NF-κB, S100B 在新生兒腦損傷中的早期診斷價值.doc

NF-B、S100B在新生兒腦損傷中的早期診斷價值趙建美（南通大學附屬醫(yī)院兒科，江蘇南通226001）摘要目的檢測母妊娠期高血壓疾病兒臍帶組織核轉錄因子kB（NF-kB）、S100B的表達及臍血S100B水平，探討NF-kB、S100B在母妊娠期高血壓疾病兒腦損傷中的早期診斷價值。方法將97例母妊娠期高血壓疾病所生新生兒納入實驗組，并據(jù)其生后第37天或糾正胎齡40周后37天的20項新生兒神經(jīng)行為測定(NBNA)評分分為兩組：35分為腦損傷組，35分為非腦損傷組；同時選取20例健康母親所生正常新生兒作為對照組?；仡櫺苑治銎淠殠ЫM織NF-kB、S100B的表達及臍血S100B水平。免疫組化法檢測臍帶組織NF-kB、S100B表達；酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測臍血S100B蛋白。對照組、非腦損傷組及腦損傷組間臍帶組織NF-kB、S100B和臍血S100B數(shù)值比較采用單因素方差分析；NF-kB、S100B與NBNA間相關性分析用Pearson相關系數(shù)表達。繪制ROC曲線并計算相應的曲線下面積，以評估NF-kB、S100B對母妊娠高血壓疾病兒腦損傷的早期診斷價值。結果1.NF-B在臍帶組織存在表達，腦損傷組與非腦損傷組臍帶組織NF-B表達無顯著性差異（p0.05），但兩組臍帶組織NF-B表達與正常對照組間均有顯著性差異（p0.05）。2.S100B在臍帶組織存在表達，腦損傷組、非腦損傷組及正常對照組間臍帶組織S100B表達無顯著性差異（p0.05）；腦損傷組臍血S100B蛋白水平較非腦損傷組顯著增高，非腦損傷組臍血S100B蛋白水平也較正常對照組間顯著增高（p0.05）。3.母妊娠高血壓疾病兒臍血S100B蛋白水平與NBNA評分呈負相關，相關系數(shù)分別為-0.596(p0.01)。4.臍血S100B蛋白ROC曲線下面積為0.992，以95.04pg/ml作為S100B的最佳截取值時，診斷腦損傷的特異度94%、靈敏度95.7%。結論1.NF-B作為轉錄因子，參與了母妊娠高血壓疾病兒缺氧缺血性腦損傷的發(fā)生、發(fā)展。2.臍血S100B蛋白水平基本不受臍帶組織S100B蛋白表達的影響，臍血S100B蛋白對早期診斷母妊娠高血壓疾病兒缺氧缺血性腦損傷具有特異性價值。關鍵詞：妊娠高血壓疾病；S100B；核轉錄因子kB；腦損傷SignificanceofNuclearFactorkappaB，S100BproteinforearlydiagnosisofbraindamageinneonatesZHAOJianmeiDepartmentofPediatrics,AffiliatedHospitalofNantongUniversity,JiangsuNantong226001AbstractObjectiveToobservethesignificanceofnuclearfactorkappaB基金項目：南通大學附屬醫(yī)院院級課題作者簡介：趙建美(1971-)，女，副教授，副主任醫(yī)師，碩士生導師。E-mail：（NF-kB）,S100BproteininumbilicalcordandS100Bproteinincordbloodforearlydiagnosisofbraindamageinneonateswhosemothershadhypertensivedisorderscomplicatingpregnancy.Methods97neonateswhosemothershadhypertensivedisorderscomplicatingpregnancywereselectedascasegroupandtheywereperformedNeonatalBehavioralNeurologicalAssessment(NBNA)attheageof37daysoffull-termnewbornsorthecorrectedageofpreterminfants.AccordingtoNBNAscores,theyweredividedintobraindamagegroup(NBNAscores35)andnon-braindamagegroup(NBNAscores35).20healthyneonateswereselectedintohealthycontrolgroupatthesametime.ImmunohistochemistrywasusedtomeasuretheexpressionofNF-kBandS100Binumbilicalcordandenzyme-linkedimmunosorbentassay(ELISA)wasusedtodetecttheumbilicalcordbloodlevelsofS100Bprotein.ThecomparisonsoftheexpressionofNF-kB,S100BintheumbilicalcordandtheconcentrationofserumS100Binumbilicalcordbloodamonghealthycontrolgroup,non-braindamagegroupandbraindamagegroupweremadebyOne-WayAnova.ThecorrelationbetweenS100BandNBNAwasexpressedbyPearsoncorrelationcoefficient.ThevalueofumbilicalcordserumS100BproteintoearlydiagnosisofbraindamageinneonateswhosemothershadhypertensivedisorderscomplicatingpregnancywereevaluatedbydrawingROC-curveandcalculatingthecorrespondingareasunderthemrespectively.Results1.NF-kBwasexpressingintheumbilicalcord.TheexpressionofNF-kBinbraindamagegrouphadnosignificantdifferencethanthatinnon-braindamageandtheexpressionofNF-kBinthetwogroupswerebothsignificantlyhigherthanthatinhealthycontrolgroup(p0.05).2.S100Bwaspresentinumbilicalcordbutnosignificantdifferencewasfoundinbraindamagegroup,non-braindamagegroupandhealthycontrolgroup(p0.05).ThecordbloodlevelsofS100Bproteininbraindamagegroupweresignificantlyhigherthanthatinnon-braindamagegroup,andthecordbloodlevelsofS100Bproteininnon-braindamagegroupwerealsohigherthanthatinhealthycontrolgroup(p0.05).3.Incasegroup,theumbilicalcordserumS100BconcentrationwasnegativelycorrelatedwiththevalueofNBNAscoresandthecorrelationcoefficientwas-0.596.4.ThecorrespondingareasunderROC-curveoftheumbilicalcordserumS100Bproteinconcentrationwas98.2%.Takingthecordlevel95.07pg/mlofS100Bproteinastheoptimalcutoffvalue,thesensitivityoftheumbilicalcordserumS100Bproteinwas99.2%todiagnosebraindamageinneonateswhosemothershadhypertensivedisordercomplicatingpregnancyandthespecificityofwhichwas94%.Conclusions1.NF-kBisinvolvedinthemechanismofhypoxic-ischemicbraindamageinneonateswhosemotherhadhypertensivedisorderscomplicatingpregnancy.2.S100BproteinincordbloodcouldnotbeaffectedbytheexpressionofS100Binumbilicalcord,cordbloodlevelsofS100Bproteinhavethevalueofearlyandspecificallydiagnosisofbraindamageinneonateswhosemothershadhypertensivedisorderscomplicatingpregnancy.Keywordshypertensivedisordercomplicatingpregnancy；S100Bprotein；NuclearFactorkappaB；braindamage妊娠期高血壓疾病（hypertensivedisordercomplicatingpregnancy,HDCP）是妊娠期最常見的合并癥，發(fā)病率有逐年上升的趨勢，對胎兒可造成不同程度的危害，尤其是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的損害，可直接影響胎兒的生存及遠期預后。母妊娠期高血壓疾病兒發(fā)生缺氧缺血性腦損傷（hypoxic-ischemicbraindamage,HIBD）的幾率顯著增加,已得到廣泛證實1。目前腦損傷的診斷主要依靠新生兒生后臨床觀察、新生兒神經(jīng)行為測定（neuonatalbehavioralneurologicalassessment,NBNA）、影像學及電生理檢查等，尚缺乏早期診斷的特異性生化指標。核轉錄因子-kappaB(nuclearfactor-kappaB,NF-B)是目前發(fā)現(xiàn)的與炎癥有關的重要轉錄因子之一，動物實驗表明NF-B可能通過促進巨噬細胞炎癥蛋白表達參與大鼠腦缺血再灌注損傷時多核白細胞浸潤過程2。同時，一些實驗證明阻止NF-B的活化能減輕神經(jīng)功能缺損，減少中性粒細胞的滲出以及局灶腦缺血損傷所導致的NF-B的移位。大量研究認為各種體液中S100B蛋白水平，可作為診斷HIBD的特異性生化指標3。但國外有研究發(fā)現(xiàn)S100B的表達不僅限于神經(jīng)系統(tǒng)，胎盤、臍帶組織也有表達4,5,認為血液等體液中S100B蛋白可能受這些組織分泌的影響，從而對S100B作為神經(jīng)特異源性蛋白的腦損傷診斷價值產(chǎn)生了懷疑。本實驗擬測定母妊娠高血壓疾病新生兒臍血及臍帶組織NF-B、S100B的表達，對其生后7天或糾正胎齡40周后7天行新生兒神經(jīng)行為測定（NBNA），再回顧性分析其臍血與臍帶組織NF-B、S100B表達變化與NBNA之間的關系，探討NF-B、S100B在母妊娠高血壓疾病兒缺氧缺血性腦損傷中的作用及其相互關系，為臨床早期診斷、早期干預提供理論基礎。1材料與方法1.1一般資料1.1.1實驗組將2009年9月至2010年9月本院或市婦幼保健醫(yī)院產(chǎn)科母妊娠高血壓疾?。ǜ鶕?jù)樂杰主編的婦產(chǎn)科學妊娠期高血壓疾病診斷標準6,其中母妊娠期高血壓35例、母輕度子癇前期32例、母重度子癇前期30例）所生新生兒97例納入實驗組，其中男57例，女40例；足月兒78例，早產(chǎn)兒19例；胎齡31.2440周，平均孕周(37.431.81)周；體重1.753.9kg，平均(3.230.47)kg；剖宮產(chǎn)60例，自然分娩37例；其母無感染、貧血、糖尿病等其它影響循環(huán)代謝的疾病。所有足月兒生后7天、早產(chǎn)兒糾正胎齡40周后7天采用鮑秀蘭制定的新生兒神經(jīng)行為神經(jīng)(NBNA)20項評分標準7進行評分，NBNA35分為非腦損傷組，NBNA35分為腦損傷組。1.1.2對照組同期隨機收集20例健康母親所生正常新生兒為對照組，其中男12例,女8例；足月兒17例，早產(chǎn)兒3例；胎齡3240周,平均孕周(37.311.91)周；體重1.73.9kg，平均(3.200.44)kg；剖宮產(chǎn)11例,自然分娩9例；其母孕期體健，無妊娠期高血壓疾病、感染、貧血、糖尿病等影響循環(huán)代謝的疾病。所有新生兒生后7天、早產(chǎn)兒糾正胎齡40周后7天也行NBNA，其NBNA評分均37分。1.2實驗方法所有研究對象均在斷臍后取臍靜脈血2ml，并取近胎兒臍帶根部的臍帶組織約1cm，采血時避免溶血。所有血標本裝入不加抗凝劑的試管中，室溫放置，半小時內放入離心機4000r/min離心10min，留取上清液-80C冰箱保存，一年后同批檢測S100B蛋白水平。測定結果前冰凍標本在28C過夜緩融，檢測前將標本恢復到室溫(20C28C)。血清S100B蛋白采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測，操作步驟嚴格按說明書由專人完成。所有臍帶組織放入4多聚甲醛溶液中，固定48h后，依次進行酒精脫水、二甲苯透明、浸蠟包埋。測定結果時取母妊娠期高血壓疾病非腦損組及腦損傷組臍帶各6根及6根正常臍帶作正常對照，進行石蠟切片，厚度4m，石蠟切片脫蠟至水后，分別做NF-B、S100B免疫組化標記，操作步驟嚴格按說明書由專人完成。1.3統(tǒng)計學處理各計量資料均采用Stata11.5統(tǒng)計軟件包對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理，實驗組與對照組一般資料中胎齡與出生體重以均數(shù)標準差(XS)表示，數(shù)值比較及兩兩比較采用單因素方差分析；性別及生產(chǎn)方式比較采用2檢驗。實驗結果以均數(shù)標準差(XS)表示，腦損傷組、非腦損傷組與對照組臍帶組織NF-B、S100B和臍血S100B數(shù)值比較及組間兩兩比較采用單因素方差分析及Dunnetts檢驗；S100B、NBNA間相關性分析用Pearson相關系數(shù)表達；繪制ROC曲線并計算相應的曲線下面積，分析臍血S100B的特異度、靈敏度。2結果2.1實驗組（腦損傷組、非腦損傷組）與對照組間胎齡、出生體重、性別及分娩方式的比較母妊娠高血壓疾病兒腦損傷組、非腦損傷組間胎齡、出生體重、性別比例及分娩方式間均無統(tǒng)計學差異(p0.05)。(表1、2)表1腦損傷組、非腦損傷組與對照組間胎齡、出生體重比較組別例數(shù)胎齡出生體重對照組2037.311.913.230.47非腦損傷組5037.461.863.220.43腦損傷組4737.401.773.170.45F0.0490.186p0.050.05注：三組胎齡、出生體重比較無統(tǒng)計學差異（ANOVA檢驗，p0.05）。表2腦損傷組、非腦損傷組與對照組間性別、生產(chǎn)方式比較組別例數(shù)性別生產(chǎn)方式男女剖宮產(chǎn)自然分娩對照組20128119非腦損傷組5030203020腦損傷組472720301720.080.48p0.050.05注：性別、出生體重在三組間兩兩比較均無統(tǒng)計學差異（卡方檢驗，p0.05）。2.2實驗組（腦損傷組、非腦損傷組）與對照組臍帶NF-kB水平比較臍帶組織NF-kB表達的光密度值在正常對照組為0.4470.005，在母妊娠高血壓疾病兒非腦損傷組為0.4550.007、腦損傷組為0.4600.006。臍帶組織NF-kB表達的強弱在母妊娠高血壓疾病兒腦損傷組、非腦損傷組間無顯著性差異(#p0.05)，非腦損傷組與正常對照組間有顯著性差異(*p0.05)，腦損傷組與正常對照組間也有顯著性差異(p0.05)。（表3，圖1）表3三組臍帶組織NF-kB陽性表達序號光密度值平均光密度值對照組10.44820.44030.4510.4470.00540.44350.45260.447非腦損傷組10.45620.44730.4480.4550.007*40.46750.45560.459腦損傷組10.46020.46930.4500.4600.006#40.45550.46260.461F6.36p0.05注：與對照組比較*p0.05,與非腦損傷組比較#p0.05,與對照組比較p0.05對照組非腦損傷組腦損傷組圖1三組臍帶組織NF-kB的陽性表達免疫組化染色(X400)2.3實驗組（腦損傷組、非腦損傷組）和對照組臍帶組織S100B表達的比較經(jīng)免疫組化染色，臍帶組織S100B表達的光密度值在正常對照