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乳腺癌組織多藥耐藥相關(guān)蛋白表達及其與化療敏感性關(guān)系的研究作者：孫勇袁凱付榮湛 作者單位：山東大學(xué)附屬千佛山醫(yī)院普通外科 【摘要】 目的：探討3種耐藥相關(guān)蛋白P-gp、GST-和Topo在乳腺癌組織中的表達及其與乳腺癌新輔助化療敏感性的相關(guān)性。方法：乳腺癌患者80例，隨機分為應(yīng)用新輔助化療(CEF)組（A組）和未化療組（B組），A組應(yīng)用新輔助化療2周期，化療前后分別行B超檢查測量腫瘤大小。采用S-P免疫組織化學(xué)法檢測80例乳腺癌組織中P-gp、GST-和Topo的表達情況。結(jié)果: P-gp的表達在A組較B組有顯著升高（P0.05）。A組P-gp的表達情況與乳腺癌腫瘤的縮小呈直線相關(guān)（P0.05）。P-gp的表達與腋窩淋巴結(jié)陽性有顯著相關(guān)；GST-的表達與腫瘤的分級有顯著相關(guān)，與雌激素受體呈負相關(guān)；Topo的表達與腫瘤的分級呈正相關(guān)。結(jié)論:P-gp的表達可能與乳腺癌的獲得性耐藥有關(guān)，GST-和Topo的表達可能與乳腺癌的天然耐藥有關(guān)。【關(guān)鍵詞】 多藥耐藥相關(guān)蛋白類免疫組織化學(xué)乳腺腫瘤 Correlation between sensitiviy of neoadjuvant chemotherapy and multidrug-resistance in breast carcinoma SUN Yong, YUAN Kai, FU Rong-zhan Department of General Surgery, Qianfoshan Hospital of Shandong University （Jinan 250014，China） 【ABSTRACT】 Objective: To study the expressions of P-gp、GST- 、Topo in breast carcinoma and the relationship between the drug resistance-associated proteins and the sensitivity of neoadjuvant chemotherapy of breast carcinoma. Methods：Eighty specimens of breast carcinoma were collected and the patients were classified randomly into group A and group B. Neoadjuvant chemotherapy (CEF) was used in group A, and we respectively measured maximum diameters of the tumors by B-ultrasound examination before and after the chemotherapy. we measured the expression of P-gp、GST- 、Topoin 80 specimens by immunohistochemical technique(S-P). Results：The expression of P-gp increased significantly in group A compared with group B (P0.05). In group A , a significant linear correlation was observed between P-gp and the percentage of decrease of tumor（P 0.05）. The expression of P-gp was significantly associated with positive axillary node. The expression of GST- was significantly associated with the pathologic class of tumor, and a negative correlation was found between GST- and ER. A positive correlation was found between Topoand the pathologic class of tumor. Conclusions: P-gp perhaps has a close relationship with acquired resistance of breast carcinoma, GST- and Topoperhaps have a close relationship with natural resistance of breast carcinoma. 【KEY WORDS】Multidrug resistance-associated proteinsImmunohistochemistryBreast carcinoma乳腺癌是危害人類健康的一種常見病，新輔助化療（neoadjuvant chemotherapy）是近年興起的一種全身治療模式。乳腺癌對化療較敏感，但普遍存在多藥耐藥（multidrug resistance，MDR）現(xiàn)象。本研究探討3種耐藥相關(guān)蛋白P-gp、GST-和Topo在乳腺癌組織中的表達及其與乳腺癌新輔助化療敏感性的相關(guān)性，以期為乳腺癌耐藥性的研究提供理論依據(jù)。 1資料與方法 1.1一般資料收集我科2005年7月2007年7月的符合以下標準的原發(fā)性乳腺癌（浸潤性導(dǎo)管癌）患者40例作為新輔助化療組（A組），入選標準：1）可手術(shù)乳腺癌,化療前經(jīng)超聲、X線、骨掃描等檢查無遠處轉(zhuǎn)移。2）有可測量或可評價的腫瘤病灶,B超可測病變直徑1 cm。3）無化療禁忌證。4）術(shù)前接受CEF方案化療2周期，并于分別化療前和手術(shù)前行B超檢查測量腫瘤直徑，在化療后施行手術(shù)。5）入院前未接受任何相關(guān)治療。另取同期40例乳腺癌（浸潤性導(dǎo)管癌）患者為對照組（B組），術(shù)前未行任何治療。組織學(xué)分級參照2001年版的中國腫瘤病理學(xué)分類，TNM分期按UICC（2003）標準。所有患者均經(jīng)術(shù)中快速病理組織學(xué)檢查確診。標本采用10%的甲醛溶液固定，石蠟包埋，組織4 m切片。 1.2主要試劑兔抗人P-gp（P糖蛋白）抗體、兔抗人Topo（DNA拓普異構(gòu)酶）抗體、兔抗人GST- (谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶亞型)抗體、即用型過氧化物酶免疫組化染色試劑盒、DAB顯色試劑盒（黃）均購自武漢博士德生物工程有限公司；PBS溶液、枸櫞酸鹽緩沖液、DAB試劑、醫(yī)用梯度乙醇和二甲苯等均由山東省普外中心重點實驗室提供。 1.3免疫組織化學(xué)染色A、B組標本均采用10%的甲醛溶液固定,常規(guī)石蠟包埋，組織4 m切片,對每例切片分別進行P-gp、GST-和Topo的免疫組化染色（SP法），操作步驟按照試劑盒說明書進行。 1.4結(jié)果判斷新輔助化療前后應(yīng)用B超測量腫瘤大小，按公式V=/6長寬高,計算腫瘤體積。P-gp陽性細胞染色部位主要在細胞質(zhì)及細胞膜，GST-陽性細胞染色部位主要在細胞質(zhì)，Topo 陽性細胞染色部位主要在細胞核。參考美國亞利桑那州癌癥中心病理科及有關(guān)文獻標準，隨機讀取1 0001 500個細胞，按照腫瘤細胞著色數(shù)量多少，定量法分為4級：不著色為陰性，陽性細胞數(shù)50%為強陽性。將陰性和弱陽性歸為低表達，表示為（-），將陽性和強陽性歸為高表達，表示為（+）。 1.5統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS 10.0統(tǒng)計軟件分析數(shù)據(jù)，計數(shù)資料比較用2檢驗或Fishers精確概率法，等級分組資料用秩和檢驗。新輔助化療反應(yīng)大小與乳腺癌P-gp、GST-、Topo的表達之間用直線相關(guān)分析。P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 2結(jié)果 2.1兩組P-gp、GST-和Topo的表達組P-gp陽性表達率為62.5%（25/40），B組為32.5%（13/40），兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）；A組Topo陽性表達率為20%（8/40）， B組為15%（6/40），兩組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。 2.2新輔助化療的療效A組大多數(shù)病例對該化療方案較敏感，治療后腫瘤體積縮?。▓D1）。將A組患者新輔助化療反應(yīng)敏感程度（腫瘤體積縮小的百分比）與P-gp、GST-和Topo表達的陽性細胞率進行統(tǒng)計學(xué)分析，結(jié)果示化療反應(yīng)與P-gp表達的陽性細胞率呈直線相關(guān)（r=-0.631, =0.037）;與GST-和Topo 表達的陽性細胞率之間均無明顯直線相關(guān)性（r=0.095,P=0.362；r=0.087，P=0.584）。 2.3P-gp、GST-和Topo的表達及其與臨床病理資料的關(guān)系80例患者中P-gp陽性表達率47.5%（38/80）；GST-陽性表達率為41.3%（33/80）；Topo陽性表達率17.5%（14/80）。不同年齡、病理分型、TNM分期、腫瘤的分級、雌激素受體情況的乳腺癌組織中P-gp表達差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05），P-gp的表達與腋窩淋巴結(jié)陽性呈顯著相關(guān)（r=0.597，P0.05），GST-的表達與腫瘤的分級有顯著相關(guān)（r=0.109，P0.05），與雌激素受體成負相關(guān)（r=-0.365，P0.05），Topo的表達與腫瘤的分級成正相關(guān)（r=0.371，P0.01，表1）。 3討論 近年來，針對乳腺癌興起了一種新的全身治療模式，即新輔助化療，也稱為術(shù)前化療或誘導(dǎo)化療。美國NSABP（National Surgical Adjuvant Breast and Bowel Project）B-18研究的結(jié)果顯示，對于可以手術(shù)切除的乳腺癌患者新輔助化療可以取得與術(shù)后輔助化療相近的總生存率，是目前乳腺癌新輔助化療最具說服力的臨床研究結(jié)果。采用新輔助化療主要有以下原因： 1）有利于遠處微轉(zhuǎn)移灶的早期治療。2）能對原發(fā)腫瘤的化療反應(yīng)作出評估。3）能縮小原發(fā)腫瘤，從而有利于保留乳房治療-。4）能增加乳腺癌的無瘤生存率與總體生存率4-。MDR是腫瘤細胞對化學(xué)藥物攻擊的重要細胞防御機制,是腫瘤化療失敗的主要原因之一。MDR有兩種不同的表型，一種是天然性耐藥,另一種是獲得性耐藥。 新輔助化療作為一種治療手段，可能影響乳腺癌中3種耐藥相關(guān)蛋白表達。本研究發(fā)現(xiàn)只有P-gp的表達與新輔助化療有關(guān)，考慮P-gp、GST-和Topo都參與乳腺癌組織的天然性耐藥，而且P-gp與獲得性耐藥亦有關(guān)。Cheung等認為MRI可重建腫瘤三維圖像，能正確估計腫瘤縮小百分比。Akashi-Tanaka等對110例可手術(shù)乳腺癌患者新輔助化療前后采用鉬靶、B超和造影增強CT（CE-CT）進行形態(tài)學(xué)分類，認為CE-CT更有利于化療后殘余腫瘤邊界的精確定位。本研究選擇B超作為測量腫瘤的方法，既考慮了測量的精確性，又考慮到患者的經(jīng)濟承受能力。另外B超與乳房X線攝片、MRI、CT相比是一種無創(chuàng)性檢查手段，患者容易接受。通過對新輔助化療敏感性與3種MDR相關(guān)蛋白表達的相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)P-gp的表達與A組乳腺癌組織的縮小百分比成負相關(guān)，P-gp表達越高乳腺腫瘤的縮小比例越小，可以推測為P-gp介導(dǎo)的MDR提高了腫瘤的耐藥性，使治療敏感性降低。而GST-和Topo的表達與乳腺癌組織的縮小百分比無明顯相關(guān)性，提示P-gp介導(dǎo)的耐藥可能在這些耐藥蛋白中起主導(dǎo)作用。P-gp的表達與腋窩淋巴結(jié)陽性有顯著相關(guān)，可能與乳腺癌的遠處轉(zhuǎn)移有關(guān)。GST-的表達與雌激素受體成負相關(guān)，可能受乳腺癌患者體內(nèi)雌激素水平的調(diào)節(jié)。GST-和Topo的表達與腫瘤組織的分級呈正相關(guān)，可能與乳腺癌的腫瘤細胞增殖有關(guān)。所以，P-gp可能是導(dǎo)致乳腺癌患者化療失敗的主要原因。在治療多種機制介導(dǎo)的MDR過程中，P-gp應(yīng)該成為主要的治療靶點。 化療失敗的主要原因是腫瘤細胞產(chǎn)生耐藥性，產(chǎn)生耐藥是多機制的，同時檢測P-gp、GST-和Topo等多種導(dǎo)致MDR的因素對腫瘤化療療效的預(yù)測更有意義，新輔助化療使乳腺癌組織出現(xiàn)獲得性耐藥，使化療前低表達的腫瘤變成化療后高表達的腫瘤，如能在化療前獲得癌組織MDR基因蛋白的信息，對臨床選用抗腫瘤藥物有重要的指導(dǎo)意義。本研究發(fā)現(xiàn)P-gp在3種耐藥蛋白介導(dǎo)的MDR中起主導(dǎo)作用，有望成為逆轉(zhuǎn)MDR的重要靶點。晉升網(wǎng)（）設(shè)有論文學(xué)院、考試學(xué)院、在線投稿等，本網(wǎng)站致力于成為醫(yī)務(wù)工作者晉升職稱心靈導(dǎo)師；是目前國內(nèi)收錄醫(yī)學(xué)期刊、醫(yī)學(xué)雜志最多最權(quán)威的醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)平臺；提供免費醫(yī)學(xué)期刊在線閱讀；網(wǎng)羅和甄選海量優(yōu)秀醫(yī)學(xué)論文檢索，獨立研發(fā)醫(yī)學(xué)在線資源分享庫和醫(yī)學(xué)在線模擬考試庫；整合刊類、標題、關(guān)鍵詞檢索及全文檢索，并獨家研發(fā)刊社管理和刊社加盟系統(tǒng)、在線投稿、在線查稿、在線閱讀、遠程審稿、在線下載等系統(tǒng)；聚刊社力量，建服務(wù)平臺，讓晉升網(wǎng)通過“專業(yè)”走入每一個醫(yī)務(wù)人員的身邊是我們不懈的追求目標【參考文獻】1 Fisher B, Bryant J, Wolmark N, et al. 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