植物組織培養(yǎng)具備的基本培養(yǎng)條件.doc

植物組織培養(yǎng)具備的6大基本培養(yǎng)條件在植物組織培養(yǎng)中溫度、光照、濕度等各種環(huán)境條件，培養(yǎng)基組成、PH值、滲透壓等各種化學(xué)環(huán)境條件都是影響組織培養(yǎng)育苗的生長和發(fā)育重要因素。一、溫度（temperature)因?yàn)闇囟仁侵参锝M織培養(yǎng)中的重要因素，所以植物組織培養(yǎng)在最適宜的溫度下生長分化才能表現(xiàn)良好，大多數(shù)植物組織培養(yǎng)都是在2327之間進(jìn)行，一般采用252。低于15時(shí)培養(yǎng)，植物組織會(huì)表現(xiàn)生長停止，高于35時(shí)對(duì)植物生長不利。但是，不同植物培養(yǎng)的適溫不同。白鶴非的最適溫度是20、月季是2527、番茄是28。溫度不僅影響植物組織培養(yǎng)育苗的生長速度，也影響其分化增殖以及器官建成等發(fā)育進(jìn)程。如煙草芽的形成以28為最好，在12以下，33以上形成率皆最低。不同培養(yǎng)目標(biāo)采用的培養(yǎng)溫度也不同，百合鱗片在30以下再生的小鱗莖的發(fā)葉速度和百分率比在25%以下的高。桃胚在25條件進(jìn)行一定時(shí)間的低溫處理，有利于提高胚培養(yǎng)成活率。用35處理草莓的莖尖分生組織35d，可得到無病毒苗。二、LED光照（light)組織培養(yǎng)中使用光照也是重要的條件之一，主要表現(xiàn)在光強(qiáng)、光質(zhì)、以及光照時(shí)間方面：1、LED光照強(qiáng)度（light intensity)光照強(qiáng)度對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞的增殖和器官的分化有重要影響，從目前的研究情況看，光照強(qiáng)度對(duì)外植物體、細(xì)胞的最初分裂有明顯的影響。一般來說，光照強(qiáng)度較強(qiáng)，幼苗生長的粗壯，而光照強(qiáng)度較弱幼苗容易徒長。2、LED光質(zhì)（light wave)光質(zhì)對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)，培養(yǎng)組織的增殖以及器官的分化都有明顯的影響。如百合珠芽在紅光下培養(yǎng)，8周后，分化出愈傷組織。但在藍(lán)光下培養(yǎng)，幾周后才出現(xiàn)愈傷組織，而唐菖蒲子球塊接種15天后，在藍(lán)光下培養(yǎng)首先出現(xiàn)芽，形成的幼苗生長旺盛，而白光下幼苗纖細(xì)。3、LED光周期（light period)試管苗培養(yǎng)時(shí)要選用一定的光暗周期來進(jìn)行組織培養(yǎng)，最常用的周期是16h的光照，8h的黑暗。研究表明，對(duì)短日照敏感的品種的器官組織，在短日照下易分化，而在長日照下產(chǎn)生愈傷組織，有時(shí)需要暗培養(yǎng)，尤其是一些植物的愈傷組織在暗培養(yǎng)下比在光下更好。如紅花、烏飯樹的愈傷組織。三、濕度（humidity)濕度的影響包括培養(yǎng)容器保持和環(huán)境的濕度條件，容器內(nèi)主要受培養(yǎng)基水分含量和封口材料的影響。前者又受瓊脂含量的影響。在冬季應(yīng)當(dāng)適當(dāng)減少瓊脂用量，否則，將使培養(yǎng)基干硬，以致不利于外植體接觸或插進(jìn)培養(yǎng)基，導(dǎo)致生長受阻。封口材料直接影響容器內(nèi)濕度情況，但封閉性較高的封口材料易引起透氣性受阻，也會(huì)導(dǎo)致植物生長發(fā)育受影響。環(huán)境的相對(duì)濕度可以影響培養(yǎng)基的水分蒸發(fā)，一般要求70%-80%的相對(duì)濕度，常用加濕器或經(jīng)常灑水的方法來調(diào)節(jié)濕度。濕度過低會(huì)使培養(yǎng)基喪失大量水分，導(dǎo)致培養(yǎng)基各種成分濃度的改變和滲透壓的升高，進(jìn)而影響組織培養(yǎng)的正常進(jìn)行。濕度過高時(shí)，易引起棉塞長霉，造成污染。四、滲透壓（penetrating pressure)培養(yǎng)基中由于有添加的鹽類、蔗糖等化合物，因此影響到滲透壓的變化。通常1-2個(gè)大氣壓對(duì)植物生長有促進(jìn)作用，2個(gè)大氣壓以上就對(duì)植物生長有阻礙作用，而5-6個(gè)大氣壓植物生長就會(huì)完全停止，6個(gè)大氣壓植物細(xì)胞就不能生存。五、PH值不同的植物對(duì)培養(yǎng)基最適PH值的要求也是不同的，大多在5-6.5左右，一般培養(yǎng)基皆要求5.8，這基本能適應(yīng)大多數(shù)植物培養(yǎng)的需要。PH值適度因材料而異，也因培養(yǎng)基的組成而不同。以硝態(tài)氮作氮源和以銨態(tài)氮作氮源就不一樣，后者較高一些。一般來說PH值高于6.5時(shí)，培養(yǎng)基會(huì)變硬；低于5時(shí)，瓊脂不能很好地凝固。因?yàn)楦邷販缇鷷?huì)降低PH值（約0.2-0.3個(gè)PH值）因此在配制時(shí)常提高PH值0.2-0.3單位。PH值大小調(diào)節(jié)可用0.1M的NaOH和0.1M的HCl來調(diào)整。1ml的NaOH可使PH值升高0.2單位，1ml的HCl可使PH值降低0.2單位。調(diào)節(jié)時(shí)一定要充分?jǐn)嚢杈鶆?。六、氣體（gas)氧氣是組織培養(yǎng)中必需的因素，瓶蓋封閉時(shí)要考慮通氣問題，可用附有濾氣膜的封口材料，如易生組培熱銷的培養(yǎng)瓶蓋和封口膜本身帶有PTFE材質(zhì)的濾菌膜，孔徑為0.2um，即保證通氣又可以濾菌。通氣最好的是棉塞封閉瓶口，但棉塞易使培養(yǎng)基干