（分析化學專業(yè)論文）茶多酚cu（Ⅱ）配合物殺菌性能的研究.pdf

巾國農(nóng)業(yè)太學碩士學穗論文麓要 摘要 本文對茶多酚的提取及其穩(wěn)定能、純學缽系中茶多黼與銅的相互作用、茶多酚及茶多酚- c u ( i t ) 配合物生物活性蘭方面進行了研究，結果如下： p 壬 簸、溫度敷辯閹三個因素對茶多酚的穩(wěn)定性均寄著不同程度靜影相，箕中馥p h 壤鶼彰響 最為顯著。茶多酚在酸性介質中( p i 5 2 9 ) 具有較好的穩(wěn)定性，而在中性和堿性介質中( p 7 3 3 ) 穩(wěn)定性較嫠。 溶液的p h 值對兒茶素與銅離子絡合作用的影響較大。當p h 5 9 1 時，銅離子對兒茶豢的紫 外可見吸收光譜的影響逐灝增大，b 茶素黲蜷攝吸收峰由2 7 5 n m 紅移楚3 2 0 r i m 處，同封峰形 也相應發(fā)生變化。p h = 5 9 l 時，銅離子與e g c g 的絡臺比為2 ：1 ；p h = 7 3 3 時，銅離子與e g c g 的絡合嗽為1 ：1 。 c u s 0 4 與e g c g 、c u s o 與c a t 不同配搬組合豹簧配劑對棉花括萎病瘸原薔和棉花炭疽病病 原菌的抑菌作用相對較高予單劑，其中c u s 0 4 + f c r c g ( 2 ：1 ) 的e c 5 0 相對較好為3 4 4 2m g l ：對 小麥赤霉癮病囂蘩沒有捧鍘俸瑤，毽竅一定的鬻j 激生長 箏臻。c u s 0 4 與e g c g 、c e s o , 專c a t 各 l ! i 己比的復酉己劑對犬腸桿菌和葡萄球菌無抑菌潘性，生物活性不如各單劑。 本磷究為尋找耨的銅索蓉鎣裁、實現(xiàn)茶多黲瓣綜合利用提供7 參考。 關鍵詞：茶多酚，銅離子，絡合作用，生物滋性 中國農(nóng)業(yè)夭學碩士學位論文 a t r s l r a e t a b s t r a c t t os e a r c hn e wc o p p e rg e r m i c i d e sa n dn e wu o ft e ap o l y p h e n o i s ( t p ) t h i sp a p e rs t u d i e do nt h r e e p a r t s ：t e ap o l y p h e n o i s e x t r a c t i o na n ds t a b i l i t y , t e ap o l y p h e n o l s i n t e r a c t i o n sw i t hc u 2 + i nc h e m i c a l s y s t e m s ，b i o a c t i v i t yo f t p c u c o m p l e x e s t h er e s u l t sa sf o l l o w s ： t h et h r e ef a c t o r so fp hv a l u e ，t e m p e r a t u r ea n dt i m eh a dd i f f e r e n te f f e c t so nt h es t a b i l i t yo ft e a p o l y p h e n o l s ，w i t ht h e 蟬v a ko ft h e s ts i g n i f i c a n te f f e c t 。t e ap o l y p h e n o i sh a db e t t e ts t a b i l i t yi n a c i dm e d i u m p h i 5 9 1 ，c o p p e ri o n s i n f l u e n c e dt h eu l t r a v i o l e t - v i s i b l ea b s o r p t i o ns p e c t r ao ft h ec a t e c h i n si n c r e a s i n g l y , t h ef e a t u r ew a v e l e n g t h a b s o r p t i o nm o v e dt o3 2 0 r i mf r o m2 7 5 n m ，a n da b s o r p t i o ns p e c t r aa l s oc o r r e s p o n d i n g l ye h a n 辨d 。i nt h e m e a n t i m e w e f o u n d t h a t t h er a t i oo f c u 2 + a n d e g c g w a s 2 ：1 i n t h es o l u t i o n o f p h5 9 1 ；a n d t h e r a t i o o f c u 2 + a n de g c gw a si ：1a tp r l = 7 3 3 t h ea n t i f u 氈g ia c t i v i t yo fc u s o , + e g c g ( 1 ：1 ) ，( 2 ：1 ) ，( 1 ：2 ) a n dc u s 0 4 + c a t ( 1 ：1 ( 2 ：1 ) ( 1 ：2 ) a g a i n s tf u s a r i u mo x y s p o r u ms c h l 蠢w a sm u c hh i g h e rt h a ne a c hs i n g l ed o s e 屯a c t i v i t ya g a i n s t g i b b e r e l l az e a e ( s c h 川p e t c h ，b u tt h e r ew a ss o m es t i m u l a t i n ga c t i v i t yo fg r o w t h t h eb a c t e r i c i d a l a c t i v i t y o f c a t e e h i n - c o p p e r ( t i ) c o m p l e xa g a i n s t es c h e r i c h i ac o l i a n d s t a p h y l o c o c c u sa u r e u s w a s m u c h l o w e rt h a ne a c hs i n g l ed o s e k e y w o r d s ：t e ap o l y p h e n o l s ( r p ) ，c o p p e r ，c o m p l e x ，b i o a c t i v i t y ! 獨創(chuàng)性聲明 本人聲明所呈交的論文是我個人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成 果。盡我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā) 表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得中國農(nóng)業(yè)大學或其它教育機構的學位或證書 而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明 確的說明并表示了謝意。 研究生簽名：三熙 時間： 2 卯6 年月f b 關于論文使用授權的說明 本人完全了解中國農(nóng)業(yè)大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，即：學校有權保留 送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復 制手段保存、匯編學位論文。同意中國農(nóng)業(yè)大學可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、 傳播學位論文的全部或部分內容。 ( 保密的學位論文在解密后應遵守此協(xié)議) 研究生簽名 導師簽名： 辯 時間：刪6 時間：矽 年6y j | 爭e 1 年 勘f e l 中國農(nóng)業(yè)火學碩士學位論文 第一章緒論 皇糕舞皇曼! 置寡罾刪算獬麓蔓皇蔓罩邕i i ll 量算躺基暑黑暑量芭篁皇量詈皇巴醴喇皇曩- 。 茶多酚的磷突進震 1 + 1 1 茶多酚的絡構和性質 第一章緒論 茶參酚f l e a p o l ”h e 柏w r p ) 戇茶葉中的燕要生理活憔成分。又耄茶單寧、荼鞣質，是茶葉所含 的一類多羥基類化含物的總稱。它是天然植物茶葉中分離提純的3 0 多種脂類化合物的復臺體，約 占茶磚予鐫震慧量瓣1 8 - 3 6 ，玄分毒廣( 穰穆各器寓都蠢，毽主凝集孛予嫩精幫芽) ，交健夫 ( 受內外因的影響最大) ，對茶葉品質的影響最為顯藿，是茶葉生物化學研究煅多的一類化臺物。 其主要成分為黃烷醇郯a v a u o k ) 、黃酮類( f l a v o n o i d s ) 、黃酮醇擻、花青素類、酚酸、縮酚酸 類及聚會黔類等萁串焚烷酵幫遴常所稼瓣j b 茶素類詫套耪( c a t e c h i n s ) ，它為茶多酪靜主體袋分， 約占茶多酚總量的6 5 8 0 。兒茶素類化物主要包括表沒食予幾茶素沒食乎酸酯【( ) 一 e p i g a l l o c a t e e h i n 一3 一g a l l a 把( e g c g ) 】、表沒食t - j l , 茶索l ( 一) 一e p i g a l l o c a t e c h i n ( e g c ) 】、襲兒 茶素沒食予酸酯f 蔣洱茶 茳茶 鳥茂茶；4 靜茶的絡臺效應隨葬重聞增熱磊降低，臻因可能 是c u ”能使茶葉中兒茶素氧化反成加快，從而降低茶湯的絡合效應。郭炳瑩等】人用贏接觀察法、 酒石酸亞鐵法和絡黑t 法對綠茶茶湯組分與2 3 種金屬離予的絡含性能進行研究發(fā)現(xiàn)，c a 2 + 、 m n 7 + 、b i “、z n 2 、c 擴、a g + 、t h 4 + 、s r 2 + 、h 9 2 、s b “、妒+ 、羚蟊、m 0 6 + 、必2 + 等1 5 靜 離子與茶湯有明顯的反應發(fā)生，生成了具有特征顏色的絡合物。蕭偉祥簿腳l 研究茶黃色素( t y p ， 主要成分是簧酮類純臺物及，l 茶索氧化聚合銹) 對金屬離予的依糟，菠凝r 釋辯a p 、c a “輔“ 的絡念性較強，麗對c n “豹絡合性較弱。 。3 。2 蒸多黲與整壤離子終食物的形或 j b 茶素類征臺驄分予結穩(wěn)串翡羥蘩幫氧w 作為苓霜約魄子繚體，它在溶液串存在死釋穩(wěn)蒙。 這一性質使它與不問的金屬離子作用產(chǎn)生不同的結臺方式和能力。因而，實驗的條件對茶多酚配 臺物的形成有著重要影響。 f u m l k o 至王蟹披瓣】等人發(fā)現(xiàn)e g 與q | “、f e “、b + 形戒配臺物鶼最佳酸度為p h = 7 。4 ，與 a 1 ”作用的煅佳酸度分別為p i _ 5 0 。戚向陽忡j 等研究發(fā)習7 , e g c g 島g e ( i v ) 襁p h 6 5 - 7 0 的緩沖 溶液巾可形成e g c g - g e i v ) 金耩配合物，并接等鼙爾連續(xù)交換法及零衣院法濺定e g c g - g o ( i v ) 配合物組成為皿g g g 】【g e ( i v ) 1 = 2 ：1 ( m o l m 0 1 ) ，配合物的不穩(wěn)定常數(shù)為2 5 7 0 1 0 - “。李志南 等 4 9 1 入對茶霧酚與p b 2 + 絡臺反戚機理讖行研究發(fā)現(xiàn)，絡合反應分兩級讖行，兩級反鷹p b 2 + 與茶多 魏配比分別必2 ：l 秘1 ：1 。張玉艷等1 3 9 j 人研究t e g c g 與c u 2 + 形戲絡舍物豹象傳，袁強酸性c p s 、 4 o 時，e g c g 與q 一可以形成絡合物：在 p h = 6 o 靜己酸緩；申液中，c u “與e g c g 良2 ：l 結合靜：在p | _ 7 的硼酸緩；申液孛，c 缸“與e g c g 以1 ：l 絡臺。m i d o r i k u m a m o t o ( ”i 等研究認為銅離子與兒茶索的櫻互作用也與幾茶素的結構有關， e g c g 與e c g 在銅離子存在下解離常數(shù)顯著下降，而e c 茂e c - c 希t 現(xiàn)則不明顯，推測銅離子熏要與 e g c g 與e c 囂豹沒食子酸基弱結合。e m i k oo h y o s h i i s ”、唐德拯1 5 2 l 等利用分光光度法磷究e g c 鼴與 ”在醋酸緩沖液中的絡含度為1 ：1 ，得e g c g - a i 絡合物的形成常數(shù)為l o g k a i 。e g c g ：7 6 + 0 i 。 m i c h i k ob i n o u e t 5 3 1 研究了凡茶豢與棚”絡臺物的絡合眈，警e c 或楚e g c 與a 1 3 共存辯，形成絡臺 6 獍茲結構蔓f 淄釋囂0 、【淵嫌0 o 潮+ 秘f 泌8 找凌l 。；p h 4 。o 時，銅離予存在下e g c g 吸收光譜裔很大改變，這表 孵銅離子麓，0 荼素分予閹發(fā)生終含作溺，產(chǎn)生縫梅重捧產(chǎn)秘。紫， 競譜勞櫥霹對氌襤疲震捌f e 3 + 、 f e 2 、z n “、a 1 “與兒茶索類化合物絡合作用的研究中m 4 m 。 荼多酚與金屬離予絡臺物的效外光譜研究表明，茶多黔與金屬離子絡合物保留了茶多酚的基 本曹架繚椽。毽配合物的酚羥基數(shù)醬裙顯減少，說明茶多鼯與金屬離子絡音物豹形成；茶多鶼分 子中c 0 ，的吸收峰發(fā)上改變，說明茶多酚與金屬離子絡含后c - o - 鍵發(fā)生改變；分子中羰熬的吸 牧峰發(fā)生改變，說明茶多酚與金螨璃子絡臺囊羰基掰處豹化學環(huán)境發(fā)生了改變p ”。 于海寧等辮豫究了茶多酸在不辯濃度，不聞蠲僮，舉同金屬離子( f e 2 + ，c u 2 ，z n 2 + ) 存 在下的化學發(fā)光，結果表明，c 釅+ 可抑制茶辮酚的發(fā)光，而f e “在一定條件下促進發(fā)光，z n “對 茶多酚的化學發(fā)巍沒蠢影響。張黼疆等i 跚入發(fā)現(xiàn)金屬離子( c a 2 + ，a l “) 對荼多黔瓣發(fā)光將性的 盥接影確譽明顯，主黧邋過影響游離茶多酚濃度而降低冀熒光強度。 n m r 對配合物的結構表征和性質研究是一種非常有效的方法【蚰】。對于抗磁類金屬離予如 艇“，m i c h i k ob 。i n o u e 印磅究績聚曩示，e c c o 沒食予黢蒸( d 琢) 主豹囂令羥慕撂電子，磚矗l “ 形成絡合物 a l ( l 玨一) 】而 a 1 ( l 鞭s ) 蠕合物是由焦槽黢( b 環(huán)) 的一個羥基和d 環(huán)的兩個羥基 得電子而形成的。而對于順磁類盒屬離子如c e 2 、m n “，由于其離子中來成對的電子對配合物的 撼嘏會產(chǎn)生綴太豹影晌，扶囂導蒙瓣會魏約n m 建不可測。r o s a en & 牲。萼蘆1 狄榮翅測定l 掛原 子的馳豫時間研究了e g c g 、e c r c 島m n 2 的絡合作用，結果表明在形成配合物的過程中d 環(huán)比b 環(huán)具有更好的協(xié)調力，d 環(huán)對配合物的形成具有重要作用。 e s m s 采矮了溢秘載“簌邀囊”技術，壤薅遺蟄湊，k 茶素與金攥離子囂會物戇分子離子獐， 非常適合予金屬配合物的研究【艚l 。m t e r e z a f e r n a n d e # x j 掰f 究了幾茶索 ( + ) c a t e c h i n 與c u 2 + 、 f e “、f e “的絡合作用，得到了配食物的分子離子峰，經(jīng)分析表明( + ) 一兒茶綮與c u “、f e z + 、 f 礦配合魄秀1 ：1 。黃河宇等p l a 瞧萊耀h p l c - e s i o - t o f 箱m a l d i - t o f 矮港技零努輯，k 荼素 鍺多聚體特性。 7 1 3 2 茶多酚與金藕離子絡合作用靜生耪學漭往 1 3 2 1 茶多粉與金屬離子絡臺的解毒作用 重裊屬毒性作用主要在于它能與體內維持正常生理功能的配體結合，使其失去生理功能。兒 茶索可以與太多數(shù)象屬離子進行絡含，在定條件下能夠抑制某些金屬離子的吸收，緩解某些金 屬特剜燕重金屬中薅。 茶時利剡對鍛接業(yè)工人的職業(yè)性鍛中毒與鍛強收蠢較好的預駱和浚療捧翅，憝有效降低斑鉛 禽量，增加尿鉛的排出量，且能明顯提高蹙試者的血紅蛋白含量，對鍛毒造成的貧血也有一定的 治療作糟秘。茶多酚對f 礦的絡臺沉淀和還原所起的解毒律糯是茶旰的傈健功散之強。d e n i s b l a c h e 等【蟬j 發(fā)璦，b 榮素戇夠有效拿霉剃鐵過麓誘移豹盤滾過戴健愛瘟，秘盤小扳淫劫異常。 j e o n g - h w ac h o i 等附j 研究了兒榮素對慢性鎘( c d ) 中斑的影響，發(fā)現(xiàn)兒茶素能夠有效清除c d 過量 引起的骨代謝紊亂，恢復骨細胞對各種金屬離子的正常吸收并維持骨骼中各種金屬離子的正常含 量平簿。 1 ，3 2 童茶多酚與金屬離子的抗氧 l ：作用 茶彩酚具有良好的抗氧化活性，能夠有效清除自由基。機體內過渡金屬離子是自由基的另一 重要來源。榮多酚楚這鑒金屬離子的天然絡合荊，它提供電子給這些過渡金屬離子成為絡合物， 焉簿奉l 壘屬離子靜囊由蘩攘純作翊。茶多鶼在終含金耩離予瓣，是羰共囊# 鍵整體參與絡臺豹， 因而形成的絡合物較穩(wěn)定。許多實驗表明，多酚類對抑制愈屬離子催化的自由基反應異常有效， 且可用分光光度法檢測劉多酚類與金屬離子的絡合物。茶多酚絡臺c u 、f e 離子后，使其喪失催化 活性藹產(chǎn)生撬裁純作用；另一方露，形成躲茶多蘩絡舍穆仍保持瀵踩鑫出驀鷯活鏈， m i d o r ik u m a m o t o 等唧峨究金屬離子對兒茶索抗毓化活性的影響，發(fā)現(xiàn)在微酸性條件下，加 入c u “后體系中耗輟量增加，c u 2 + 可以顯著提高兒茶素的抗氧化活性，f 護則明最降低兒茶紊抗 戴住活性榮多酚黠c u 2 的絡合作麗可柿潮由c 艫+ 催純靜低密度膳蛋自( l d l ) 酶氧訖嘲。z a g o m p 等1 6 7 l 研究發(fā)現(xiàn)z n 2 熊夠增強e c 的戡氧化活性，認為z n 2 霹以峰e c 形成抗氧化綴環(huán)，協(xié) 同起作用。 另外，盒屬離乎能穆與幾茶素發(fā)生氧化還舔反應，特剮是在強堿條件下，金屬離子能夠鍵遴 j l 茶素f l 搴霆氧純發(fā)生動戴佳反應。m i d o r ik u m a l r t o 等刪遂鵯j l 茶素在堿性袈 孛下，駐夠發(fā)生基 動氧化反應，產(chǎn)生自由基，而銅離予存在時，錒離子催化促進兒茶素的白氧化。s a z a m 等【醴】研究 認為，銅離子可催化e g c g 、囂c 自氯化反應。m a n a b um o c h i z u k i 等f 州利用裁電極對幾茶素的魯 戴純避褥凌力學耩寵，褥舞嗣樣豹綏諗，試鴦鋼離子在，l 茶素鑫戴純避程孛寵當鑲他賚l ，不壤鍵 進了兒榮索的自氧化，還促進了過氧化氫( h 2 0 2 ) 的形成。郭遠華等f 棚發(fā)現(xiàn)在堿性體系中，f e “ 可以加遵幾榮素的自氧化，產(chǎn)生- o h ：其作用機理可熊為：一方面，在有氧的情況下兒茶索可以通 過自氧反應產(chǎn)生超轆陰離子自國基( 0 2 ) 輔過氧億氫i ( h 2 0 2 ) ；舅一方凝，0 茶素矮藤“為“， j l 茶素本身被氧化為羧酸。 8 中鞠農(nóng)業(yè)大學磺士學位論文第章緒論 。3 2 3 茶多酪金囂薅子終臺狻與嗽豹傳忍 h a y a k a w a f 7 1 垮人磺究了不髓金屬離予與茶多酪各組分形殘絡臺物對d n a 裂解的影蠛，發(fā)現(xiàn) c u 2 能夠顯著促進幾榮索誘導的d n a 新裂，a g + q 對e g c g 和e c 誘導的d n a 斷裂表現(xiàn)較攢的抑制 作髑，而其他的多種眾屬離子光明顯影響或活性很低。c u 2 存在時，不同兒榮素單體均可以誘導 d n a 裂解，健作用強瓣不犀，順序依次為e g c e c e g c g c 。1 9 卵年h a y 婦8 w a 研究表明p 磷 幾茶素在銅離子存在刺有氧的條件下，能夠極大的促進d n a 的裂解反應和脂肪酸的過飄化，這大予 鋼離子幫j l 榮素等多懿類純合黲單獨籜粥靜結栗。在y o 麟馥a 彈1 霸壬耋a ￥釀g 孵8 l ”滓靛研究串，訣必 兒榮索類化含物在與銅形成配合物的體系中，c u 2 + 被還原為c u + ，c u + 便會與0 2 和h 2 0 2 反應生成促 使d 凇裂磐的o h i 纛0 2 。 c a t e c h i n + 2c 婦2 + po x i d i dc a t e c h i n + 2c 一 翻+ + 魄翻“+ 顫 o l2 曲+ + 0 2 + 2 h + 啼2 c u 2 + + h 2 0 2 o fc 疆+ + h 2 0 2斗e i 產(chǎn)+ + o h o h 圖1 2 兒茶素與銅離子的氧化反應 1 3 2 4 茶多酚金屬離子絡合物對微生物體系的影響 ( 1 ) ( 2 ) ( 3 ) ( 4 ) n o b u oh o s h i n o 等天融”研究了j k 榮素- 銅( 1 1 ) 絡臺物對犬腸稈菌和金黃色葡萄球薪的生物滔 性，結果表明兒茶素銅( i i ) 絡含物對大腸桿菌( 餅) 豹抑蔭效果要優(yōu)于對金黃色葡萄球菌( g + ) 囂捧藩效果，豆e g c - c u “生物潘往往子其鏈，0 茶潦類純臺物，這與榮多酪綴勢中e g c g 生耪活瞧 最商明顯不間；在進步研究t j l 茶素銅( ) 絡合物的作用機理之后，發(fā)現(xiàn)丈腸桿蔭( g ) 緗 黲巾臀曙秘鑼大量損裁，毽不笈囊玟詛藏鏈襄瑟，繕臺茲撰揍囂鏈垮綞凄朕，其終熙撬理霹轆 為c 一被還原為c u * ，c u * 氧化后生成大量活性氧和活性氧自由熬。而細臌質膜襲腳所攜帶的 電蕊分子決定了與絡食物的結會能力，這可能是影響兒茶鬃娟f i 【) 絡合鈞的抑鎣活性豹重要霸 素。 9 中國農(nóng)業(yè)大舉磺士學位論文 第一耄緒論 曼攔皇罡曼獬量皇量旨魯獬囊曼旨董_ i i i i 攔曼舅舅邕量獸皇刪量鼉皇懋篁量置篁糍皇量置 t 器端黧渤器，8 餾燃：鬻產(chǎn) 豁默黧篡甓激； f l g l 3 t h es c h e m t i c h l m t r t t l o n o f t k e a t t a c k o f c a t e c h i n ( a ) a n d c a t e c h l n c u ( 1 i ) c o m p l e x o n s t a p h y l o c o c c u sa l l r e l l sa n d e s c h e r i c l d a c o i l 此外，郭遠華等的研究發(fā)現(xiàn)臚存在下，j 蛹 素的抑菌效果明照增強，l 茶索在有f e z * 套 導的堿性體系中輿有促氧化作用，會促使體系產(chǎn)生更多羥自由纂( o h ) 。戚向陽嗍、黃河寧等 嬸l 也磅究發(fā)理e g 一g e ( ) 搏隸l 肺癌綱熬生長速率明曩裹- e c , c g 。 3 3 鬟望 近幾年來，隧贛國內， 茶多酚金滿離子絡臺律硒研究的不斷深入，茶多酚與金滿離予的絡合 特性在茶葉的綜合利用方蕊有贛重要的作用，如重金屬毒性的孵除、裊屬的掇取和明收利用、三 廢處理、茶葉有散組分的分離純化及人體韻觜養(yǎng)保健等。盡管化學家對它各方面的研究已經(jīng)進彳亍 了大餐豹工終，毽宅依然是一個十努年輕群又充滿活力豹領域。隨著科學靜進步與柱會懿發(fā)展， 茶多酚金屬離子絡臺物將會在工業(yè)、農(nóng)業(yè)及人們的日常生活中得到更好的應用。 1 0 中國農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文 第一章緒論 1 4 研究目的和意義 銅制劑被用來殺菌已有很長時間的歷史，長期以來，銅類殺菌劑以其廣譜性、易施用，價格低 廉等特點，被廣泛用于果園菜地殺菌，據(jù)統(tǒng)計每年施用量折銅達1 4 8 k g r 卣。長期使用含銅農(nóng)藥 ( 波爾多液) 的果園土壤全銅含量可達5 0 0 c u m g k g , 而正常土壤中的總c u 含量一般為1 5 - 4 0 m g k g a 雖然近年來銅制劑使用量的增長趨勢有所減緩，但在果園及菜地上的殘留已帶來嚴重影響與危 害，國內外關于引起植物銅中毒劑環(huán)境污染的報道也愈來愈多。降低銅用量、促進銅轉化對生態(tài) 環(huán)境保護和農(nóng)產(chǎn)品安全有著重要意義。 茶多酚，是茶葉中最重要的生物活性物質，作為一種廣譜、強效、低毒的抗菌藥物已被世界 許多國家學者所公認，它對自然界中十余種類群的近百種病原菌均有優(yōu)異的抗菌活性，是一種良 好的天然抗菌劑。茶多酚的主要成分是兒茶素，由于具有多個酚羥基的特殊結構且具有較強的酸 堿緩沖能力。使其在與金屬離子相遇時，極易與金屬離子發(fā)生吸附絡合作用或氧化還原反應，形成 穩(wěn)定的絡合物或氧化還原產(chǎn)物。國內外眾多研究表明，茶多酚- c u ( i i ) 配合物具有較強的生物活性。 本論文主要研究茶多酚- c u ( i i ) 配合物的絡合性能及其殺菌性能，對尋找新的銅素殺菌劑、減 少銅素殺菌劑的用量、減少銅污染，保護生態(tài)環(huán)境具有重要意義，同時也為實現(xiàn)茶多酚的綜合利 用提供參考。 1 1 中國農(nóng)業(yè)大學頌士學餓論文 第二章蕞多酚的提取疑其穩(wěn)定性研究 2 。 號l 言 第二章茶多酚的提取及其穩(wěn)定性研究 茶多酚是扶天然植物茶葉巾分離掇取韻多羥基酚類衍生物酶混合物，占茶葉干羹的1 5 - 3 0 0 j 6 。 茶多黔的提取工藝主要毒溶劑漫提、壘屬離子沉淀、樹囂吸附法、超妊界渡體萃取浹、超聲波浸 提法及微波浸提法等。 本實驗獲茶多酪懿特性出笈，尋我簡單、浹速、有效瓣潞數(shù)方法，并磅究了不翔譚值、溫度 及時間對茶多酚穩(wěn)定性的影響，為實現(xiàn)茶多酚的綜倉利用提供參考，同時也為下文研究茶多酚與 銅離予化學體系中的絡合作用擒供參考。 2 2 材料與方法 2 2 1 實驗儀器、原料和試劑 實驗儀器；紫外一可見全分光光度儀f r u 1 9 0 1 ，北京黃析通用有限責任公司) ，旋轉蒸發(fā)儀 ( r e - 5 2 a ，上海亞榮生化儀器廠) ，p h 計( 雷磁，3 c ，上海精密儀器有限公司) ，循環(huán)真空泵( s h z - i i 型，上海亞榮生訖儀器廠) 。 實驗試劑；乙酸乙酯( 北京化工廠，分析純) 、無水硫酸鈉( 北京化學試劑有限公司，分析 縫) 、溪石羧鐸鏈( j 寨往學試潮有限公司，分祈緯) 、硫酸亞鐵( 魏索億學試幫有限公司，分 析純) 、檸檬黢鈉( _ b 京化學試荊有限公司，分析純) 、鹽酸( 北窳化學試劑有限公司，分析純) 、 硼砂( 北京化學試劑有限公司，分析純) 、磷酸二氨鉀( 北京化學試劑有限公司，分析純) 、磷 酸氫= 鈉( 魏京化學試熱毒鼴公司，分析純) 。 原料：安徽黃山毛峰干茶葉。 2 2 2 實駿方法 2 2 2 1 茶多酗提取 有機溶劑萃取i 蠱是傳纜的提取法，過程比較簡單。最常用的溶劑是乙醇、甲醇、丙酮、乙酸 己酯等閑，零試驗采廂乙馥乙酯溶劑進行提取。 稔取茶葉1 0 0 9 予樣箍，女口入5 0 0 m l9 0 - 1 0 0 c 蒸馕拳孛，于憾渥承漆搪孛攫攙，減壓過濾， 先后用乙酸乙酯萃取兩次。合并有機相，用無水n a 2 s 0 4 干燥，減壓蒸餾除去溶劑得黃色粉末狀 萘多酚，實驗漉程翔圖2 - i 所示： 1 2 團罵困堅固坐攀匪圈 l 臣巫口一圈 2 2 2 2 茶多酚含量的測定 引用標準g b t 8 3 1 3 - 2 0 0 2 茶多酚的測定【7 ”。 原理：茶葉中多酚類物質能與亞鐵離子形成紫藍色絡合物。用分光光度計測定其含量。 ( 1 ) 配制酒石酸亞鐵溶液：稱取1 0 9 硫酸亞鐵( f e , s 0 4 ) 和5 0 9 酒石酸鉀鈉 ( c 1 a h 0 6 k l , l a 4 1 1 2 0 ) ，蒸餾水定容至1 l ，低溫保存； ( 2 ) 配制p h7 5 磷酸鹽緩沖液( 1 1 5m o l l 的磷酸氫二鈉溶液8 5 m l 和1 1 5m o l l 磷酸二氫 鉀溶液1 5 m l 均勻混合) ； ( 3 ) 稱取0 5 9 茶多酚，用蒸餾水配制2 5 0 m l o 2 茶多酚溶液； ( 4 ) 取l m l 茶多酚溶液，注入2 5 i i l l 容量瓶，加入蒸餾水4 m l 和酒石酸亞鐵溶液5 m l ，充分 混合，再加p h7 5 磷酸鹽緩沖液至刻度； ( 5 ) 用1 0 i f l m 比色杯，在波長5 4 0 h m 處，以空白溶液作參比。測定吸光度值。 ( 6 ) 計算方法 茶多酚( ) = 1 0 0 0 式中：l 1 試液的總量，m l ； ir - 澳0 定時的用液量m l m 曠_ _ 式樣的質量，g ； a 一式樣的吸光度； l 1 b m o x1 公式( 2 1 ) 1 9 5 7 一用l o n u n 比色杯，當吸光度等于0 5 0 時，每毫升溶液中含茶多酚相當 于1 9 5 7 m g 。 2 2 2 3 茶多酚穩(wěn)定性研究1 7 s - ”1 ( 1 ) 不同p h 溶液茶多酚的穩(wěn)定性 首先配制不同p h 值緩沖溶液，然后分別用各緩沖液配制0 1 的茶多酚溶液5 0 m l ，2 5 。c 放 置3 0 r a i n ，參照g b t 8 3 1 3 2 0 0 2 對茶多酚含量進行測定，計算茶多酚含量的變化率。設置室溫下 0 1 的茶多酚水溶液為對照，重復兩次。 對照一處理