大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)與細(xì)胞工廠.ppt

細(xì)胞工廠 內(nèi)容 一 動物細(xì)胞培養(yǎng)與細(xì)胞工廠二 生物制品三 疫苗四 現(xiàn)代生物技術(shù)與基因工程五 單克隆抗體與抗體藥物六 干細(xì)胞與體細(xì)胞治療 我們熟知的細(xì)胞培養(yǎng) 動物細(xì)胞培養(yǎng) 動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù) 1 無菌環(huán)境 超凈臺 安全柜2 生長環(huán)境 CO2培養(yǎng)箱3 營養(yǎng)環(huán)境 培養(yǎng)基4 貼壁環(huán)境 培養(yǎng)瓶 皿 等 細(xì)胞工廠 動物細(xì)胞的形態(tài) 貼壁細(xì)胞 細(xì)胞的生長必須有可以貼附的支持物表面 依靠自身分泌的或培養(yǎng)基中提供的貼附因子才能在該表面上生長 增殖 當(dāng)細(xì)胞在該表面生長后 一般形成兩種形態(tài) 即成纖維樣細(xì)胞型或上皮樣細(xì)胞型懸浮細(xì)胞 懸浮狀態(tài)生長 如淋巴細(xì)胞 Namalwa細(xì)胞兼性貼壁細(xì)胞 中國倉鼠卵巢細(xì)胞 小鼠L929細(xì)胞 一 貼附型 大多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞貼附生長 屬于貼壁依賴性細(xì)胞貼附 是大多數(shù)有機(jī)體細(xì)胞在體內(nèi)生存和生長發(fā)育的基本存在方式結(jié)果 基于貼附特性 使細(xì)胞與細(xì)胞之間相互結(jié)合形成組織 有機(jī)體的絕大多數(shù)細(xì)胞必須貼附于一固相表面才能生存和生長 培養(yǎng)時 這些細(xì)胞被放到體外環(huán)境中以后 同樣需要貼附于某一固相表面才能生存和生長 因而屬于貼附型細(xì)胞貼附 錨定或錨著 依賴型 性 細(xì)胞 唯有貼附于固相表面才能生存的細(xì)胞 貼附生長型細(xì)胞 細(xì)胞培養(yǎng)常用的培養(yǎng)瓶 培養(yǎng)皿 6孔板 96孔板 細(xì)胞貼附材料與表面 貼附的固相表面材料 玻璃 塑料 聚苯乙烯 玻璃 本身具有親水性 適于細(xì)胞貼壁塑料 沒有親水性 不能使細(xì)胞貼壁 所以必須在塑料表面進(jìn)行親水性接枝 等離子處理 二 懸浮型 見于少數(shù)特殊的細(xì)胞 如某些類型的癌細(xì)胞及白血病細(xì)胞 胞體圓形 不貼于支持物上 呈懸浮生長 這類細(xì)胞容易大量繁殖 概念 培養(yǎng)時不貼附于底物而呈懸浮狀態(tài)生長或以機(jī)械方法使保持懸浮狀態(tài)下生長來源 自血 脾或骨髓 血中白細(xì)胞癌腫細(xì)胞特點 在懸浮中生長良好細(xì)胞圓形 單個或小細(xì)胞團(tuán)優(yōu)點 生存空間大 提供數(shù)量大 傳代方便 不需消化 易于收獲 可獲得穩(wěn)定狀態(tài)缺點 純化不方便 不能通過離心將死 活細(xì)胞分離 懸浮生長型細(xì)胞 懸浮培養(yǎng)磁力攪拌器 大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng) 細(xì)胞工廠培養(yǎng)技術(shù)在大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)中的應(yīng)用 doc 轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)的缺點 轉(zhuǎn)瓶技術(shù)為傳統(tǒng)的貼壁細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù) 細(xì)胞接種在旋轉(zhuǎn)的圓筒形培養(yǎng)器 轉(zhuǎn)瓶中 培養(yǎng)過程中轉(zhuǎn)瓶不斷旋轉(zhuǎn) 使細(xì)胞交替接觸培養(yǎng)液和空氣 缺點 勞動強(qiáng)度大 占地空間大 單位體積提供細(xì)胞生長的表面積小 細(xì)胞生長密度低 瓶間差異較難控制等 因而難以產(chǎn)業(yè)化或規(guī)模化生產(chǎn) 重要的是 轉(zhuǎn)瓶由于不是靜止培養(yǎng) 產(chǎn)品質(zhì)量經(jīng)常達(dá)不到要求或由于細(xì)胞易破碎而存在DNA毒性潛在危險 據(jù)稱國家準(zhǔn)備淘汰轉(zhuǎn)瓶生產(chǎn)技術(shù) 細(xì)胞工廠 用于大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)與生產(chǎn) 細(xì)胞工廠 關(guān)鍵技術(shù) 貼壁處理 高真空等離子接枝表面處理 know how 接枝材料與接枝技術(shù) 材料性能 生物相容性 無細(xì)胞毒性 多層焊接技術(shù) 密封性與牢固性滅菌技術(shù) Y射線輻照 細(xì)胞工廠競爭 NuncCorningDHS DHS細(xì)胞工廠 DHS大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)單頁 pdf NuncCellFactory CorningCellSTACKChamber Choiceoftraditionalsurfacetreatment TC newCorning CellBIND Surfaceforenhancedcellattachment orUltra LowAttachmentSurfaceforreducedcellattachment CorningCellSTACKChamber 三種細(xì)胞工廠的比較 材料 均為PS塑料表面處理 各自的Know how頂層 DHS同Nunc 便于顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況焊接工藝 Nunc采用超聲焊接 Corning采用特殊膠粘接 Corning的更加牢固 不易開裂 所以DHS采用Corning的粘接工藝只有DHS是可以定制任意層的細(xì)胞工廠 細(xì)胞工廠的使用 easyfill NUNC EasyFil