CLSI微量稀釋法.docVIP

最小抑菌濃度(MIC)測(cè)定 以肺炎鏈球菌 ATCC49619 為質(zhì)控菌株，采用美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(CLSI)推薦的微量肉湯稀釋法，MIC值參照國(guó)家臨床實(shí)驗(yàn)室委員會(huì)2002年標(biāo)準(zhǔn)?？咕幬锵♂尫秶ê量?毫升）：氨芐青霉素（116）、頭孢噻呋（0.038）、環(huán)丙沙星（0.0154），紅霉素（0.12516）、氟苯尼考（0.1232），青霉素（0.0158）、大觀霉素（1256），四環(huán)素(0.0632)、泰妙菌素（0.2532）、替米考星（264）、甲氧芐啶和磺胺甲惡唑（0.0158）。每株菌液接種于含不同藥物濃度的 96 孔微量板中，35 培養(yǎng)2024 h ，觀察結(jié)果，同時(shí)以 ATCC27090 和ATCC25922 作為抗菌藥物的敏感性試驗(yàn)質(zhì)控菌株。1.5 最小抑菌濃度(MIC)測(cè)定 以肺炎鏈球菌 ATCC49619 為質(zhì)控菌株，采用美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(CLSI)推薦的微量肉湯稀釋法，檢測(cè)臨床上常用的19種抗生素對(duì)紅斑丹毒絲菌安徽分離株的MIC。1.5.1 菌株活化 將紅斑丹毒絲菌安徽分離株接種于3 mL BHI肉湯(含5% 犢牛血清)中，37 振蕩(120 r/min)培養(yǎng)12 h，在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期(600 nm吸光度為0.883)分別在BHI瓊脂平板中傳代兩次，挑取單菌落劃線接種到CAMHA上，培養(yǎng)18-24 h，再挑取單菌落接種于含5% 胎牛血清的CAMHB中，培養(yǎng)至濁度為0.5麥?zhǔn)媳葷釂挝?，此時(shí)菌液濃度約為5108 CFU/mL，用CAMHB做1：1000稀釋備用。1.5.2 抗菌藥物儲(chǔ)存液的制備 稱取各種抗生素粉末，根據(jù)藥物的理化性質(zhì)及使用說(shuō)明進(jìn)行稀釋配制，分別配制成終濃度為1280 g/mL的藥物儲(chǔ)存液，分裝至1.5 mL EP管中，用封口膜封口后存至-80冰箱保存?zhèn)溆茫杀４姘肽陼r(shí)間內(nèi)不失活，避免反復(fù)凍融。1.5.3 MIC的測(cè)定 在96孔微量稀釋板中連續(xù)倍比稀釋藥物儲(chǔ)存液，藥物初始濃度為128 g/mL，得到一系列100 L藥物梯度稀釋液(藥物濃度范圍為1280.0625 g/mL)，空白對(duì)照只加100 L培養(yǎng)基，陰性對(duì)照加菌懸液和培養(yǎng)基的混合物100 L。置于35溫箱中培養(yǎng)24 h。在讀取所測(cè)試菌株的MIC前，檢查陰性對(duì)照管的細(xì)菌生長(zhǎng)情況是否良好，同時(shí)檢查空白對(duì)照是否污染，質(zhì)控菌株的MIC值是否處于質(zhì)控范圍。肉眼觀察沒(méi)有細(xì)菌生長(zhǎng)的最低藥物濃度即為該藥物的MIC，每組試驗(yàn)重復(fù)三次。根據(jù)CLSI提供的人用抗生素的判定標(biāo)準(zhǔn)(M45-A2)進(jìn)行結(jié)果判定6(表1)。表 1 MIC的判定標(biāo)準(zhǔn)Table 1 MICs criteria抗生素種類(lèi)抗生素名稱MIC(g/mL)肺炎鏈球菌ATCC49619范圍Streptococcus pneumoniae ATCC 49619 range敏感中敏耐藥AntibioticsAntibiotics NamesensitiveSensitizedResistance青霉素類(lèi)Penicillins青霉素（PEN）0.120.25240.251氨芐青霉素(AMP)0.250.5480.060.26頭孢類(lèi)Cephalosporins頭孢曲松(CRO)1240.030.12頭孢噻肟(CTX)1240.030.12頭孢唑啉(CFZ)1232320.030.12大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)Macrolides紅霉素(ERY)0.250.510.030.12泰樂(lè)霉素泰(TYL)0.250.510.030.12喹諾酮類(lèi)Quinolones環(huán)丙沙星(CIP)1240.251加替沙星(GAT)1240.0150.06氧氟沙星(OFX)12414恩諾沙星（ENR）0.250.5120.0150.06林克酰胺類(lèi)Lincosamides克林霉素(CLI)0.250.5120.030.12林肯霉素(LIN)0.250.5120.030.12四環(huán)素類(lèi)Tetracycline四環(huán)素(TET)48160.060.5強(qiáng)力霉素(DOX)48160.0150.12氨基糖苷類(lèi) Aminogly