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文檔簡介

透明軟骨 彈性軟骨 胞間連絲 油鏡的番茄表皮細(xì)胞的胞間連絲 查效兵 李云峰組 實驗五植物細(xì)胞骨架顯示與觀察 問題 1 什么叫細(xì)胞骨架 2 廣義的細(xì)胞骨架指什么 3 狹義的細(xì)胞骨架又指什么 4 20 25nm 6 7nm 8 11nm 一 目的與要求 1 了解植物細(xì)胞骨架制片方法和其成分顯示的原理2 掌握考馬斯亮藍(lán)R250染色方法3 觀察細(xì)胞骨架在細(xì)胞中的分布情況 二 原理 細(xì)胞骨架指細(xì)胞質(zhì)中縱橫交錯的纖維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu) 可分為微管 微絲和中間纖維 它對細(xì)胞形態(tài)維持 細(xì)胞生長 運動 分裂 分化和物質(zhì)的運輸?shù)绕鹬匾淖饔?當(dāng)細(xì)胞用適當(dāng)濃度的Triton X 100處理時 可將質(zhì)膜中和細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)溶解 而骨架系統(tǒng)的蛋白質(zhì)不被破壞 經(jīng)固定和考馬斯亮藍(lán)R250染色后 可使骨架蛋白著色而被顯示 三 材料 器材與試劑 1 材料新鮮洋蔥鱗莖的內(nèi)表皮2 器材滴管 載玻片 蓋玻片 鑷子 剪刀 10mL小燒杯 顯微鏡 恒溫水浴鍋等3 試劑1 M 緩沖液 咪唑 pH6 7 50mM MgCl20 5mM KCl50mM EGTA 乙二醇雙 氨基乙基 醚四乙酸 1mM 巰基乙醇或DTT 二硫蘇糖醇 1mM EDTA0 1mM 2 磷酸緩沖液 PBS 3 1 Triton X 100 用M 緩沖液配制 4 0 2 考馬斯亮藍(lán)R250 考馬斯亮藍(lán)R2500 2g 甲醇46 5mL 冰醋酸7 0mL 蒸餾水46 5mL5 植物細(xì)胞固定液 5ml38 甲醛 5ml冰醋酸 90ml70 酒精和5ml甘油 四 實驗步驟 1 取材 內(nèi)表皮約0 5cm2 放在盛有PBS緩沖液的小燒杯中 浸泡處理10min 2 抽提 吸去PBS緩沖液 取2ml1 Triton 100入小燒杯中 置于37 恒溫水浴鍋中保溫30min 3 沖洗 吸去1 Triton X 100 用M緩沖液輕洗三次 每次5min 4 固定 加植物固定液2ml固定30min5 沖洗 棄去固定液后 用PBS緩沖液清洗三次 每次1 2min6 染色 吸去PBS 滴1滴0 2考馬斯亮藍(lán)R250染液染色5min7 制片 倒去染液 用蒸餾水清洗三次 將標(biāo)本平鋪在載玻片上 再蓋上蓋玻片 8 觀察 五 實驗結(jié)果 繪出洋蔥鱗葉內(nèi)表皮細(xì)胞內(nèi)

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