不同劑量五味子多糖灌胃給藥鎮(zhèn)痛作用的觀察.doc

不同劑量五味子多糖灌胃給藥鎮(zhèn)痛作用的觀察【摘要】目的：研究不同劑量五味子多糖灌胃給藥對小鼠酒石酸銻鉀扭體反應(yīng)和大鼠甲醛致痛行為的抑制作用.方法：將50只小鼠隨機(jī)分為生理鹽水組，阿司匹林組（100mg/kg）和五味子多糖20，50和100mg/kg不同濃度組.將50只大鼠隨機(jī)分為生理鹽水組，阿司匹林（100mg/kg）組，五味子多糖20，50和100mg/kg不同濃度組.五味子多糖采取灌胃給藥，連續(xù)給藥7d，于第8日給藥后進(jìn)行痛行為學(xué)檢測.分別給予小鼠腹腔注射0.2，0.5mL/L酒石酸銻鉀后觀察并記錄10min的扭體次數(shù).大鼠左后足底掌側(cè)皮下注射20g/L甲醛50L后，立即放入20cm20cm25cm的樹脂玻璃箱中，記錄大鼠60min內(nèi)每5min出現(xiàn)自發(fā)縮足、舔足的持續(xù)時間.以縮足和舔足時間之和作為傷害性反應(yīng)的行為學(xué)指標(biāo).結(jié)果：五味子多糖灌胃給藥對于小鼠的扭體反應(yīng)具有顯著的抑制作用，且呈一定的劑量依賴性，劑量20，50和100mg/kg下的扭體次數(shù)分別為（27.805.81）次，（24.903.75）次和（15.303.43）次，與對照組（32.907.40）次相比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<；0.05）.50和100mg/kg五味子多糖可顯著降低甲醛第一時相和第二時相的傷害性反應(yīng)表達(dá)，而20mg/kg五味子多糖對甲醛疼痛雙相反應(yīng)無抑制作用.結(jié)論：五味子多糖灌胃給藥對于小鼠扭體試驗和大鼠甲醛試驗兩種不同性質(zhì)的病理性痛都有鎮(zhèn)痛作用.【關(guān)鍵詞】五味子多糖；灌胃；鎮(zhèn)痛0引言在對鎮(zhèn)痛藥物的探索研究中，中藥、天然藥物越來越凸顯其藥效良好、無成癮性、不良反應(yīng)少及資源豐富等優(yōu)勢,已成為現(xiàn)代藥物研究的熱點.五味子又名五梅子、玄及、會及、山花椒等，木蘭科多年生落葉藤本.五味子多糖是從五味子干燥成熟果實中提取的含有五味子總多糖，17種以上氨基酸和16種以上微量元素的混合物1，具有保肝、抗疲勞、抗衰老、增強(qiáng)免疫等藥理作用2-3.以往的研究4-6表明，五味子多糖灌胃給藥具有明顯的鎮(zhèn)靜催眠作用，但有關(guān)其鎮(zhèn)痛作用的研究還少見報道.我們利用小鼠扭體試驗和大鼠甲醛試驗建立兩種不同的病理性痛模型，以觀察不同劑量五味子多糖灌胃給藥是否可產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用.1材料和方法1.1材料昆明種小鼠50只，體質(zhì)量1824g，雌雄兼用；SD大鼠50只，體質(zhì)量180240g，雌雄兼用（第四軍醫(yī)大學(xué)實驗動物中心提供）；五味子多糖（西安新通制藥有限公司）；阿司匹林（南京制藥廠生產(chǎn)，批號920916）；酒石酸銻鉀，甲醛（西安新通制藥有限公司）.1.2方法1.2.1實驗分組將50只小鼠隨機(jī)分為生理鹽水組，阿司匹林組（100mg/kg），五味子多糖20，50和100mg/kg不同濃度組.每組動物10只.50只大鼠也同樣隨機(jī)分為生理鹽水組，阿司匹林組（100mg/kg），五味子多糖20，50和100mg/kg不同濃度組.每組動物10只.五味子多糖和生理鹽水組采取灌胃給藥，連續(xù)給藥7d，在第8日給藥后進(jìn)行痛行為學(xué)檢測.阿司匹林組在第8日五味子多糖和生理鹽水組給藥的同時采取腹腔注射給藥.1.2.2模型制作1.2.2.1小鼠酒石酸銻鉀扭體試驗給予小鼠腹腔注射0.2和0.5mL/L酒石酸銻鉀，給藥后觀察和記錄10min的扭體次數(shù),并計算鎮(zhèn)痛率.小鼠一次扭體的判定標(biāo)準(zhǔn)為：腹部收縮，四肢伸展，軀干拉伸.鎮(zhèn)痛率的計算方法：鎮(zhèn)痛率（%）=（五味子多糖組/阿司匹林組扭體次數(shù)-生理鹽水組扭體次數(shù)）/生理鹽水組扭體次數(shù)100%.1.2.2.2大鼠甲醛試驗在大鼠左后足底掌側(cè)皮下注射20g/L甲醛50L后，立即將大鼠放入20cm20cm25cm的樹脂玻璃箱中，用秒表記錄大鼠60min內(nèi)每5min出現(xiàn)的自發(fā)縮足和舔足的持續(xù)時間.采用Abbott等7的方法將縮足和舔足時間之和作為傷害性反應(yīng)的行為學(xué)指標(biāo).選擇間隔觀察時間為5min是因甲醛試驗的第一時相時間為05min.統(tǒng)計學(xué)處理：數(shù)據(jù)以xs表示，五味子多糖組和阿司匹林組和對照組之間的差異比較用SPSS11.0軟件進(jìn)行LSDt檢驗.P<；0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義.2結(jié)果2.1五味子多糖對小鼠扭體反應(yīng)的影響小鼠酒石酸銻鉀扭體試驗結(jié)果顯示，五味子多糖灌胃給藥對于小鼠的扭體反應(yīng)具有顯著的抑制作用，且呈一定的劑量依賴性.五味子多糖20mg/kg組，50mg/kg組和100mg/kg組的小鼠扭體次數(shù)分別為（27.805.81）次，（24.903.75）次和（15.303.43）次，與生理鹽水對照組（32.907.40）次相比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（20mg/kg組P<；0.05，50mg/kg組和100mg/kg組P<；0.01），其鎮(zhèn)痛率分別為15.5%，24.3%和53.5%.2.2五味子多糖對大鼠痛行為持續(xù)時間的影響在大鼠左后足掌面皮下注射20g/L甲醛50L后，出現(xiàn)典型的雙相傷害性反應(yīng)，即在致痛后立即出現(xiàn)致痛側(cè)的縮足、舔足行為，持續(xù)約5min，相對安靜約510min，再次出現(xiàn)上述傷害性行為表現(xiàn)，持續(xù)約40min（圖1A）.結(jié)果表明，較高劑量的五味子多糖（50mg/kg和100mg/kg）可顯著降低甲醛第一時相和第二時相的傷害性反應(yīng)表達(dá)，而低劑量的五味子多糖（20mg/kg）對甲醛疼痛雙相反應(yīng)無抑制作用（圖1B）.bP<；0.01vs生理鹽水對照組（n=10，xs）.A：60min內(nèi)每5min大鼠的縮足、舔足時間；B：第一時間（05min）和第二時間（1060min）內(nèi)大鼠的縮足、舔足時間.圖1五味子多糖對大鼠甲醛雙相反應(yīng)的抑制作用（略）3討論扭體試驗和甲醛試驗?zāi)軌蚰M不同性質(zhì)的臨床病理性痛，是目前國內(nèi)外公認(rèn)的較為可靠的動物疼痛模型，已普遍應(yīng)用于疼痛機(jī)制研究以及鎮(zhèn)痛藥物評價.本研究采用的痛刺激均為化學(xué)刺激，但所引起的疼痛性質(zhì)是不完全相同：扭體法出現(xiàn)的是內(nèi)臟痛，而甲醛致痛模型出現(xiàn)的是軀體體表痛.研究結(jié)果表明五味子多糖對于酒石酸銻鉀所致的內(nèi)臟痛和甲醛所致傷害性行為反應(yīng)都有顯著抑制作用，可為新型鎮(zhèn)痛藥物的開發(fā)與利用提供參考.至于其鎮(zhèn)痛機(jī)制，目前還少見報道.根據(jù)以往的研究5-6，8報道，五味子具有很強(qiáng)的鎮(zhèn)靜催眠作用并且能夠有效治療環(huán)己酰亞胺誘導(dǎo)的健忘癥，提示五味子能夠參與調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的興奮性.對于五味子多糖的鎮(zhèn)靜催眠作用，Yoshihiro9的研究結(jié)果表明5羥色胺和前列腺素D2(PGD2)，作為內(nèi)源性促睡眠物質(zhì)，可能參與了這個調(diào)節(jié)過程.對于環(huán)己酰亞胺誘導(dǎo)的健忘癥，五味子多糖的治療作用可以為5羥色胺(2)受體拮抗劑所增強(qiáng)；為5羥色胺(1A)受體激動劑、氨基丁酸(A)受體拮抗劑和膽堿能受體拮抗劑所減弱10.因此，我們推測，五味子多糖對于酒石酸銻鉀所致的內(nèi)臟痛和甲醛所致傷害性行為反應(yīng)的鎮(zhèn)痛作用，可能是由于其對于內(nèi)源性神經(jīng)遞質(zhì)及其受體的調(diào)節(jié)作用產(chǎn)生的.然而，揭示其鎮(zhèn)痛作用機(jī)制還需要進(jìn)一步的實驗研究.【參考文獻(xiàn)】1張?zhí)m杰，張維華，趙珊紅.北五味子果實中多糖的提取與純化研究J.鞍山師范學(xué)院學(xué)報,2002,4(1):58-60.2曾靖，叢錚.五味子多糖藥理作用的初步觀察J.贛南醫(yī)學(xué)院學(xué)報,1995,15(1):16-18.3YipAY,LooWT,ChowLW.FructusSchisandrae(Wuweizi)containingcompoundinmodulatinghumanlymphaticsystemaPhaseIminimizationclinicaltrialJ.BiomedPharmacother,2007,61(9):588-590.4李玉娟，梁鑫淼，肖紅斌，等.生、炒酸棗仁鎮(zhèn)靜催眠作用及化學(xué)成分比較J.沈陽藥科大學(xué)學(xué)報,2003,20(1):35-37.5HuangF,XiongY,XuL,etal.SedativeandhypnoticactivitiesoftheethanolfractionfromFructusSchisandraeinmiceandratsJ.JEthnopharmacol,2007,4:110(3):471-475.6霍艷雙，陳曉輝，李康，等.北五味子的鎮(zhèn)靜、催眠作用J.沈陽藥科大學(xué)學(xué)報,2005,2(22):126-128.7AbbottFV,FraklinKB,WestbrookRF.Theformalintest:scoringpropertiesofthefirstandsecondphasesofthepainresponseinratsJ.Pain,1995,60(6):912.8HsiehMT,WuCR,WangWH,etal.TheamelioratingeffectofthewaterlayerofFructusSchisandraeoncycloheximideinducedamnesiainrats:InteractionwithdrugsactingatneurotransmitterreceptorsJ.PharmacolRes，2001,43(1):17-22.9YoshihiroU.Molecularmechanismofsleep