藥品微生物限度與無菌檢查方法驗證實驗的要點及體會課件.ppt

藥品微生物限度與無菌檢查方法驗證實驗的要點及體會 中國藥品生物制品檢定所馬仕洪北京2007年1月 website e mail mash tel 010 67095509 地址 北京市天壇西里2號郵編 100050 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 2 一 方法驗證實驗的背景及程序 1 關(guān)于方法驗證 背景 2 方法驗證實驗的一般原則和程序 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 3 1 關(guān)于方法驗證 背景 中國藥典 2005版國食監(jiān)注 2005 234號 關(guān)于頒布和執(zhí)行 中國藥典 2005年版有關(guān)事宜的通知 國藥典發(fā) 2005 98號 關(guān)于執(zhí)行 中國藥典 2005年版微生物限度檢查法和無菌檢查法有關(guān)問題的說明 中檢藥 2006 862號 第七屆全國藥品檢驗所抗生素室主任工作會議暨全國藥品微生物檢驗方法及標準研討會會議紀要 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 4 為什么驗證 1 采用經(jīng)過驗證的方法 是分析測量科學(xué)的基本要求 是各種法規(guī)遵循工作的基礎(chǔ) 藥品微生物檢查作為整個藥品質(zhì)量體系中的一個環(huán)節(jié) 應(yīng)與其他檢驗項目一樣 對方法和條件進行考察 以保證結(jié)果的科學(xué)性 如鑒別 含量測定 2 驗證的思想其實早已貫徹于微生物檢測的諸多方面 無菌環(huán)境驗證 塵埃離子 浮游菌 沉降菌檢測 滅菌器的驗證 培養(yǎng)基靈敏度檢測 陰性對照 陽性對照等等 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 5 為什么驗證 3 2005版充分借鑒發(fā)達國家經(jīng)驗 將微生物檢查方法的驗證實驗進行了更加系統(tǒng)化的規(guī)定和要求 驗證實際上伴隨著整個實驗過程 實驗過程中的每一個環(huán)節(jié)均應(yīng)有合理的證明 驗證 保證其對結(jié)果判斷沒有影響 4 有了系統(tǒng)的方法驗證 可以避免以往因為陽性菌選擇不合理 方法不合理而造成的漏檢 誤判 以保證結(jié)果的科學(xué)可靠 這一點無論對于當前無菌檢查的一次性報告 還是對于實驗室認證認可 以及新的藥品注冊管理辦法的要求都是相一致的 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 6 為什么驗證 5 驗證的必要性 質(zhì)量控制的新手段 不同企業(yè)以及同企業(yè)不同批次黃連上清丸稀釋法的回收率比較試驗結(jié)果 可能反映了不同黃連上清丸樣品的質(zhì)量差異 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 7 表5七企業(yè)黃連上清丸稀釋法的回收率比較實驗結(jié)果Tab1Recoveryofdilutemethodinmicrobiologicaltestofhuanglianshangqingwanfrom7corporations 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 8 表6同廠不同批黃連上清丸稀釋法的回收率比較實驗結(jié)果 1 200 Tab2recovericeofdilutemethodinmicrobiologicaltestofhuanglianshangqingwanfromdifferentbatchsinsamecorporation 1 200 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 9 2 方法驗證實驗的一般原則和程序 驗證什么 怎么驗證 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 10 驗證什么 微生物檢驗 某種樣品采用某種方法得到一個檢查結(jié)果 What 供試品影響 方法的有效性 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 11 驗證什么 需前處理 不需前處理 有抑菌作用 無抑菌作用 樣品 檢查 去除抑菌作用 驗證前處理方法對污染菌生長 檢出的影響 驗證抑菌活性去除的有效性 以及去除方法對污染菌生長 檢出的影響 可以通過驗證實驗判斷 圖1藥品微生物檢查方法驗證的一般程序與環(huán)節(jié) What 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 12 驗證什么 需要驗證的重點環(huán)節(jié) 驗證實際上伴隨著整個實驗過程 實驗過程中的每一個環(huán)節(jié)均應(yīng)有合理的證明 驗證 保證其對結(jié)果判斷沒有影響 前處理方法直接影響后續(xù)步驟的效果和重現(xiàn)性 應(yīng)在驗證范圍內(nèi) 已有標準規(guī)程 SOP 和充足實驗證明的前處理方法可以直接采用 但出現(xiàn)疑問應(yīng)進一步研究提高 供試品中抗菌活性的去除是當前驗證工作的重點 尤其強調(diào)應(yīng)充分驗證供試品本身對微生物生長的影響 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 13 方法疑問實例 菌在何處 表710ml菌懸液500r min離心5min離心后離心管不同部位菌懸液的計數(shù)結(jié)果 cfu mL 離心集菌法 500r min離心5min r min g 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 14 怎么驗證 利用供試品與微生物的差異 降低或消除供試品的影響 通過模擬實驗對降低或消除效果加以檢驗 How 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 15 稀釋法薄膜法中和法離心法 供試品 前處理 去除抗菌活性 稀釋溶解分散萃取離心 供試品污染微生物檢查 驗證 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 16 供試品中抗菌活性的去除 稀釋法 降低供試品的相對濃度薄膜法 利用體積差異分離中和法 利用化學(xué) 生物 專屬性滅活離心法 利用沉降系數(shù)差異分離 各方法組合運用 效果更佳 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 17 抗菌活性去除效果的檢驗 應(yīng)根據(jù)供試品的特點 選擇敏感菌株 對供試品抗菌活性去除效果加以檢驗 陽性菌的回收實驗 再按藥典要求全面驗證 提高效率 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 18 選擇敏感菌株 間接方法 文獻 技術(shù)資料 可靠 直接方法 預(yù)實驗 體外抑菌實驗 參考選擇 一般中藥選擇枯草和金葡 一般抗生素根據(jù)抗菌譜選擇 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 19 表8選擇敏感菌株 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 20 二 方法驗證實驗的幾個要點 1 無菌檢查法驗證實驗要點2 微生物限度檢查法驗證實驗要點3 驗證實驗實例 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 21 1 無菌檢查法驗證實驗要點 樣品菌種和實驗用菌液標準化操作實驗器材 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 22 無菌檢查樣品 無菌檢查樣品 取樣量 量 樣品特性 質(zhì) 抗菌活性 劑型 檢驗數(shù)量 檢驗量 側(cè)重驗證實驗 側(cè)重無菌檢查 敏感菌選擇去除抗菌活性方法選擇 前處理方法 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 23 無菌檢查樣品 主要是取樣量的問題 中國藥典 2005年版對無菌檢查的 檢驗數(shù)量 和 檢驗量 作了明確的解釋和規(guī)定 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 24 表2中上市抽驗樣品 液體制劑 的最少檢驗量 每種培養(yǎng)基各接種10支供試品 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 25 表3中上市抽驗樣品 固體制劑 的最少檢驗量 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 26 表3注釋 1 每種培養(yǎng)基各接種10支供試品 2 抗生素粉針劑 5g 及抗生素原料藥 5g 的最少檢驗數(shù)量為6瓶 或支 桶裝固體原料的檢驗數(shù)量為4個包裝 3 如果醫(yī)用器械體積過大 培養(yǎng)基用量可在2000ml以上 將其完全浸沒 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 27 無菌檢查樣品 三點體會 一是附錄規(guī)定檢驗量的表格中不包括陽性對照用樣品量 雖然附錄另處有專門說明 仍然容易忽略 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 28 無菌檢查樣品 三點體會 二是無菌檢查時應(yīng)強調(diào) 檢驗數(shù)量 主要是保證實驗結(jié)果的代表性 而陽性對照實驗和驗證實驗僅須滿足 檢驗量 總量要求即可 以檢驗樣品對實驗結(jié)果的影響 即保證實驗結(jié)果的可靠性 驗證實驗可以由此減少大量的樣品 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 29 無菌檢查樣品 三點體會 三是對 檢驗數(shù)量 和 檢驗量 的把握應(yīng)考慮便于實際操作 比如處理100ml 袋的樣品 取9袋樣品一次分配到一組三聯(lián)濾器 檢驗數(shù)量 大于藥典規(guī)定的6個 但 檢驗量 似乎不符合藥典規(guī)定的每袋樣品取半量檢驗的規(guī)定 僅為1 3 但根據(jù)藥典 檢驗量 即為 一次實驗所用供試品的總量 g或ml 的解釋 這與先將6袋分配兩個濾筒 再將剩下3袋抽入一個濾筒作為陽性對照的方法一樣 卻更節(jié)省時間 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 30 菌種和實驗用菌液 枯草芽孢桿菌Bacillussubtilis CMCC B 63501 金黃色葡萄球菌Staphylococcusaureus CMCC B 26003 生孢梭菌Clostridiumsporogenes CMCC B 64941 銅綠假單胞菌Pseudomonasaeruginosa CMCC B 10104 大腸埃希菌Escherichiacoli CMCC B 44102 白色念珠菌Candidaalbicans CMCC F 98001 黑曲霉Aspergillusniger CMCC F 98003 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 31 菌種和實驗用菌液 驗證用菌種的保藏使用頻繁傳代限制 5代 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 32 菌種和實驗用菌液 菌種保藏及應(yīng)用參考方法 干菌種 0代 100ml液體培養(yǎng)基復(fù)蘇 1代 100ml液體培養(yǎng)基復(fù)壯 2代 加100ml20 無菌甘油混勻 1ml 管凍存管分裝 20 或 80 保存每次使用取1支自然 室溫 解凍 取0 1ml接種至10ml液體培養(yǎng)基 生孢梭菌用12ml硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基 按規(guī)定培養(yǎng) 稀釋 3代 注意 已經(jīng)解凍的凍存管不能再冷凍保存 以免凍融 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 33 菌種和實驗用菌液 各實驗室應(yīng)根據(jù)自身操作習(xí)慣總結(jié)出一套切實可行 快速穩(wěn)定的菌液制備標準程序 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 34 菌種和實驗用菌液 參考菌液制備標準程序 取經(jīng)34 培養(yǎng)18 24小時的枯草芽孢桿菌 金黃色葡萄球菌 綠假單胞菌與大腸埃希菌的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)物1ml 加入9ml0 9 無菌氯化鈉溶液中 分別10倍稀釋備用 枯草芽孢桿菌至10 5 金黃色葡萄球菌10 6 綠假單胞菌與大腸埃希菌至10 7 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 35 菌種和實驗用菌液 參考菌液制備標準程序 取經(jīng)34 培養(yǎng)18 24小時的生孢梭菌硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)物1ml 加入9ml0 9 無菌氯化鈉溶液中 10倍稀釋至10 7備用 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 36 菌種和實驗用菌液 參考菌液制備標準程序 取經(jīng)24 培養(yǎng)18 24小時的白色念珠菌改良馬丁培養(yǎng)物1ml 加入9ml0 9 無菌氯化鈉溶液中 10倍稀釋至10 5備用 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 37 菌種和實驗用菌液 參考菌液制備標準程序 取經(jīng)培養(yǎng)一周的黑曲霉菌改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)物 加0 9 無菌氯化鈉溶液5ml 洗下孢子 轉(zhuǎn)移至另一空管 加0 9 無菌氯化鈉溶液至與標準比濁管濁度相當后 取1ml加入9ml0 9 無菌氯化鈉溶液中 10倍稀釋至10 4備用 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 38 菌種和實驗用菌液 關(guān)于黑曲霉 轉(zhuǎn)種操作應(yīng)在超凈工作臺 或相當此環(huán)境 中進行 關(guān)閉風機 靠近酒精燈操作 置23 28 培養(yǎng)5 7日 培養(yǎng)斜面形態(tài)可參照下圖 轉(zhuǎn)種完畢的凍存管和使用過的器具應(yīng)經(jīng)121 濕熱滅菌30分鐘再作處理 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 39 菌種和實驗用菌液 關(guān)于黑曲霉 黑曲霉孢子相當穩(wěn)定 可以保存于4 0 9 氯化鈉溶液中較長時間 作為孢子懸液儲備液使用 由此可以減少菌液制備工作量和反復(fù)操作黑曲霉的風險 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 40 菌種和實驗用菌液 菌液檢驗 結(jié)合驗證實驗方法進行活菌計數(shù) 生孢梭菌可在同步硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基靈敏度實驗中計數(shù) 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 41 標準化操作 方法選擇樣品處理沖洗方法和條件中和劑加入菌液加入 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 42 標準化操作 方法選擇取樣量大于5ml 支直接接種法不再適用 除非樣品不許可 難溶解 發(fā)展趨勢應(yīng)采用全封閉的薄膜過濾法 2020 1 29 43 可編輯 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 44 標準化操作 樣品處理主要強調(diào)固體樣品的溶解 轉(zhuǎn)移 均勻分配問題 通常將規(guī)定取樣量全部轉(zhuǎn)移到400 500ml稀釋劑或者適宜溶液 再進行分配 各廠家均專門開發(fā)有固體制劑 粉針 專用濾器 我們提出了更為簡便的無菌三針單聯(lián)管 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 45 標準化操作 沖洗方法強調(diào)少量多次 50ml 次 強調(diào)充分振搖 操作細節(jié)的標準規(guī)范 如集菌儀轉(zhuǎn)速 沖洗過程中蓋還是不蓋濾筒下口等等 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 46 標準化操作 菌液加入菌液組 供試品加菌液組嚴格一致 生孢梭菌的加入 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 47 標準化操作 中和劑加入不同中和劑加入方式可能效果不一樣 通過我們的經(jīng)驗 基本傾向于直接加入培養(yǎng)基中效果最好 但如果某些中和劑對微生物生長不利可考慮其他步驟加入 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 48 標準化操作 菌液加入按規(guī)定應(yīng)在最后一次沖洗液中加入陽性菌液 主要是考慮濾器的有效性 濾器的有效性應(yīng)由提供企業(yè)控制 用戶可采用適當方法抽查 如檢查陽性菌液通過濾筒的流出液 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 49 標準化操作 菌液加入而驗證實驗主要考慮濾膜 濾器殘留抗菌物質(zhì)對陽性菌生長的影響 可以與對照濾筒比較而做出判斷 所以驗證實驗中加菌時機與方式只要與對照一致即可 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 50 實驗器材 藥品無菌檢查最關(guān)鍵的器材是一次性過濾器 價格和質(zhì)量影響應(yīng)用 近期主要考慮安全可靠 使用方便 物美價廉 遠期應(yīng)進一步考慮低殘留 低吸附等 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 51 實驗器材 關(guān)于實驗器材問題 我們認為引入競爭 改進設(shè)計 推廣應(yīng)用 使產(chǎn)量 質(zhì)量和用量穩(wěn)步增長 成本和價格下降 使用戶和企業(yè)雙贏 有利于促進無菌檢查方法更加規(guī)范和科學(xué) 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 52 2 微生物限度檢查法驗證實驗要點 樣品菌種和實驗用菌液 同無菌檢查 回收率測定實驗控制菌檢查的驗證實驗器材 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 53 首先應(yīng)是合格的樣品 微生物限度檢查樣品 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 54 微生物限度檢查樣品 樣品給藥途徑和類型決定何種控制菌檢查驗證一般口服制劑驗證大腸埃希菌外用制劑驗證金葡和銅綠假單胞含藥材原粉 含豆豉 神曲等發(fā)酵成分的制劑的大腸菌群檢查驗證 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 55 抽樣量和檢驗量分別單列一項 抽樣量一般抽樣量為檢驗用量 2個以上最小包裝 的3倍 檢驗量指供試品一次檢驗的用量 一般為10g或10ml 化學(xué)藥膜劑為100cm2 貴重或微量包裝的藥品可酌減 不得少于3g 檢查沙門菌的供試品其檢驗量改為10g或10ml 驗證實驗按檢驗量執(zhí)行 微生物限度檢查樣品 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 56 微生物限度檢查樣品 制劑形式多樣 決定前處理各異難溶固體制劑非水溶性制劑軟膏 油膏栓劑等 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 57 供試液的制備制備供試液所用的乳化劑 分散劑 中和劑及其用量應(yīng)驗證 在該檢驗條件無抗菌作用 7類供試品供試液的制備 其中增訂 微生物限度檢查樣品前處理 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 58 非水溶性供試品 司盤80 單硬脂酸甘油酯 聚山梨酯80 供試品10g 20ml無菌十四烷酸異丙酯和無菌玻璃珠 必要時再加適量十四烷酸異丙酯 充分振搖 使供試品溶解 然后加45 100mlpH7 0蛋白胨氯化鈉緩沖液 振搖5 10分鐘 萃取 待油水分層后 取水層作為1 10供試液 微生物限度檢查樣品前處理 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 59 非水溶性膜劑供試品二部未變動 化學(xué)藥膜劑取100cm2 剪碎 加100mlpH7 0氯化鈉 蛋白胨緩沖液 浸泡 振搖 作供試液 一部中藥膜劑取50cm2 剪碎 加適量的pH7 0氯化鈉 蛋白胨緩沖溶液 50或100ml 浸泡 振搖 以供試品浸液為供試液 SOP2000版規(guī)定 中藥膜劑取30 50cm2 剪碎 加水100ml 微生物限度檢查樣品前處理 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 60 腸溶及結(jié)腸溶制劑供試品10g 加100mlpH6 8無菌磷酸鹽緩沖液 腸溶制劑 或pH7 6無菌磷酸鹽緩沖液 結(jié)腸制劑 于45 水浴振搖 使溶解 微生物限度檢查樣品前處理 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 61 氣霧劑 噴霧劑供試品取規(guī)定量供試品 置冷凍室冷凍1h 取出 迅速消毒供試品開啟部位周圍 用無菌鋼錐鉆一小孔 放置室溫 并輕輕轉(zhuǎn)動容器 使拋射劑全部拋出 以無菌注射器吸出全部藥液 按標示量加稀釋劑至足量 若含非水溶性成份 加適量無菌聚山梨酯 80液 使勻 取相當于10g或10ml的供試品 再稀釋成1 10的供試液 微生物限度檢查樣品前處理 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 62 具抑菌活性的供試品供試品接種至較大量的培養(yǎng)基中 1ml供試液可等量分注多個平皿 控制菌檢查 可加大增菌培養(yǎng)基的用量 或采用薄膜過濾法 離心集菌法薄膜過濾法 微生物限度檢查樣品前處理 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 63 微生物限度檢查樣品前處理 很有用處的低速離心法 500r minX5min 阿奇霉素緩釋干混懸劑紅霉素片 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 64 微生物限度檢查樣品前處理 制劑形式多樣 決定前處理各異目標是使不便于取樣的供試品分散均勻 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 65 微生物限度檢查法驗證 細菌 霉菌及酵母菌數(shù)計數(shù)方法驗證定量 回收率測定實驗控制菌檢查方法驗證定性 能否生長 專屬性實驗 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 66 在建立供試品的細菌 霉菌和酵母菌計數(shù)方法或原法的檢驗條件有改變可能影響檢驗結(jié)果的準確性 應(yīng)對檢查法的可靠性進行驗證 驗證時做規(guī)定菌的回收試驗 以判斷供試品是否具有抗菌活性的實驗方法 回收率測定實驗 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 67 驗證用菌株大腸桿菌 金黃色葡萄球菌 枯草芽孢桿菌 白色念株菌 黑曲霉 菌液制備 同無菌檢查法 取培養(yǎng)物用無菌氯化鈉溶液稀釋成1ml含50 100cfu的菌液 回收率測定實驗 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 68 驗證方法試驗組取規(guī)定量最低稀釋級的供試液 加入50 100cfu的菌液 按平板菌落計數(shù)方法測定其菌數(shù)或薄膜過濾計數(shù) 菌液組測定加入的試驗菌液的菌數(shù) 供試品對照組測定供試品稀釋液 本底 的菌數(shù) 稀釋劑對照組取稀釋液加入50 100cfu的菌液 按供試品組供試液制備方法和菌落計數(shù)方法測定其菌數(shù) 驗證試驗應(yīng)獨立平行進行3次 分別計算各次試驗菌的回收率 回收率測定實驗 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 69 回收率計算試驗組的菌回收率 試驗組平均菌落數(shù) 供試品對照組平均菌落數(shù) 菌液組平均菌落數(shù) 100 稀釋劑對照組的菌回收率 稀釋劑對照組的平均菌落數(shù) 菌液組的平均菌落數(shù) 100 回收率測定實驗 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 70 結(jié)果判斷稀釋劑對照組的菌回收率應(yīng)大于70 若試驗組的菌回收率均大于70 符合驗證試驗 可按此方法測定細菌 霉菌及酵母菌數(shù) 若任一次平行試驗中供試品組的菌回收率均小于70 不符合驗證試驗 應(yīng)建立新的檢驗方法 并重新驗證 驗證試驗可與供試品的細菌 霉菌及酵母菌計數(shù)同時進行 回收率測定實驗 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 71 回收率測定實驗 常規(guī)法 平皿法 薄膜過濾法 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 72 回收率測定實驗 常規(guī)法 平皿法 在采用培養(yǎng)基稀釋法時 應(yīng)注意避免在注皿前菌液和供試液直接接觸 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 73 回收率測定實驗 常規(guī)法 平皿法 稀釋法 0 5ml 皿 0 2ml 皿 每一平皿均應(yīng)加1ml菌液 培養(yǎng)基稀釋的表示 1 200 1 400 1 1000 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 74 回收率測定實驗 薄膜過濾法菌液檢驗 計數(shù) 應(yīng)與供試液同法處理 也要采用薄膜過濾法 2020 1 29 中國藥品生物制品檢定所 75 在建立供試品的控制菌檢查法或原法的檢驗條件有改變可能影響檢驗結(jié)果的準確性 應(yīng)對檢查法的可靠性進行驗證 驗證時做規(guī)定菌的回收試驗 以判斷供試品是否具有抗菌活性的實驗方法 控制菌檢查方法驗證 20