紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)應(yīng)用與日常維護(hù)

2014/8/8 版權(quán)所有 (C)北京普析通用 湖北分公司 1 2014/8/8 版權(quán)所有 (C)北京普析通用 湖北分公司 2 Beijing Purkinje General Instrument Co.,Ltd. 紫外可見(jiàn)分光光度計(jì) 應(yīng)用與日常維護(hù) 2014/8/8 版權(quán)所有 (C)北京普析通用 湖北分公司 3 簡(jiǎn)單回顧 主要部件 儀器展示 比色皿的沾污問(wèn)題 試樣的光解與防止 紫外區(qū)常用溶劑的最短可用波長(zhǎng) 測(cè)樣不穩(wěn)定的原因 常見(jiàn)的非儀器問(wèn)題 鎢燈、氘燈的更換 主要內(nèi)容 2014/8/8 版權(quán)所有 (C)北京普析通用 湖北分公司 4 目的 多年的經(jīng)驗(yàn)、教訓(xùn)、體會(huì)與大家交流和共賞 適用性強(qiáng)，提高儀器使用者的應(yīng)用水平 從客觀視角看待國(guó)產(chǎn)紫外的現(xiàn)狀，正確對(duì)待國(guó)貨。 日常分析對(duì)儀器的性能需求、價(jià)格、后期使用及維護(hù)成本。 尖端有距離，但日常分析不需要。 物質(zhì)對(duì) 光 的吸收是 選擇性 的，利用被測(cè)物質(zhì)對(duì)某波長(zhǎng)的光的吸收來(lái)了解物質(zhì)的特性，這就是 光譜法 。 測(cè)定被測(cè)物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)的光的吸收強(qiáng)度（吸光度），以波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)作圖，得出該物質(zhì)在測(cè)定波長(zhǎng)范圍的 吸收曲線 。 簡(jiǎn)單回顧 2014/8/8 版權(quán)所有 (C)北京普析通用 湖北分公司 6 物質(zhì)對(duì)光的吸收遵循如下規(guī)律 朗伯定律：物質(zhì)對(duì)光的吸收與其厚度成正比 比爾定律：物質(zhì)對(duì)光的吸收與其濃度成正比 朗伯 比爾定律：朗伯、比定律的結(jié)合 以上條件成立的必需條件：濃度適當(dāng) 試樣濃度大多取 10g/ml 100g/ml（相當(dāng) 0.3 0.7Abs左右）為最佳 簡(jiǎn)單回顧 2014/8/8 版權(quán)所有 (C)北京普析通用 湖北分公司 7 紫外 -可見(jiàn)分光光度法 (ultraviolet-visible spectrophotometry, UV-VIS) 按所吸收光的波長(zhǎng)區(qū)域不同，分為紫外分光光度法和可見(jiàn)分光光度法，合稱為紫外 -可見(jiàn)分光光度法。 它是利用物質(zhì)的分子或離子對(duì)紫外可見(jiàn)波段范圍（ 150nm到 800nm）單色輻射的吸收或反射強(qiáng)度來(lái)進(jìn)行物質(zhì)的 定性分析 、 定量分析 或 結(jié)構(gòu)分析的方法 。 所依據(jù)的光譜是分子或離子吸收入射光中特定波長(zhǎng)的光而產(chǎn)生的吸收光譜。 簡(jiǎn)單回顧 紫外 -可見(jiàn)分光光度法的特點(diǎn)： 1 與其它光譜分析方法相比，其儀器設(shè)備和操作都比較簡(jiǎn)單，費(fèi)用少，分析速度快 ； 2 靈敏度高 ； 3 選擇性好 ； 4 精密度和準(zhǔn)確度較高 ； 5 用途廣泛。 簡(jiǎn)單回顧 紫外 -可見(jiàn)分光光度計(jì) 光源； 單色器； 吸收池； 檢測(cè)器； 顯示與數(shù)據(jù)處理； 簡(jiǎn)單回顧 2014/8/8 版權(quán)所有 (C)北京普析通用 湖北分公司 10 在紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)中，常用的光源有兩類： 熱輻射光源和氣體放電光源 光源 熱輻射光源用于可見(jiàn)光區(qū)，如鎢燈和鹵鎢燈；氣體放電光源用于紫外光區(qū)，如氫燈和氘燈。 主要部件 2014/8/8 版權(quán)所有 (C)北京普析通用 湖北分公司 11 吸收池又稱比色皿或比色杯，按材料可分 為玻璃吸收池和石英吸收池 玻璃比色皿不能用于紫外區(qū)。 區(qū)分方法 :可用儀器實(shí)測(cè)紫外區(qū) 200nm波長(zhǎng)處的吸光度值。 吸收池 主要部件 2014/8/8 版權(quán)所有 (C)北京普析通用 湖北分公司 12 因比色皿的使用不當(dāng)易導(dǎo)致數(shù)據(jù)重復(fù)性差 角度、位臵變化、表面潔凈度、污染程度 注意：粘接的比色皿不適合裝濃硫酸、不適合用高于 25瓦的超聲波機(jī)清洗 吸收池 主要部件 2014/8/8 版權(quán)所有 (C)北京普析通用 湖北分公司 13 檢測(cè)器的作用是檢測(cè)光信號(hào)，并將光信號(hào) 轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)。現(xiàn)今使用的分光光度計(jì)大多采 用光電管或光電倍增管作為檢測(cè)器。 檢測(cè)器 主要部件 1、 高檔 - 紫外可見(jiàn)分光光度計(jì) TU-1950 TU-1950紫外可見(jiàn)分光光度計(jì) 儀器展示 1、 高檔 - 紫外可見(jiàn)分光光度計(jì) 19系列 TU-1901/1900 紫外可見(jiàn)分光光度計(jì) 儀器展示 2、 中檔 - 紫外可見(jiàn)分光光度計(jì) 18系列 181系列（準(zhǔn)雙光束） /188系列（雙光束） 儀器展示 3、 普及型 - 紫外可見(jiàn)分光光度計(jì) T6系列 T6 紫外可見(jiàn)分光光度計(jì) 儀器展示 2014/8/8 版權(quán)所有 (C)北京普析通用 湖北分公司 18 比色皿的沾污問(wèn)題 重視比色皿的沾污問(wèn)題的重要性 在日常的分析工作中，許多工作者往往不大重視比色皿的沾污問(wèn)題。其實(shí)，這個(gè)非常重要。比色皿沾污會(huì)直接嚴(yán)重影響分析測(cè)試的結(jié)果 如何鑒別比色皿是否被沾污 肉眼觀察： 如果有污點(diǎn)，就應(yīng)清除掉；可用高級(jí)擦鏡紙、軟的黃鼠狼毛筆等柔軟的物質(zhì)擦洗 儀器檢查： 光譜掃描方式或光度測(cè)量模式下，設(shè)好參數(shù) (波長(zhǎng)、測(cè)光方式等 )；空著儀器的樣池架；蓋上樣品室蓋板、校零；比色皿內(nèi)裝入 3/4高度蒸餾水，并正確放入試樣池架內(nèi)，使之處于光路中；掃描或讀數(shù)；根據(jù)參考值分析顯示的結(jié)果以區(qū)分比色皿是否臟污。 參考方法：從光譜長(zhǎng)波至短波，顯示平滑。參考值： 400nm以上，應(yīng)小于 0.08 Abs，從 400nm至 200nm吸光度平滑上升過(guò)渡， 200nm應(yīng)小于0.13Abs，如果發(fā)現(xiàn)有超出限象，可以按方法清潔再測(cè)試，各波長(zhǎng)下 Abs降至最低可判斷為凈潔。 2014/8/8 版權(quán)所有 (C)北京普析通用 湖北分公司 19 比色皿的沾污問(wèn)題 如何解決比色皿沾污的問(wèn)題 用洗液清洗： 當(dāng)發(fā)比色皿被沾污時(shí)可用洗液清洗。但有些比色皿被沾污用洗液清洗是解決不了問(wèn)題的。如比色皿被粘著力很強(qiáng)的物質(zhì)沾污（如被木質(zhì)素沾污），或特濃的試樣沾污，并且凝結(jié)在比色皿的通光面上，用洗液清洗是不行的 用超聲波清洗： 當(dāng)發(fā)比色皿被沾污時(shí)，可用 20瓦的玻璃儀器清洗超聲波超洗半小時(shí)，一般都能解決問(wèn)題。但是要特別注意，不能用大功率超聲波來(lái)清洗比色皿，否則，會(huì)損壞比色皿。 此外，還應(yīng)特別注意的是，不能用金屬棒或硬的木棒 (如牙簽等 )重擦比色皿，否則，也會(huì)損壞比色皿的通光面。還不能用帶易掉毛的工具 (如劣質(zhì)紙、劣質(zhì)棉花等 ) 擦拭比色皿的受光面， 不要用洗潔精之類的清潔劑。以免影響測(cè)量。 2014/8/8 版權(quán)所有 (C)北京普析通用 湖北分公司 20 注意防止試樣的光解 所謂光解，是指試樣在紫外光的照射下會(huì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。 試樣的光解是從事紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)的分析工作者會(huì)經(jīng)常碰到的一個(gè)棘手的問(wèn)題。許多使用者，特別是年輕的分析測(cè)試工作者，因?yàn)槿狈?jīng)驗(yàn)，往往碰到試樣的光解時(shí)，不會(huì)判斷，反而認(rèn)為是儀器不好，去找儀器的問(wèn)題。結(jié)果事倍功半 如何處理有光解的試樣 一般可以采用兩種方法處理；其一，把試樣存放在棕色瓶中保存，因?yàn)樽厣坎煌缸贤夤猓梢苑乐乖嚇庸饨?；其二，將存放試樣的瓶子，用黑紙包住，也同樣可防止試樣光解。這兩種方法，都可以有效的解決防止試樣光解的問(wèn)題。 2014/8/8 版權(quán)所有 (C)北京普析通用 湖北分公司 21 如何判斷被測(cè)試樣有光解現(xiàn)象呢？ 這是年輕的分析工作者們感到棘手的問(wèn)題；其實(shí)，很好判斷。首先要 看規(guī)律 ；對(duì)同一個(gè)試樣多次測(cè)量，看其吸光度值是否都是向同一個(gè)方向變化；例如 :在多次測(cè)試中，吸光度值從第一次到最后一次測(cè)試的數(shù)據(jù)都是一直在減小，或一直在增大，這就可能是光解現(xiàn)象所引起的，即試樣可能有光解。如果不是向同一個(gè)方向變化，在多次測(cè)試中，吸光度值有時(shí)增大，有時(shí)減小，就可以肯定不是光解所致，應(yīng)另找原因；如果多次測(cè)試的數(shù)據(jù)是向同一個(gè)方向變化，這時(shí)，可將試樣倒進(jìn)比色皿中，放在比色皿架上，蓋好樣品室蓋，作一次測(cè)試后，不要把試樣取出來(lái)；而將樣品室的光路用文獻(xiàn)卡片擋住，待半小時(shí)后取去文獻(xiàn)卡，再重復(fù)測(cè)試多次；如果試樣有光解特性，其測(cè)試的數(shù)據(jù)就會(huì)不變。如果試樣沒(méi)有光解，而是其它原因使測(cè)試數(shù)據(jù)不穩(wěn)定，則測(cè)試的數(shù)據(jù)仍然會(huì)不斷在變化。這時(shí)分析測(cè)試工作者，應(yīng)再找不穩(wěn)定的原因。 注意防止試樣的光解 2014/8/8 版權(quán)所有 (C)北京普析通用 湖北分公司 22 紫外區(qū)常用溶劑的最短可用波長(zhǎng) 溶劑 nm 溶劑 nm 溶劑 nm 溶劑 nm 二硫化碳 380 四氯化碳 265 乙醚 220 二甲替甲酰胺 270 丙酮 330 甲酸甲脂 260 乙腈 215 1,2-二氧乙烷 230 吡啶 305 乙酸、乙脂 260 乙醇 210 對(duì)二氧六環(huán) 220 四氯乙烯 290 氯仿 245 正乙烷 220 乙酸正丁脂 260 甲苯 285 二氯甲烷 235 異丙醇 210 異辛烷 210 苯 280 甘油 220 甲醇 210 甲基環(huán)已烷 210 96%硫酸 210 環(huán)已烷 210 正丁烷 210 2,2,4-三甲戊烷 215 水 210 2014/8/8 版權(quán)所有 (C)北京普析通用 湖北分公司 23 測(cè)樣不穩(wěn)定和不準(zhǔn)確的原因 市電不穩(wěn) 如：大功率用電器的啟停 (空調(diào)、烘箱、大型電機(jī)、電爐等 ) 比色皿的原因 如：紫外區(qū)錯(cuò)用玻璃比色皿；臟污；比色皿質(zhì)量差； 操作原因 如：參數(shù)設(shè)臵不當(dāng)；樣池架設(shè)臵不當(dāng)；比色皿放臵傾斜、晃動(dòng)；取放比色皿方向不豎直，用力過(guò)大使樣池架挪位等。 樣品自身的問(wèn)題 如：空白值過(guò)大、樣品濃度過(guò)高，超出動(dòng)態(tài)線性范圍；試劑等被污染或純度不高；有氣泡；樣品顯色在變化，未穩(wěn)定；有懸浮或沉淀物；見(jiàn)光分解；揮發(fā)、溶劑使用不當(dāng)?shù)?環(huán)境影響 如：溫度、濕度、粉塵、電場(chǎng)、磁場(chǎng)、振動(dòng)等影響 儀器自身或 PC機(jī)的原因 如 ：光源及光學(xué)器件、電路、機(jī)械、計(jì)算機(jī)病毒等 2014/8/8 24 常見(jiàn)的非儀器問(wèn)題 自檢時(shí)提示樣品池電機(jī)項(xiàng)失敗，或有常異響聲； 樣品室內(nèi)放臵有干燥劑或雜物，造成機(jī)械卡住。 自檢時(shí)提示光源電機(jī)項(xiàng)失敗； 樣池架類型設(shè)臵錯(cuò)誤 (樣品池類型與使用樣池?cái)?shù)的區(qū)別 )、自檢時(shí)樣品池架內(nèi)放有比色皿或其它物件擋了光、光源未點(diǎn)亮或老化、損壞等。 自檢時(shí)提示鎢燈能量低或提示氘燈能量低； 同上一條原因 自檢時(shí)提示氘燈能量高 附件類型設(shè)臵錯(cuò)誤 (非積分球附件錯(cuò)設(shè)臵成積分球 ) 2014/8/8 版權(quán)所有 (C)北京普析通用 湖北分公司 25 鎢燈、氘燈的更換 1. 鎢燈座 2. 鎢燈座固定釘 3. 光源反射鏡 4. 氘燈卡子 5. 氘燈 6. 鎢燈 7. 鎢燈固定釘 8. 入射狹縫 注意：在更換氘燈及鎢燈時(shí)注意保護(hù)光源反射鏡鏡 面，禁止觸摸鏡面以及擦拭鏡面。 2014/8/8 版權(quán)所有 (C)北京普析通用 湖北分公司 26 鎢燈、氘燈的更換 鎢燈更換 儀器需要更換鎢燈一般有這幾種情況如 :鎢燈不亮、玻璃表面變黃或變黑、燈體漏氣變白等。 儀器的鎢燈設(shè)計(jì)為插座型，鎢燈已套裝在鎢燈座上 ,出廠前已調(diào)好，更換時(shí)打開光源室，松開 2個(gè)鎢燈座固定螺釘，取下鎢燈座。松開鎢燈固定螺釘取下壞鎢燈，將新鎢燈換上并調(diào)整鎢燈，使燈絲中心與鎢燈座底部距離為 40mm，之后擰緊鎢燈固定螺釘。 將換完新鎢燈的鎢