CLSI微量稀釋法.doc

最小抑菌濃度(MIC)測定 以肺炎鏈球菌 ATCC49619 為質(zhì)控菌株，采用美國臨床和實驗室標(biāo)準化委員會(CLSI)推薦的微量肉湯稀釋法，MIC值參照國家臨床實驗室委員會2002年標(biāo)準?？咕幬锵♂尫秶ê量?毫升）：氨芐青霉素（116）、頭孢噻呋（0.038）、環(huán)丙沙星（0.0154），紅霉素（0.12516）、氟苯尼考（0.1232），青霉素（0.0158）、大觀霉素（1256），四環(huán)素(0.0632)、泰妙菌素（0.2532）、替米考星（264）、甲氧芐啶和磺胺甲惡唑（0.0158）。每株菌液接種于含不同藥物濃度的 96 孔微量板中，35 培養(yǎng)2024 h ，觀察結(jié)果，同時以 ATCC27090 和ATCC25922 作為抗菌藥物的敏感性試驗質(zhì)控菌株。1.5 最小抑菌濃度(MIC)測定 以肺炎鏈球菌 ATCC49619 為質(zhì)控菌株，采用美國臨床和實驗室標(biāo)準化委員會(CLSI)推薦的微量肉湯稀釋法，檢測臨床上常用的19種抗生素對紅斑丹毒絲菌安徽分離株的MIC。1.5.1 菌株活化 將紅斑丹毒絲菌安徽分離株接種于3 mL BHI肉湯(含5% 犢牛血清)中，37 振蕩(120 r/min)培養(yǎng)12 h，在對數(shù)生長期(600 nm吸光度為0.883)分別在BHI瓊脂平板中傳代兩次，挑取單菌落劃線接種到CAMHA上，培養(yǎng)18-24 h，再挑取單菌落接種于含5% 胎牛血清的CAMHB中，培養(yǎng)至濁度為0.5麥氏比濁單位，此時菌液濃度約為5108 CFU/mL，用CAMHB做1：1000稀釋備用。1.5.2 抗菌藥物儲存液的制備 稱取各種抗生素粉末，根據(jù)藥物的理化性質(zhì)及使用說明進行稀釋配制，分別配制成終濃度為1280 g/mL的藥物儲存液，分裝至1.5 mL EP管中，用封口膜封口后存至-80冰箱保存?zhèn)溆?，可保存半年時間內(nèi)不失活，避免反復(fù)凍融。1.5.3 MIC的測定 在96孔微量稀釋板中連續(xù)倍比稀釋藥物儲存液，藥物初始濃度為128 g/mL，得到一系列100 L藥物梯度稀釋液(藥物濃度范圍為1280.0625 g/mL)，空白對照只加100 L培養(yǎng)基，陰性對照加菌懸液和培養(yǎng)基的混合物100 L。置于35溫箱中培養(yǎng)24 h。在讀取所測試菌株的MIC前，檢查陰性對照管的細菌生長情況是否良好，同時檢查空白對照是否污染，質(zhì)控菌株的MIC值是否處于質(zhì)控范圍。肉眼觀察沒有細菌生長的最低藥物濃度即為該藥物的MIC，每組試驗重復(fù)三次。根據(jù)CLSI提供的人用抗生素的判定標(biāo)準(M45-A2)進行結(jié)果判定6(表1)。表 1 MIC的判定標(biāo)準Table 1 MICs criteria抗生素種類抗生素名稱MIC(g/mL)肺炎鏈球菌ATCC49619范圍Streptococcus pneumoniae ATCC 49619 range敏感中敏耐藥AntibioticsAntibiotics NamesensitiveSensitizedResistance青霉素類Penicillins青霉素（PEN）0.120.25240.251氨芐青霉素(AMP)0.250.5480.060.26頭孢類Cephalosporins頭孢曲松(CRO)1240.030.12頭孢噻肟(CTX)1240.030.12頭孢唑啉(CFZ)1232320.030.12大環(huán)內(nèi)酯類Macrolides紅霉素(ERY)0.250.510.030.12泰樂霉素泰(TYL)0.250.510.030.12喹諾酮類Quinolones環(huán)丙沙星(CIP)1240.251加替沙星(GAT)1240.0150.06氧氟沙星(OFX)12414恩諾沙星（ENR）0.250.5120.0150.06林克酰胺類Lincosamides克林霉素(CLI)0.250.5120.030.12林肯霉素(LIN)0.250.5120.030.12四環(huán)素類Tetracycline四環(huán)素(TET)48160.060.5強力霉素(DOX)48160.0150.12氨基糖苷類 Aminogly