食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程.doc

食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)是否規(guī)范直接影響菌種的質(zhì)量，從而影響食用菌產(chǎn)品的質(zhì)量。我國(guó)食用菌菌種生產(chǎn)采用母種、原種、栽培種的三級(jí)繁育程序。為了實(shí)現(xiàn)食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)范化，確保菌種質(zhì)量，維護(hù)菌種生產(chǎn)者、經(jīng)營(yíng)者和使用者的合法權(quán)益，特制定本標(biāo)準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)的附錄a、附錄b均為規(guī)范性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由農(nóng)業(yè)部種植業(yè)管理司提出。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)農(nóng)業(yè)微生物中心、中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院土壤肥料研究所、農(nóng)業(yè)部食用菌產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心(上海)。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：張金霞、賈身茂、王南、左雪梅、申進(jìn)文 食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程1. 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了各種食用菌各級(jí)菌種生產(chǎn)的生產(chǎn)場(chǎng)地、廠房設(shè)置和布局、設(shè)備設(shè)施、使用品種、生產(chǎn)工藝流程、技術(shù)要求和貯存運(yùn)輸要求。本標(biāo)準(zhǔn)適用于各種各級(jí)食用菌苗種生產(chǎn)。2. 規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。gb 4789.28-1994 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 染色法、培養(yǎng)基和試劑gb 9387-1988 食品包裝用聚乙烯成型品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)gb 9688?1988 食品包裝用聚丙烯成型品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)3. 術(shù)語和定義 下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。3.1 品種strain經(jīng)各種方法分離、誘變、雜交、篩選而選育出來具特異性、均一(一致)性和穩(wěn)定性的具有同一個(gè)祖先的群體。也常稱作菌株或品系。3.2菌種pure cuture經(jīng)人工培養(yǎng)并可供進(jìn)一步繁殂或栽培使用的食用菌苗絲純培養(yǎng)物，包括母種、原種乳栽培種。3.3母種 stock culture經(jīng)各種方法選育得到的具有結(jié)實(shí)性的菌絲體純培養(yǎng)物及其繼代培養(yǎng)物，以玻璃試管為培養(yǎng)容器和單位，也稱一級(jí)種、試管種。3.4原種pre-culture spawn由母種移植、擴(kuò)大培養(yǎng)而成的菌絲體純培養(yǎng)物。常以玻璃菌種瓶或塑科菌種瓶或15 cm28 cm聚塑料袋為容器3.5栽培種spawn由原種移植、擴(kuò)大培養(yǎng)而虐的苗絲體純培養(yǎng)物。常以玻璃瓶、塑料瓶或塑料袋為容器栽培種只能栽培，不可再次擴(kuò)大繁殖菌種。3.6 種木wood-pieces木塞種用的一定形狀和大小的木質(zhì)顆粒，也稱種粒。3.7 固體培養(yǎng)基solid medium以富含木質(zhì)纖維素或淀粉類天然默源物質(zhì)為主要原；抖，填加適量白勺有機(jī)氮源朽無機(jī)鹽類，具一定水分含量的培養(yǎng)基。常用的主要原料有；木屑、棉籽殼、秸稈、麥粒、谷粒、玉米粒等，常用的有機(jī)氮源有麥麩、米糠等，常用的無機(jī)鹽類有硫駿鈣、硫茲鎂、磷酸二氫鉀等。固體培養(yǎng)基包括以闊葉樹木屑為主要原料的木屑培養(yǎng)基、以草本植物為主要原料的草料培養(yǎng)基、以禾谷類種子為主要原料的谷粒培養(yǎng)基、以腐熱料為原料的糞草培養(yǎng)基，以種木為主要原料的木塞培養(yǎng)基。3.8 種性 characters of strain食用菌的品種：痔性，是鑒別食用?菌種或品種優(yōu)劣的重要標(biāo)準(zhǔn)之一。一般包括對(duì)溫度、濕度、酸堿度、光線和氧氣的要求，抗逆性、豐產(chǎn)性、出菇遲早、出菇潮數(shù)、栽培周期、商品質(zhì)量及栽培習(xí)性等農(nóng)藝性狀4.技術(shù)要求4.1 技術(shù)人員 菌種廠應(yīng)有與菌種生產(chǎn)所需的相應(yīng)專業(yè)技術(shù)人員4.2 煽地選擇4.2.1基本要求 地勢(shì)高燥，通風(fēng)良好。排水暢通，交通便利。4.2.2 環(huán)境衛(wèi)生要求至少300m之內(nèi)無禽畜舍，無垃圾(糞便)場(chǎng)，無污水和其他污染源(如大量揚(yáng)塵的水泥廠、磚瓦廠、石灰廠、木材加工廠等)。4.3 廠房設(shè)置和布局4.3.1 廠房設(shè)置和建造有各自隔離的攤硒場(chǎng)、原材料庫(kù)、配料分裝室(場(chǎng))、滅菌室、冷卻室、按種室、培養(yǎng)室、貯存宣、菌種檢驗(yàn)室等。廠房建造從結(jié)構(gòu)和功能上滿足食用菌菌種生產(chǎn)的基本需要。 4.3.1.1 攤曬場(chǎng) 要求平坦高燥、通風(fēng)良好，光照充足、空曠寬闊。遠(yuǎn)離火源4.3.1.2 原材料庫(kù) 要求高燥、通風(fēng)良好，防雨，遠(yuǎn)離火源。4.3.1.3 配料分裝室(場(chǎng)) 要求水電方便，空間充足。如安排在室外，應(yīng)有天棚，防雨防曬4.3.1.4 滅菌室要求水電安全方便，通風(fēng)良好，空間充足，散熱暢通。4.3.1.5 冷卻室 潔凈、防塵、易散熱。4.3.1.6 接種室要設(shè)緩沖間，防塵換氣性能良好，內(nèi)壁和屋頂光滑，經(jīng)常清洗和消毒。做到空氣潔凈4.3.1.7 培養(yǎng)室和貯存室內(nèi)壁和屋頂光滑，便于清洗和消毒。培養(yǎng)室和貯存室墻壁要加厚，利于控溫4.3.1.8 菌種檢驗(yàn)室 水電方便，利于裝備相應(yīng)的檢驗(yàn)設(shè)備和儀器4.3.2布局 應(yīng)按菌種生產(chǎn)工藝流程合理安排布局。4.4 設(shè)備設(shè)施4.4.1 基本設(shè)備 磅秤、天平、高壓滅菌鍋或常壓滅菌鍋、凈化工作臺(tái)、接種箱、凋溫設(shè)備、除濕機(jī)、培養(yǎng)架、恒溫箱、冰箱、顯微鏡等及常規(guī)用具，產(chǎn)量大的菌種廠還應(yīng)配備攪拌機(jī)、裝瓶裝袋機(jī)高壓滅菌鍋應(yīng)使用經(jīng)有關(guān)部門檢驗(yàn)的安全合格產(chǎn)品。4.4.2 基本設(shè)施配料、分裝、滅菌、冷卻、接種培養(yǎng)等各環(huán)節(jié)的設(shè)施規(guī)模要配套。冷卻室、按種室、培養(yǎng)室和貯存室都要有調(diào)溫設(shè)施。4.5 使用品種4.5.1 品種應(yīng)使用經(jīng)省級(jí)以上農(nóng)作物品種審定委員會(huì)登記的品種，并且清楚種性。不應(yīng)使用來源和種性不清的菌種和生產(chǎn)性狀未經(jīng)系統(tǒng)試驗(yàn)驗(yàn)證的組織分離物作種源生產(chǎn)菌種。并從具相應(yīng)技術(shù)資質(zhì)的供種單位引種。4.5.2 移植擴(kuò)大母種僅用于移植擴(kuò)大原種，一支母種移植擴(kuò)大原種不應(yīng)超過6瓶(袋)；一瓶原種移植擴(kuò)大栽培種不應(yīng)超過50瓶(袋)。4.6 生產(chǎn)工藝流程培養(yǎng)基配制分裝滅菌冷卻接種培養(yǎng)(檢查)成品 4.7 生產(chǎn)過程中的技術(shù)要求4.7.1 容器4.7.1.1 母種使用玻璃試管和棉塞，試管18 mm180 mm1或20mm200mm，棉主要使用梳棉，不應(yīng)使用脫脂棉。 4.7.1.2 原種使用650 ml-750 ml，耐126高溫的五色或近五色的玻璃茵種瓶，或850 ml耐126高溫白色半透明符合gb 9687衛(wèi)生規(guī)定的塑料菌種瓶，或15cm28cm耐126高溫符合gb 9688衛(wèi)生規(guī)定的聚丙烯塑料袋各類容器部應(yīng)使用棉塞，棉塞應(yīng)符合4.7.1.1規(guī)定；也可用能滿足濾菌和透氣要求的無棉塑料蓋代替棉塞。4.7.1.3 栽培種 使用符合4712規(guī)定的容器，也可使用17 cm35 cm耐126高?符合gb 9688衛(wèi)生規(guī)定的聚丙烯塑料袋。各類容器都應(yīng)使用棉塞或無棉塑料蓋，并符合4712規(guī)定。4.7.2 培養(yǎng)原料4.7.2.1 化學(xué)試劑類這類原料如硫酸鎂、礦酸二氫鉀等，要使用化學(xué)純級(jí)試劑。4.7.2.2 生物制劑和天然材料類生物制劑如酵母粉和蛋白胨，天然材料如木屑、棉籽殼、麥麩等，要求新鮮、無蟲、無螨、無霉、潔凈；干燥。4.7.3培養(yǎng)基配方4.7.3.1 母種培養(yǎng)基 一般使用附錄a中第a.1章規(guī)定的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(pda)或第a.2章規(guī)定的綜合馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（cpda），特殊種類需加入其生長(zhǎng)所需特殊物質(zhì)，如酵母粉、蛋白胨、麥芽汁、麥芽糖等，但不應(yīng)過富。嚴(yán)格掌握ph值。4.7.3.2 原種和栽培種培養(yǎng)基根據(jù)當(dāng)?shù)卦腺Y源和所生產(chǎn)品種的要求，使用適宜的培養(yǎng)基配方（見附錄b），嚴(yán)格掌握含水量和ph值。4.7.4 分裝母種培養(yǎng)基的分裝量掌握在試管長(zhǎng)度的四分之一至五分之一，滅菌后擺放成的斜面頂端距試管口不少于50mm，原種和栽培種培養(yǎng)基裝至距瓶(袋)口不少于60 mm，滅菌后不少于45 mm。棉塞大小松緊要適度。原種和栽培種培養(yǎng)基的松緊度要一致。 4.7.5 滅菌母種的培養(yǎng)基配制分裝后應(yīng)立即滅菌；原種和栽培種培養(yǎng)基配制后應(yīng)在4 h內(nèi)進(jìn)鍋滅菌。母種培養(yǎng)基滅菌0.11 mpa?0.12 mpa，30min，木屑培養(yǎng)基和草料培養(yǎng)基滅菌0.12 mpa，1.5 h或0.14 mpa?0.15 mpa，1h，谷粒培養(yǎng)基、糞草培養(yǎng)基和木塞培養(yǎng)基滅菌0.14 mpa?0.15 mpa，2.5 h。裝容量較大時(shí)，滅菌時(shí)間要適當(dāng)延長(zhǎng)。滅菌完畢后，應(yīng)自然降壓，不應(yīng)強(qiáng)制降壓常壓滅菌時(shí)，在2 h之內(nèi)使滅菌室溫度達(dá)到100，保持1008 h?lo h。母種培養(yǎng)基、原種培養(yǎng)基、谷粒培養(yǎng)基、糞草培棄基和木塞培養(yǎng)基，應(yīng)高壓滅菌，不應(yīng)常壓滅菌。滅菌時(shí)應(yīng)防止棉塞被冷凝水打濕。4.7.6 滅菌效果的檢查母種培養(yǎng)基置于28恒溫培養(yǎng)，原種和栽培種培養(yǎng)基經(jīng)無菌操作接種于gb 4789.28-1994中4.8規(guī)定的營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，于28恒溫培養(yǎng)，48 h后檢查，無微生物長(zhǎng)出的為滅菌合格。4.7.7 冷卻冷卻室使用前要進(jìn)行清潔和除塵處理。地面鋪消毒過的塑料薄膜后，將滅菌后的原種瓶（袋）或栽培種瓶（袋）放置在冷卻室中冷卻到料溫降至適宜溫度。4.7.8 接種4.7.8.1 接種室（箱）的基本處理程序清潔搬入接種物和被接種物接種室（箱）的消毒處理。4.7.8.2 接種室（箱）的消毒方法 用藥物消毒并用紫外燈照射4.7.8.3 凈化工作臺(tái)的消毒處理方法先用75酒精或新潔爾滅溶液進(jìn)行表面擦拭消毒，然后預(yù)凈20min4.7.8.4 接種操作：在無菌室（箱）或凈化工作臺(tái)上嚴(yán)格按無菌操作接種。接種完成后及時(shí)貼好標(biāo)簽。4.7.8.5 接種室（箱）后處理接種室每次使用后，要及時(shí)清理清潔，排除廢氣清除廢物，臺(tái)面要用75酒精或新潔爾滅溶液擦試消毒。4.7.9培養(yǎng)室處理：在使用培養(yǎng)室的前兩天，采用藥物消毒。4.7.10培養(yǎng)條件根據(jù)培養(yǎng)物的不同生長(zhǎng)要求，給予其適宜的培養(yǎng)溫度（多在22-28），保持空氣相對(duì)濕度在 %以下，通風(fēng)，避光。4.7.11培養(yǎng)期的檢查各級(jí)菌種培養(yǎng)期間應(yīng)定期檢查，及時(shí)揀出不合格菌種4.7.12入庫(kù) 完成培養(yǎng)的菌種要及時(shí)登記入庫(kù)。4.7.13記錄 生產(chǎn)各環(huán)節(jié)應(yīng)詳細(xì)記錄。4.7.14 留樣各級(jí)菌種都應(yīng)留樣備查，留樣的數(shù)量應(yīng)以每個(gè)批號(hào)母種3?5支，原種和栽培種5?7瓶（袋），于4-6下貯存，貯存至使用者在正常生產(chǎn)條件下該批菌種出第一潮菇（耳）。 附錄a （規(guī)范性附錄）母種常用培養(yǎng)甚及其配方a.1 fda培養(yǎng)基(馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基)馬鈴薯200 g(用浸出汁)，葡萄糖20g，瓊脂20g，水1000ml，ph值自然。a.2 cpda培養(yǎng)基(綜臺(tái)馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基)馬鈴薯200g(用浸出汁)，葡萄糖20g，磷酸二氫鉀2g，硫酸鎂o.5g，瓊脂20g，水1000 ml，ph值自然。附 錄 b(規(guī)范性附錄)原種和栽培種常用培養(yǎng)基配方及其適用種類b.1 以木屑為主料的培養(yǎng)基配方見b.1.1、b.1.2、b.1.3，適用于香菇、黑木耳、毛木耳、平菇、金計(jì)菇、滑菇、雞腿菇、真姬菇等多數(shù)木腐菌類。b.1.1 闊葉樹木屑78%，麩皮20%，糖1，石膏1，含水量58%士2%。b.1.2 闊葉樹木屑63%，棉籽殼15，麩皮20%，糖l，石膏l(xiāng)，含水量58%土2%。 b.1.3 闊葉樹木屑63%，玉米芯粉15，麩皮20，糖l，石膏1%，含水量58%土2%b.2 以棉籽殼為主料的培養(yǎng)基見b.2.1、b.2.2、b.2.3、b.2.4，適用于黑木耳、毛木耳、金針菇、滑菇、真姬菇、楊樹菇、雞腿菇、側(cè)耳屬等多數(shù)木腐菌類b.2.1 棉籽殼99%，石膏l(xiāng)，含水量60土2%。b.2.2 棉籽殼84一89%，麥麩l0一15%，石膏1%，含水量60士2%。b.2.3 棉籽殼54一69%，玉米芯20一30，麥麩lo?15%，石膏1，含水量60土2%。b.2.4 棉籽殼54一69%，闊葉樹木屑20-30%，麥麩10?15%，石膏1%，含水量60士2%。b.3 以棉籽殼或稻草為主的培養(yǎng)基見b3.1、b3.2、b.3.3適用于草菇。b.3.1 棉籽殼99%，石灰1%，含水量68土2。b.3.2 棉籽殼84?89%，麥麩10?15%，石灰1%，含水量68土2。b.3.3 棉籽殼44%，碎稻草40%，麥麩15%，石灰1%，含水量68土2。b.4 腐