高中生物 1.1.1 微生物培養(yǎng)基的配制同步課件 蘇教版選修1.ppt

第一章無(wú)菌操作技術(shù)實(shí)踐 第一章無(wú)菌操作技術(shù)實(shí)踐 第一節(jié)微生物的培養(yǎng)和應(yīng)用 一 微生物培養(yǎng)基的配制 學(xué)習(xí)導(dǎo)航1 掌握培養(yǎng)基的用途和種類(lèi) 重點(diǎn) 2 能區(qū)別消毒和滅菌 會(huì)運(yùn)用常用的消毒 滅菌方法 難點(diǎn) 3 了解培養(yǎng)基的配制過(guò)程及培養(yǎng)基的配制原則 重點(diǎn) 繁殖 代謝產(chǎn)物 天然培養(yǎng)基 2 按物理狀態(tài)可分為液體培養(yǎng)基 半固體培養(yǎng)基和 培養(yǎng)基 是最理想的凝固劑 3 按功能可分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基 加富培養(yǎng)基 和鑒別培養(yǎng)基 培養(yǎng)基中加入鏈霉素 即可達(dá)到抑制 的生長(zhǎng) 將 分離出來(lái) 培養(yǎng)基中添加 能區(qū)分大腸桿菌和產(chǎn)氣腸桿菌 固體 瓊脂 選擇培養(yǎng)基 細(xì)菌和放線菌 真菌 伊紅 美藍(lán) 1 1 天然培養(yǎng)基取材便利 營(yíng)養(yǎng)豐富 配制簡(jiǎn)便 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性好 2 各種培養(yǎng)基盡管配方不同 但一般都有水 無(wú)機(jī)鹽 碳源 氮源和生長(zhǎng)因子 3 利用無(wú)氮培養(yǎng)基可篩選出固氮細(xì)菌 這屬于鑒別培養(yǎng)基的應(yīng)用 4 液體培養(yǎng)基 半固體培養(yǎng)基及固體培養(yǎng)基的主要區(qū)別在于是否加入瓊脂及加入的多少 判一判 二 消毒與滅菌 溫和 病原微生物 營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞 強(qiáng)烈 干熱 濕熱 高溫滅菌是利用高溫的致死作用 使微生物的蛋白質(zhì)和核酸等重要的生物大分子發(fā)生不可逆轉(zhuǎn)的變性 你知道高溫破壞的是蛋白質(zhì)的哪一結(jié)構(gòu)嗎 提示 高溫使蛋白質(zhì)內(nèi)部的氫鍵斷裂 從而破壞其空間結(jié)構(gòu) 但并不破壞肽鍵 想一想 三 細(xì)菌培養(yǎng)基的配制過(guò)程1 配制過(guò)程配制培養(yǎng)液 分裝 包扎 2 幾種天然有機(jī)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的主要成分 調(diào)節(jié)ph 滅菌 擱置斜面 水溶性糖類(lèi) 有機(jī)氮化合物 3 細(xì)菌 放線菌 真菌生長(zhǎng)的最適ph分別為 維生素 6 5 7 5 7 5 8 5 5 0 6 0 2 1 培養(yǎng)基調(diào)節(jié)合適的ph后就可以接種使用 2 牛肉膏只能為微生物提供碳源和氮源 3 制備細(xì)菌培養(yǎng)基操作順序?yàn)榕渲婆囵B(yǎng)液 調(diào)節(jié)ph 滅菌 分裝 判一判 特別提醒判定培養(yǎng)基的類(lèi)型及所培養(yǎng)微生物的生活方式的方法 培養(yǎng)基中是否含有有機(jī)物 若有 則培養(yǎng)的微生物為異養(yǎng)型微生物 若無(wú) 則培養(yǎng)的微生物為自養(yǎng)型微生物 是否含有瓊脂 若有 則該培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基 是否含有一些特殊物質(zhì) 如含有青霉素 高濃度鹽等 用于抑制不需要的微生物的生長(zhǎng) 而促進(jìn)所需微生物的生長(zhǎng)的培養(yǎng)基為選擇培養(yǎng)基 如含有伊紅 美藍(lán)等 用于區(qū)分不同微生物種類(lèi)的培養(yǎng)基為鑒別培養(yǎng)基 根據(jù)各類(lèi)微生物的形態(tài)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和新陳代謝類(lèi)型 利用選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基 結(jié)合顯微鏡鏡檢 以及菌落特征 可以把混雜在一起的大腸桿菌 硝化細(xì)菌 乳酸細(xì)菌 酵母菌 金黃色葡萄球菌 圓褐固氮菌分離開(kāi)來(lái) 下面是分離篩選的方法步驟 請(qǐng)根據(jù)各個(gè)步驟的條件 填寫(xiě)空格中的內(nèi)容 首先配制一系列不同性質(zhì)的固體培養(yǎng)基 然后進(jìn)行高溫滅菌 再將上述微生物的混合液分別接種到各種培養(yǎng)基上培養(yǎng) 1 用無(wú)氮培養(yǎng)基可篩選出 2 用不含有機(jī)碳源的選擇性培養(yǎng)基可篩選出 3 酵母菌的篩選需要在常規(guī)培養(yǎng)基中另加入 4 用加了較高濃度nacl的培養(yǎng)基可選擇出 或者根據(jù)菌落的顏色呈現(xiàn) 色 將其挑取單獨(dú)培養(yǎng) 5 利用伊紅 美藍(lán)培養(yǎng)基培養(yǎng)混合菌 菌落呈 色并帶有金屬光澤的是 挑取該菌落單獨(dú)培養(yǎng) 結(jié)合顯微鏡鏡檢和進(jìn)一步用伊紅 美藍(lán)培養(yǎng)基鑒別來(lái)確定 6 在無(wú)氧環(huán)境下培養(yǎng)混合菌 可以生長(zhǎng) 加入一定濃度的乳酸 使培養(yǎng)基ph充分降低 可抑制 微生物的生長(zhǎng) 利用菌落特征 結(jié)合顯微鏡鏡檢 選取生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)的菌落 即可分離出 解析 若培養(yǎng)基中無(wú)氮 則凡是不能自生固氮的微生物均不能生存 題中所列微生物中 只有圓褐固氮菌能固氮 因而無(wú)氮培養(yǎng)基可選出該菌 若用不含有機(jī)碳的培養(yǎng)基則可選出自養(yǎng)型微生物 真菌的篩選可在培養(yǎng)基中加入青霉素 高濃度nacl可選出耐鹽微生物 如金黃色葡萄球菌 用伊紅 美藍(lán)培養(yǎng)基可鑒定大腸桿菌 在無(wú)氧環(huán)境中 厭氧型及兼性厭氧型微生物才能生長(zhǎng) 需氧型微生物將被抑制 答案 1 圓褐固氮菌 2 硝化細(xì)菌 3 青霉素 4 金黃色葡萄球菌桔紅 金黃 5 綠大腸桿菌 6 大腸桿菌 乳酸細(xì)菌 酵母菌大腸桿菌和酵母菌乳酸細(xì)菌 1 在培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基中加入某些物質(zhì)能分離出所需的微生物 下列選項(xiàng)中 前者是在培養(yǎng)基中加入的物質(zhì) 后者是能被分離出的微生物 其中正確的是 a 氫氧化鈉 酵母菌b 鹽酸 放線菌c 適量的青霉素 霉菌d 適量的伊紅 美藍(lán) 大腸桿菌 變式訓(xùn)練 解析 選c 氫氧化鈉 鹽酸分別為強(qiáng)堿 強(qiáng)酸 酵母菌和放線菌都不能生存 加入伊紅 美藍(lán)的培養(yǎng)基是用來(lái)鑒定大腸桿菌 并不能分離大腸桿菌 適量的青霉素對(duì)原核生物有抑制作用 對(duì)真核生物的生命活動(dòng)并不影響 1 營(yíng)養(yǎng)要素微生物的化學(xué)組成與其他生物大體相同 也是由c h o n p s等元素組成 其中c h o n占細(xì)胞干重的90 以上 這些元素主要來(lái)自外界環(huán)境中的各種無(wú)機(jī)化合物和有機(jī)化合物 這些化合物歸納成碳源 氮源 生長(zhǎng)因子 無(wú)機(jī)鹽和水這五大類(lèi)營(yíng)養(yǎng)要素 特別提醒 對(duì)異養(yǎng)微生物來(lái)說(shuō) 含c n的化合物既是碳源 也是氮源 即有些化合物作為營(yíng)養(yǎng)要素成分時(shí)并不是單一方面的作用 有些微生物需添加特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) 原因是它們自身缺乏合成這些物質(zhì)所需要的酶或合成能力有限 2 配制原則 1 目的要明確 根據(jù)微生物的種類(lèi) 培養(yǎng)目的等 如培養(yǎng)基可由簡(jiǎn)單的無(wú)機(jī)物組成 生產(chǎn)用培養(yǎng)基內(nèi)可加入化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì) 而分類(lèi) 鑒定用培養(yǎng)基內(nèi)必須加入已知化學(xué)成分的物質(zhì) 2 營(yíng)養(yǎng)要協(xié)調(diào) 注意各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例 3 ph要適宜 各種微生物適宜生長(zhǎng)的ph范圍不同 如細(xì)菌 放線菌和真菌的最適ph分別為 6 5 7 5 7 5 8 5和5 0 6 0 2012 鹽城高二檢測(cè) 分析有關(guān)微生物的資料 回答問(wèn)題 1 1982年澳大利亞學(xué)者從胃活檢組織中分離出幽門(mén)螺桿菌 幽門(mén)螺桿菌的遺傳物質(zhì)集中分布的區(qū)域稱(chēng)為 2 如圖4支試管分別代表4種微生物在半固體培養(yǎng)基 瓊脂含量3 5g l 中的生長(zhǎng)狀態(tài) 其中 號(hào)試管代表幽門(mén)螺桿菌的生長(zhǎng)狀態(tài) 由圖判斷 該菌在 條件下不能生長(zhǎng) 3 下表是某培養(yǎng)基的配方 將幽門(mén)螺桿菌接種到ph適宜的該培養(yǎng)基中 置于37 下培養(yǎng)一段時(shí)間后 在該培養(yǎng)基中幽門(mén)螺桿菌的數(shù)目比剛接種時(shí) 主要原因是 4 幽門(mén)螺桿菌形態(tài)如圖所示 該菌在人體中可引起胃潰瘍等胃部疾病 幽門(mén)螺桿菌生長(zhǎng)的最適ph為6 7 人體胃腔內(nèi)ph在1 2之間 但胃黏膜的黏液層靠近上皮細(xì)胞側(cè)ph為7 4左右 若幽門(mén)螺桿菌隨食物進(jìn)入胃腔 結(jié)合其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)以及能導(dǎo)致胃潰瘍的特性 推測(cè)該菌在胃內(nèi)如何存活 思路點(diǎn)撥 本題主要考查微生物培養(yǎng)的相關(guān)知識(shí) 解答本題應(yīng)明確以下幾點(diǎn) 了解幽門(mén)螺桿菌的生活習(xí)性 了解培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分組成 區(qū)別原核生物和真核生物 解析 1 幽門(mén)螺桿菌為原核生物 沒(méi)有核膜包圍的細(xì)胞核 遺傳物質(zhì)集中在擬核內(nèi) 2 幽門(mén)螺桿菌生活在半固體培養(yǎng)基的中部 說(shuō)明它不能生活在氧氣濃度過(guò)高或過(guò)低的地方 3 培養(yǎng)基中缺乏氮源 幽門(mén)螺桿菌不能正常生活 數(shù)量會(huì)減少 4 幽門(mén)螺桿菌進(jìn)入胃腔后 可以先依靠鞭毛運(yùn)動(dòng)至ph較高處緩沖 然后分泌蛋白中和胃酸 提高ph 以便繼續(xù)生存和繁殖 答案 1 擬核 核區(qū) 2 氧氣濃度過(guò)高或過(guò)低 3 少缺少氮源 缺少氮源和生長(zhǎng)因子 4 幽門(mén)螺桿菌進(jìn)入胃腔后 首先依靠鞭毛運(yùn)動(dòng)至ph較高處緩沖 然后分泌蛋白中和胃酸 提高ph 以便繼續(xù)生存和繁殖 變式訓(xùn)練2 微生物在生命活動(dòng)過(guò)程中 需要不斷從外界吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) 下列有關(guān)微生物營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的敘述 正確的是 a 不同種類(lèi)的微生物 對(duì)碳源的需要情況差別不大b 無(wú)機(jī)氮源不能為微生物的生命活動(dòng)提供能源c 除水以外的無(wú)機(jī)物僅提供無(wú)機(jī)鹽 d 蛋白胨可以為微生物的生命活動(dòng)提供碳源 氮源 生長(zhǎng)因子解析 選d 異養(yǎng)型的微生物需要有機(jī)物作碳源 自養(yǎng)型微生物需無(wú)機(jī)物作碳源 無(wú)機(jī)物nh3不僅能為硝化細(xì)菌提供能量 還能作為其氮源 不僅能為其生命活動(dòng)提供無(wú)機(jī)鹽 還能調(diào)節(jié)ph等 故前三項(xiàng)均錯(cuò) 蛋白胨可為微生物提供碳源和氮源 水解后的氨基酸還可為微生物提供生長(zhǎng)因子 下面對(duì)發(fā)酵過(guò)程中滅菌的理解不正確的是 a 防止雜菌污染b 消滅雜菌c 培養(yǎng)基和發(fā)酵設(shè)備都必須滅菌d 滅菌必須在接種前 解析 滅菌是微生物發(fā)酵過(guò)程的一個(gè)重要環(huán)節(jié) a項(xiàng)所述是滅菌的目的 因?yàn)榘l(fā)酵所用的菌種大多是單一純種 整個(gè)發(fā)酵過(guò)程不能混入其他微生物 雜菌 所以是正確的 b是錯(cuò)誤的 因?yàn)闇缇哪康氖欠乐闺s菌污染 但實(shí)際操作中不可能只消滅雜菌 而是消滅全部微生物 c是正確的 因?yàn)榕c發(fā)酵有關(guān)的所有設(shè)備和物質(zhì)都要滅菌 發(fā)酵所用的微生物是滅菌后專(zhuān)門(mén)接種的 d也是正確的 滅菌必須在接種前 如果接種后再滅菌就會(huì)把所接菌種也殺死 答案 b 變式訓(xùn)練3 高溫滅菌的原理是 a 每種微生物生長(zhǎng)的最適溫度都是一定的b 微生物對(duì)于高溫環(huán)境不適應(yīng)c 高溫破壞了微生物細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu) 從而使其失去侵染性d 高溫降低了環(huán)境中氧的濃度 解析 選c 蛋白質(zhì)是生物體生命活動(dòng)的承擔(dān)者和體現(xiàn)者 核酸可控制生物體的代謝活動(dòng) 高溫可使蛋白質(zhì)和核酸變性失活 從而影響微生物的生命活動(dòng) 操作與實(shí)踐 細(xì)菌培養(yǎng)基的配制 問(wèn)題與探究 1 培養(yǎng)基滅菌后 為什么需要冷卻到50 左右時(shí) 才能用來(lái)擱置斜面或倒平板 你用什么辦法來(lái)估計(jì)培養(yǎng)基的溫度 提示 瓊脂的凝固點(diǎn)為40 溫度太高易使培養(yǎng)皿破裂 低于40 培養(yǎng)基已凝固 倒不出 所以培養(yǎng)基滅菌后 需冷卻到50 左右時(shí)才能用來(lái)倒平板 可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的試管 感覺(jué)試管的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)就可以進(jìn)行倒平板了 2 為什么需要使試管口通過(guò)火焰 提示 通過(guò)灼燒滅菌 防止試管口的微生物污染培養(yǎng)基 3 為了能徹底滅菌 在操作過(guò)程中應(yīng)注意哪些事項(xiàng) 提示 使用高壓蒸汽滅菌鍋時(shí) 加壓之前一定要把原先的空氣排盡 注意恒溫滅菌 同時(shí)要注意高壓蒸汽滅菌鍋的壓力 100kpa 溫度 121 和滅菌時(shí)間 20min 例題 下表為牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的成分表 據(jù)表回答相關(guān)問(wèn)題 1 蛋白胨在培養(yǎng)基中的主要作用是 2 若用表中成分材料配制觀察金黃色葡萄球菌菌落狀況的培養(yǎng)基 還需要添加的成分是 3 培養(yǎng)基配制好時(shí) 分裝前應(yīng)進(jìn)行的工作程序是 4 從配制培養(yǎng)基直至接種培養(yǎng) 所采用的預(yù)防雜菌感染的方法是 5 對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行擱置