隆動物的性狀與供體不完全相同。（4）克隆動物的培育采用的是核移植技術(shù)，核移植技術(shù)的原理是：已經(jīng)分化的動物體細胞核具有全能性?！究键c定位】核移植技術(shù)、動物細胞培養(yǎng)技術(shù)、胚胎移植【名師點睛】本題以“獲得某種克隆哺乳動物（二倍體）的流程圖”為情境，綜合考查學(xué)生對核移植技術(shù)、動物細胞培養(yǎng)技術(shù)、胚胎移植的熟記和理解能力。解決此類問題的關(guān)鍵是，熟記并理解相關(guān)的基礎(chǔ)知識、形成知識網(wǎng)絡(luò)，“讀懂”流程圖中的每個箭頭的含義，據(jù)此結(jié)合每個問題情境進行圖文轉(zhuǎn)換、實現(xiàn)對知識的整合和遷移。7（2016海南卷.31）基因工程又稱為DNA重組技術(shù)，回答相關(guān)問題：（1）在基因工程中，獲取目的基因主要有兩大途徑，即_和從_中分離。（2）利用某植物的成熟葉片為材料，同時構(gòu)建cDNA文庫和基因組文庫，兩個文庫相比，cDNA文庫中含有的基因數(shù)目比基因組文庫中的少，其原因是_。（3）在基因表達載體中，啟動子是_聚合酶識別并結(jié)合的部位。若采用原核生物作為基因表達載體的受體細胞，最常用的原核生物是_。（4）將目的基因通過基因槍法導(dǎo)入植物細胞時，常用的攜帶目的基因的金屬顆粒有_和_顆粒?！緛碓础繉ｎ}16 現(xiàn)代生物科技【答案】（1）人工合成 生物材料（每空2分，共4分，其他合理答案可酌情給分）（2）cDNA文庫中只含有葉細胞已轉(zhuǎn)錄（或已表達）的基因，而基因組文庫中含有該植物的全部基因（5分，其他合理答案可酌情給分）（3）RNA（2分） 大腸桿菌（或答細菌）（2分）（4）金粉 鎢粉（每空1分，共2分）【解析】（1）獲取目的基因主要有兩大途徑，即人工合成和從自然界已有的物種中分離。（2）植物的成熟葉片中基因選擇性表達，因此由所有RNA逆轉(zhuǎn)錄形成的cDNA文庫中只含有葉細胞已轉(zhuǎn)錄（或已表達）的基因，而基因組文庫中含有該植物的全部基因。（3）在基因表達載體中，啟動子是RNA聚合酶識別并結(jié)合的部位。采用原核生物作為基因表達載體的受體細胞，由于易于培養(yǎng)，最常選用大腸桿菌（或細菌）。（4）將目的基因通過基因槍法導(dǎo)入植物細胞時，常用的攜帶目的基因的金屬顆粒有金粉 和鎢粉顆粒?！究键c定位】基因工程【名師點睛】（1）目的基因的獲取有從基因文庫中獲取和人工合成兩類方法。（2）基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因。（3）目的基因?qū)胫参锛毎Ｓ棉r(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；導(dǎo)入動物細胞常用顯微注射技術(shù)，導(dǎo)入微生物細胞常用感受態(tài)細胞法。8(2016屆江蘇省四校高三5月聯(lián)考生物試卷）下面是將乙肝病毒控制合成病毒表面主蛋白基因HBsAg導(dǎo)入巴斯德畢赤酵母菌生產(chǎn)乙肝疫苗的過程及有關(guān)資料，請分析回答下列問題。資料1 巴斯德畢赤酵母菌是一種甲基營養(yǎng)型酵母菌，能將甲醇作為其唯一碳源，此時AOX1基因受到誘導(dǎo)而表達5AOX1和3AOX1(TT)分別是基因AOX1的啟動子和終止子。資料2 巴斯德畢赤酵母菌體內(nèi)無天然質(zhì)粒，所以科學(xué)家改造出了圖1所示的pPIC9K質(zhì)粒用作載體，其與目的基因形成的重組質(zhì)粒經(jīng)酶切后可以與酵母菌染色體發(fā)生同源重組，可以將目的基因整合于染色體中以實現(xiàn)表達。（1）如果要將HBsAg基因和pPIC9K質(zhì)粒重組，應(yīng)該在HBsAg基因兩側(cè)的A和B位置接上 、 限制酶識別序列， 這樣設(shè)計的優(yōu)點是避免質(zhì)粒和目的基因自身環(huán)化。（2）酶切獲取HBsAg基因后，需用 將其連接到pPIC9K質(zhì)粒上，形成重組質(zhì)粒，并將其導(dǎo)入大腸桿菌以獲取 。（3）步驟3中應(yīng)選用限制酶 來切割重組質(zhì)粒獲得重組DNA，然后將其導(dǎo)入巴斯德畢赤酵母菌細胞。（4）為了確認巴斯德畢赤酵母菌轉(zhuǎn)化是否成功，在培養(yǎng)基中應(yīng)該加入卡拉霉素以便篩選，轉(zhuǎn)化后的細胞中是否含有HBsAg基因，可以用 方法進行檢測。（5）轉(zhuǎn)化的酵母菌在培養(yǎng)基上培養(yǎng)一段時間后，需要向其中加入 以維持其生活，同時誘導(dǎo)HBsAg基因表達。（6）與大腸桿菌等細菌相比，用巴斯德畢赤酵母菌細胞作為基因工程的受體細胞，其優(yōu)點是在蛋白質(zhì)合成后，細胞可以對其進行 并分泌到細胞外，便于提取?！緛碓础繉ｎ}16 現(xiàn)代生物科技【答案】 (1)SnaB Avr (2)DNA連接酶 大量重組質(zhì)粒（重組質(zhì)粒不得分） (3)Bgl (4)DNA分子雜交 (5)甲醇 (6)加工(修飾)【解析】 (1) 重組質(zhì)粒上的目的基因若要表達，目的基因的首端和尾端需含有啟動子和終止子。而SnaB、Avr識別的序列在啟動子與終止子之間，只要在目的基因兩側(cè)的A和B位置分別接上這兩種序列，并用SnaB、Avr這兩種限制酶對質(zhì)粒和目的基因同時進行切割，便會各自出現(xiàn)相同的黏性末端，便于重組與表達，同時可防止自身環(huán)化，因此在HBsAg基因兩側(cè)的A和B位置應(yīng)接上SnaB和Avr限制酶的識別序列。(2) 用DNA連接酶可將切割后的HBsAg基因和pPIC9K質(zhì)粒連接成重組質(zhì)粒；將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌體內(nèi)的目的是：利用大腸桿菌的無性繁殖，短時間內(nèi)獲取大量的重組質(zhì)粒。(3) 重組DNA的兩側(cè)分別是啟動子和終止子，除Bgl外，其他限制酶均會破壞含有啟動子、終止子的目的基因。所以步驟3中應(yīng)選用限制酶Bgl來切割重組質(zhì)粒獲得重組DNA，然后將其導(dǎo)入巴斯德畢赤酵母菌細胞。 (4) 可用DNA分子雜交技術(shù)檢測巴斯德畢赤酵母菌內(nèi)是否導(dǎo)入了目的基因。(5) 資料1顯示，甲醇為該酵母菌的唯一碳源，同時可誘導(dǎo)HBsAg基因表達，據(jù)此可知：轉(zhuǎn)化的酵母菌在培養(yǎng)基上培養(yǎng)一段時間后，需要向其中加入甲醇以維持其生活，同時誘導(dǎo)HBsAg基因表達。(6) 大腸桿菌等細菌為原核生物，細胞內(nèi)沒有對分泌蛋白進行加工修飾的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，而巴斯德畢赤酵母菌為真核生物，其細胞內(nèi)有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體等復(fù)雜的細胞器。所以與大腸桿菌等細菌相比，用巴斯德畢赤酵母菌細胞作為基因工程的受體細胞，其優(yōu)點是在蛋白質(zhì)合成后，細胞可以對其進行加工修飾并分泌到細胞外，便于提取?！究键c定位】基因工程、微生物的培養(yǎng)、原核細胞與真核細胞。9(2016屆江西九江高三下第三次模擬考試?yán)砭C生物試卷）基因疫苗是指將編碼外源性抗原的基因?qū)肴撕蛣游矬w內(nèi)，讓其在宿主細胞中表達抗原蛋白,誘導(dǎo)機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答。某科研所計劃采用基因工程和胚胎工程技術(shù)培育具有口蹄疫免疫特性的高產(chǎn)奶牛。請回答下列問題：（1）基因表達載體的構(gòu)建是基因工程的核心，一個完整的基因表達載體至少包括啟動子、_、_、_。啟動子位于基因的_，有了它才可以驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄。（2）制備基因疫苗的基因可以從基因文庫中獲取，基因文庫實際上是含有某種生物不同基因的許多DNA片段的_群體。（3）檢測高產(chǎn)奶牛體內(nèi)是否出現(xiàn)口蹄疫病毒的抗原蛋白，在分子水平上的檢測方法是_。（4）胚胎工程最后一道工序的實質(zhì)是_。（5）為提高胚胎的利用率，可以采用胚胎分割技術(shù),應(yīng)該選用_的桑椹胚或囊胚進行分割?！緛碓础繉ｎ}16 現(xiàn)代生物科技【答案】(15分,除注明外,每空2分）(1）目的基因 標(biāo)記基因 終止子(順序可顛倒） 首端(1分） （2）受體菌(3）抗原一抗體雜交，（4）早期胚胎在相同在相同生理環(huán)境條件下空間位置的轉(zhuǎn)移 （5）發(fā)育良好、形態(tài)正?！窘馕觥浚?）一個完整的基因表達載體至少包括啟動子、終止子、標(biāo)記基因和目的基因。啟動子是位于基因的首端，它是驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄。（2）基因文庫實際上是含有某種生物不同基因的許多DNA片段的受體菌群體。（3）檢測是否出現(xiàn)抗原蛋白，在分子水平上的檢測方法是抗原-抗體雜交，如果出現(xiàn)雜交帶說明表達成功。（4）胚胎工程最后一道工序是胚胎移植，實質(zhì)是早期胚胎在相同在相同生理環(huán)境條件下空間位置的轉(zhuǎn)移。（5）胚胎分割應(yīng)采用發(fā)育良好、形態(tài)正常的桑椹胚或囊胚進行分割，要注意均等分割?！究键c定位】本題考查基因工程相關(guān)知識，意在考察考生對知識點的識記理解掌握程度?！久麕燑c睛】易錯警示 規(guī)避與基因工程操作有關(guān)的7個失分點(1)目的基因的插入位點不是隨意的：基因表達需要啟動子與終止子的調(diào)控，所以目的基因應(yīng)插入到啟動子與終止子之間的部位。(2)基因工程操作過程中只有第三步(將目的基因?qū)胧荏w細胞)沒有堿基互補配對現(xiàn)象。(3)原核生物作為受體細胞的優(yōu)點：繁殖快、多為單細胞、遺傳物質(zhì)相對較少。(4)轉(zhuǎn)化的實質(zhì)是目的基因整合到受體細胞染色體基因組中。(5)一般情況下，用同一種限制酶切割質(zhì)粒和含有目的基因的片段，但有時可用兩種限制酶分別切割質(zhì)粒和目的基因，這樣可避免質(zhì)粒和質(zhì)粒之間、目的基因和目的基因之間的連接。(6)不熟悉標(biāo)記基因的種類和作用：標(biāo)記基因的作用篩選、檢測目的基因是否導(dǎo)入受體細胞，常見的有抗生素抗性基因、發(fā)光基因(表達產(chǎn)物為帶顏色的物質(zhì))等。(7)還應(yīng)注意的問題有：基因表達載體中，啟動子(DNA片段)起始密碼子(RNA)；終止子(DNA片段)終止密碼子(RNA)?；虮磉_載體的構(gòu)建是最核心、最關(guān)鍵的一步，在體外進行。10(2016屆寧夏石嘴山第三中學(xué)高三下第四次模擬生物試卷）I.我國科研人員克隆了100多個重要基因，取得了抗蟲棉、抗蟲玉米、耐除草劑大豆等一批重大轉(zhuǎn)基因成果。請回答下列問題：（1）抗蟲棉中轉(zhuǎn)入的Bt毒蛋白基因是從蘇云金(芽孢)桿菌中分離出來的，該基因編碼的Bt蛋白對哺乳動物 （填“有”或“無”）毒害作用。（2）每一種Bt毒蛋白的殺蟲范圍有限，對現(xiàn)有的毒蛋白進行 ，使其具有更廣殺蟲范圍，屬于 （生物工程）的范圍。（3）隨著轉(zhuǎn)基因成果的不斷涌現(xiàn)，人們對轉(zhuǎn)基因生物的安全性的關(guān)注與日俱增，在食物安全、生物安全和 三個方面發(fā)生了激烈爭論。II.關(guān)注生態(tài)工程的建設(shè)。（1）與傳統(tǒng)的工程相比,生態(tài)工程是一類少消耗、 、可持續(xù)的工程體系。（2）“無廢棄物農(nóng)業(yè)”是我國古代傳統(tǒng)農(nóng)業(yè)的輝煌成就之一,也是生態(tài)工程最早和最生動的一種模式，該模式主要遵循生態(tài)工程的 原理。我國西北一些地區(qū)年降雨量少，適宜種植灌木和草，卻被硬性規(guī)定種植屬于喬木的楊樹，致使許多地方的楊樹長成半死不活狀，結(jié)果防護林成了殘敗的“灰色長城”。其失敗的原因主要是違背了 原理。（3）甘肅隴南地區(qū)的“九子登科”模式是哪種生態(tài)工程建設(shè)的實例？（ ）A. 草原生態(tài)恢復(fù)工程 B.城市環(huán)境工程C. 小流域綜合治理生態(tài)工程 D.濕地生態(tài)恢復(fù)工程【來源】專題16 現(xiàn)代生物科技【答案】（15分，除標(biāo)注外，每空2分）.（1） 無 （2）改造 蛋白質(zhì)工程 （3）環(huán)境安全.（1）多效益 （2）物質(zhì)循環(huán)再生 協(xié)調(diào)與平衡 （3）C（1分）【解析】.（1）Bt毒蛋白基因編碼的Bt蛋白，在哺乳動物的消化道中會被消化分解，因此對哺乳動物無毒害作用。（2）對現(xiàn)有的毒蛋白進行改造，使其具有更廣殺蟲范圍，屬于蛋白質(zhì)工程的范疇。（3）人們對轉(zhuǎn)基因生物的安全性的關(guān)注與日俱增，在食物安全、生物安全和環(huán)境安全三個方面發(fā)生了激烈爭論。.（1）與傳統(tǒng)的工程相比,生態(tài)工程是一類少消耗、多效益、可持續(xù)的工程體系。（2）“無廢棄物農(nóng)業(yè)”主要遵循生態(tài)工程的物質(zhì)循環(huán)再生原理。我國西北一些地區(qū)年降雨量少，適宜種植灌木和草，卻被硬性規(guī)定種植屬于喬木的楊樹，致使許多地方的楊樹長成半死不活狀，結(jié)果防護林成了殘敗的“灰色長城”。其失敗的原因主要是違背了協(xié)調(diào)與平衡原理。（3）甘肅隴南地區(qū)的“九子登科”模式是小流域綜合治理生態(tài)工程建設(shè)的實例，C項正確，A、B、D三項均錯誤?！究键c定位】基因工程、蛋白質(zhì)工程、轉(zhuǎn)基因生物安全性的爭論、生態(tài)工程?！久麕燑c睛】本題以綜合考查學(xué)生對基因工程、蛋白質(zhì)工程、轉(zhuǎn)基因生物的安全性、生態(tài)工程的知識的理解及其掌握情況。解答本題的關(guān)鍵是對有關(guān)知識點做到準(zhǔn)確記憶并系統(tǒng)地全面地構(gòu)建知識網(wǎng)絡(luò)。11(2016屆黑龍江大慶第一中學(xué)高三第三次模擬考試?yán)砜粕镌嚲恚┫旅媸抢媚躺窖蛉橄偕锓磻?yīng)器制備藥用白蛋白的流程圖，請回答下列問題：（1）若要大量獲得目的基因，可使用 擴增白蛋白基因，通過構(gòu)建的重組表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和 、復(fù)制原點等部分。該重組表達載體導(dǎo)入的受精卵性染色體組成應(yīng)為 。（2）如果需要通過采集到更多的卵子，常用的激素是 ；通過采集的精子需 后才能進行受精作用。在體外培養(yǎng)受精卵時，除了給予一定量的O2以維持細胞呼吸外，還需要提供 （氣體）以維持 。（4）為使能成功進行，需要對奶山羊C進行 處理，使之與供體的生理狀況保持相同。【來源】專題16 現(xiàn)代生物科技【答案】（1）PCR技術(shù) 標(biāo)記基因 XX（2）促性腺激素 獲能（3）C02 培養(yǎng)液的PH（4）同期發(fā)情 【解析】試題分析：（1）目的基因常用PCR技術(shù)進行擴增?；虮磉_載體包括目的基因、標(biāo)記基因、啟動子和終止子四個部分。最終白蛋白基因表達產(chǎn)物在雌性動物的乳汁中提取，所以該重組表達載體導(dǎo)入的受精卵性染色體組成應(yīng)為XX。（2）對供體母畜注射促性腺激素可促使其超數(shù)排卵，從而集到更多的卵子；對精子需要進行獲能處理后才能進行受精作用。（3）動物細胞培養(yǎng)時，需要一定的氣體環(huán)境，除了給予一定量的O2以維持細胞呼吸外，還需要提供CO2氣體以維持培養(yǎng)液（基）的pH。（4）在進行胚胎移植時需要對受體母牛與供體母牛進行同期發(fā)情處理，使它們屬于相同的生理狀態(tài)?？键c：基因工程、胚胎工程【名師點睛】分析題圖：圖示是利用嶗山奶山羊乳腺生物反應(yīng)器制備藥用白蛋白的流程圖，其中表示卵細胞的采集和培養(yǎng)；表示精子的采集和獲能；表示基因表達載體的構(gòu)建；表示將目鏡基因?qū)胧荏w細胞；表示胚胎移植。12(2016屆湖北省高三下學(xué)期5月模擬考試 理綜生物試卷）我國擁有自主知識產(chǎn)權(quán)的抗蟲棉，是將蘇云金芽孢桿菌的Bt毒蛋白基因?qū)氲矫藁ǖ娜~肉細胞中培育而成?；卮鹣铝袉栴}：（1）在該基因工程中，Bt毒蛋白基因?qū)儆?，離體棉花葉肉細胞屬于 。Bt毒蛋白基因可從基因組文庫中獲取，也可從cDNA文庫中獲取，含有基因中啟動子的文庫是 文庫。（2）獲取的Bt毒蛋白基因需要與載體結(jié)合構(gòu)建基因表達載體。在基因工程中使用的載體有質(zhì)粒，入噬菌體的衍生物、 等，其中質(zhì)粒的化學(xué)成分是 。（3）科學(xué)家最初做抗蟲棉試驗時，雖已經(jīng)檢測出棉花植株中含有抗蟲基因，但讓棉蟲食用棉花葉片時，棉鈴蟲并沒有被殺死，這說明Bt毒蛋白基因 。為此，科學(xué)家對棉植株中的Bt毒蛋白基因進行了修飾，結(jié)果食用了棉葉的棉鈴蟲中毒死亡了，從變異類型分析，這種對Bt毒蛋白基因的修飾屬于 。（4）轉(zhuǎn)基因植物存在一定的安全性問題，為避免Bt毒蛋白基因通過花粉傳播進入其它植物，一般將Bt毒蛋白基因轉(zhuǎn)入棉花細狍的 （填“細咆核”或“葉綠體”）。【來源】專題16 現(xiàn)代生物科技【答案】（1）目的基因 受體細胞 基因組（2）動植物病毒 DNA（3）沒有成功表達 基因突變（4）葉綠體【解析】試題分析：（1）在該基因工程中，Bt毒蛋白基因?qū)儆谀康幕?，離體棉花葉肉細胞屬于受體細胞Bt毒蛋白基因可從基因組文庫中獲取，也可從cDNA文庫中獲取，含有基因中啟動子的文庫是基因組文庫。（2）在基因工程中使用的載體有質(zhì)粒，入噬菌體的衍生物、動植物病毒等，其中質(zhì)粒的化學(xué)本質(zhì)是小型環(huán)狀DNA。（3）科學(xué)家最初做抗蟲棉試驗時，雖已經(jīng)檢測出棉花植株中含有抗蟲基因，但讓棉蟲食用棉花葉片時，棉鈴蟲并沒有被殺死，這說明Bt毒蛋白基因沒有成功表達因為目的基因能否表達受到基因結(jié)構(gòu)中非編碼區(qū)上游的調(diào)控序列的控制，因此，要想解除非編碼區(qū)上游對基因表達的抑制，必須對非編碼區(qū)上游的調(diào)控序列進行修飾，所以從變異的角度分析，基因修飾使基因得到表達屬于基因突變。（4）由于植物的花粉中含有細胞核，基本不含細胞質(zhì)，因此為避免Bt毒蛋白基因通過花粉傳播進入其它植物，一般將Bt毒蛋白基因轉(zhuǎn)入棉花細狍的葉綠體中?？键c：基因工程的原理及技術(shù)13(2016屆福建福州一中高三下模擬考試（5月質(zhì)檢）生物卷）基因打靶技術(shù)是建立在基因同源重組技術(shù)以及胚胎干細胞技術(shù)的基礎(chǔ)上而發(fā)展起來的一種分子生物學(xué)技術(shù)。結(jié)合圖示回答問題。注：neor是新霉素抗性基因；tk基因的表達可以使無毒的丙氧鳥苷代謝為毒性物質(zhì)，導(dǎo)致細胞死亡。（1）將目的基因和與細胞內(nèi)靶基因同源的DNA 片段都重組到 上，構(gòu)建打靶載體（基因表達載體）。（2）打靶載體測序驗證正確后，利用 酶，將之線性化，以提高重組率。通過 技術(shù)導(dǎo)入胚胎干細胞，這樣打靶載體與細胞內(nèi)靶基因同源的區(qū)段就有幾率發(fā)生同源重組。（3）為了篩選發(fā)生同源重組的細胞，可在培養(yǎng)液中加入 。最后還需要通過 技術(shù)鑒定同源重組的細胞（去除靶基因），將這樣的細胞通過 培養(yǎng)后，獲得大量打靶成功的細胞。其中，暫時不用的細胞進行液氮（或冷凍）保存。（4）將打靶成功的細胞注射入小鼠囊胚，移植到同種、 的母鼠體內(nèi)，一段時間后對受體母鼠進行 檢查，確保其生下嵌合小鼠。這種嵌合體小鼠長大后，體內(nèi)同時存在被“修飾”過的基因和未被“修飾”的基因。如果某些小鼠的 （選填“體細胞”、“生殖細胞”）恰巧被“修飾”過了，則它們的雜交后代中，就可能出現(xiàn)基因完全被“修飾”過的小鼠。【來源】專題16 現(xiàn)代生物科技【答案】（1）載體（或質(zhì)粒）（1分）（2）限制 （2分） 顯微注射（2分）（3）新霉素和丙氧鳥苷（2分） DNA分子雜交（2分 ） 動物細胞（或克?。?分 ） （4）生理狀態(tài)相同（或經(jīng)同期發(fā)情）（2分） 妊娠（1分） 生殖細胞（1分）【解析】（1）構(gòu)建打靶載體（基因表達載體），需要將目的基因和與細胞內(nèi)靶基因同源的DNA 片段都重組到載體（或質(zhì)粒）上。（2）將環(huán)狀的打靶載體線性化，需利用限制酶進行切割，通過顯微注射技術(shù)將其導(dǎo)入胚胎干細胞。（3）在同源重組時，tk基因?qū)⒈磺谐鴣G失，但新霉素抗性基因得以保留且結(jié)構(gòu)完整，所以為了篩選發(fā)生同源重組的細胞，可在培養(yǎng)液中加入新霉素和丙氧鳥苷。鑒定去除靶基因的同源重組的細胞，可通過DNA分子雜交技術(shù)。將這樣的細胞通過動物細胞培養(yǎng)后，獲得大量打靶成功的細胞。（4）胚胎移植時，需將含有打靶成功細胞的囊胚移植到同種、生理狀態(tài)相同（或經(jīng)同期發(fā)情）的母鼠體內(nèi)，一段時間后對受體母鼠進行妊娠檢查，確保其生下嵌合小鼠。生殖細胞參與新個體的形成過程，如果某些小鼠的生殖細胞恰巧被“修飾”過了，則它們的雜交后代中，就可能出現(xiàn)基因完全被“修飾”過的小鼠?！究键c定位】基因工程、動物細胞培養(yǎng)、胚胎工程。14(2016屆海南中學(xué)高三第九次月考生物試卷）應(yīng)用生物工程技術(shù)能獲得人們需要的生物新品種或新產(chǎn)品，請據(jù)圖回答下列問題：（1）在培育轉(zhuǎn)基因牛生成人生長激素的過程中，過程需要選取牛的 作為受體細胞，導(dǎo)入成功后經(jīng)培育得到早期胚胎，在移植入受體母牛子宮之前，必須對胚胎進行性別鑒定，一般取處于囊胚期的 細胞進行檢測。（2）在基因表達載體中，人生長激素基因的首端必須含有使其能在牛的乳腺細胞中特異性表達的 ，人生長激素基因在人體和牛體內(nèi)出現(xiàn)相同表達結(jié)果的原因是 。從分子水平檢測轉(zhuǎn)基因牛是否培育成功的方法是 。（3）prG能激發(fā)細胞不斷分裂，通過基因工程導(dǎo)入該調(diào)控基因來制備單克隆抗體，II最可能是 細胞，III代表的細胞具有 的特點?！緛碓础繉ｎ}16 現(xiàn)代生物科技【答案】（1）受精卵 滋養(yǎng)層 （2）乳腺蛋白基因的啟動子 所有生物共用一套遺傳密碼 抗原抗體雜交法 （3）已免疫的B淋巴（或漿細胞） 既能產(chǎn)生特定抗體，又能無限增殖【解析】（1）目的基因?qū)雱游锏氖荏w細胞，一般選取受精卵。對胚胎進行性別鑒定，一般取處于囊胚期的滋養(yǎng)層細胞進行檢測。（2）希望生長激素基因在轉(zhuǎn)基因奶牛的乳腺細胞內(nèi)表達并隨乳汁分泌出來，所以通常在生長激素基因的首端連接上能在乳腺細胞內(nèi)表達并分泌的乳腺蛋白基因的啟動子。人生長激素基因在人體和牛體內(nèi)出現(xiàn)相同表達結(jié)果的原因是所有生物共用一套遺傳密碼。從分子水平檢測轉(zhuǎn)基因牛是否培育成功的方法是抗原抗體雜交法，以檢測目的基因是否在轉(zhuǎn)基因牛在體內(nèi)成功表達。（3）由于最終是能分泌產(chǎn)生單克隆抗體，推測其分泌細胞應(yīng)是漿細胞或者已免疫的B淋巴細胞。III代表的細胞具有既能產(chǎn)生特定抗體，又能無限增殖的特點?！究键c定位】基因工程的原理及技術(shù)（）、細胞融合與單克隆抗體（）、胚胎工程的應(yīng)用（）15(2016屆黑龍江哈爾濱六中高三第三次模擬理綜生物試卷）哈爾濱啤酒已經(jīng)有100多年的歷史，進入新世紀(jì)，技術(shù)人員將能使啤酒產(chǎn)生豐富泡沫的LTP1基因植入啤酒酵母中，使其產(chǎn)生LTP1蛋白，釀出泡沫豐富的啤酒，下圖為轉(zhuǎn)基因啤酒酵母的生產(chǎn)過程，據(jù)此回答相關(guān)問題：（1）形成C需要的工具酶是 ，這兩種酶作用的化學(xué)鍵均為 。（2）結(jié)構(gòu)B是來自大腸桿菌細胞內(nèi)的質(zhì)粒，它的化學(xué)本質(zhì)是 ，在結(jié)構(gòu)B上標(biāo)記基因的作用是 。（3）利用DNA分子雜交技術(shù)可檢測C中是否插入了目的基因，該過程中需用 作探針；轉(zhuǎn)基因啤酒酵母培育成功的標(biāo)志是 。（4）LTP1基因通常可以從基因文庫中獲取，含有一種生物所有基因的文庫稱為 ，獲得LTP1基因后可以利用 技術(shù)進行擴增。（5）人們對轉(zhuǎn)基因生物的安全性的爭論：主要有 安全、 安全和 安全三個方面的激烈爭論?！緛碓础繉ｎ}16 現(xiàn)代生物科技【答案】（1）限制酶和DNA連接酶 磷酸二酯鍵（2）小型環(huán)狀DNA 鑒別受體細胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的受體細胞篩選出來（3）放射性同位素標(biāo)記的目的基因或熒光分子標(biāo)記的目的基因 細胞中合成了LTP1蛋白（4）基因組文庫 PCR（5）生物 食物 環(huán)境（三者無順序）【解析】（1）C是重組質(zhì)粒，在構(gòu)建表達載體時需要用限制酶對目的基因和運載體進行切割，然后用DNA連接酶將其連接，故是限制酶和DNA連接酶，它們作用的化學(xué)鍵都是磷酸二酯鍵。（2）質(zhì)粒的化學(xué)本質(zhì)是小型的環(huán)狀DNA分子。標(biāo)記基因是鑒別受體細胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的受體細胞篩選出來。（3）檢測是否插入目的基因，可以用放射性同位素標(biāo)記的目的基因或熒光分子標(biāo)記的目的基因作為探針。轉(zhuǎn)基因啤酒酵母培育成功的標(biāo)志是細胞中合成了LTP1蛋白。（4）含一種生物所有基因的文庫稱為基因組文庫，部分的是cDNA文庫。獲得LTP1基因后可以利用PCR技術(shù)進行擴增。（5）人們對轉(zhuǎn)基因生物的安全性主要集中在生物安全、食物安全和環(huán)境安全三個方面?！究键c定位】本題考查基因工程相關(guān)知識，意在考察考生對知識點的識記理解掌握程度?！久麕燑c睛】易錯警示 規(guī)避與基因工程操作有關(guān)的7個失分點(1)目的基因的插入位點不是隨意的：基因表達需要啟動子與終止子的調(diào)控，所以目的基因應(yīng)插入到啟動子與終止子之間的部位。(2)基因工程操作過程中只有第三步(將目的基因?qū)胧荏w細胞)沒有堿基互補配對現(xiàn)象。(3)原核生物作為受體細胞的優(yōu)點：繁殖快、多為單細胞、遺傳物質(zhì)相對較少。(4)轉(zhuǎn)化的實質(zhì)是目的基因整合到受體細胞染色體基因組中。(5)一般情況下，用同一種限制酶切割質(zhì)粒和含有目的基因的片段，但有時可用兩種限制酶分別切割質(zhì)粒和目的基因，這樣可避免質(zhì)粒和質(zhì)粒之間、目的基因和目的基因之間的連接。(6)不熟悉標(biāo)記基因的種類和作用：標(biāo)記基因的作用篩選、檢測目的基因是否導(dǎo)入受體細胞，常見的有抗生素抗性基因、發(fā)光基因(表達產(chǎn)物為帶顏色的物質(zhì))等。(7)還應(yīng)注意的問題有：基因表達載體中，啟動子(DNA片