手機上細菌的分離與鑒定.doc

手機上細菌的分離與鑒定單位：燕山大學(xué)建筑與環(huán)境化學(xué)工程系09級生物制藥2班秦皇島市河北大街438號，郵編：066004摘要： 隨著信息技術(shù)的發(fā)展，手機交流已成為人們溝通的主要方式，但手機與我們的皮膚接觸頻繁，如果手機上存在細菌，這就成為一種病原體傳播的途徑，對人們的皮膚等健康問題構(gòu)成不同程度的傷害。為了證明手機上存在有對我們使用者健康有危害的細菌，經(jīng)由細菌提取、培養(yǎng)、觀察、分離、純化、計數(shù)、鑒定（糖發(fā)酵試驗、硫化氫實驗、大分子水解實驗和IMViC實驗）以及保存等一系列步驟，從手機表面分離得到兩種細菌并對其進行了鑒定分析，得出了結(jié)論：手機上確實存在大量的細菌，它們對人類的健康構(gòu)成了一定的危害，所以我們應(yīng)該特別注重平時的衛(wèi)生習(xí)慣，如勤洗手。Abstract：With the development of information technology, mobile communication has become the main way people communicate, but handset frequent skin contact with us, if the phone is there bacteria, which become a kind of pathogen transmission, such as on peoples skin and pose health problems varying degrees of damage. In order to prove the existence of mobile phone users of our health hazards of bacteria by bacterial extraction, training, observation, the separation, purification, counting, appraisal ( sugar fermentation tests ，hydrogen sulphide experiment, macromolecules,and IMViC experiment) and the preservation of and a series of steps, from cell phones and two types of bacteria isolated from the surface was carried out identification , a conclusion: the existence of the phone number of bacteria, they constitute a certain human health hazards, we should pay special attention usual health habits, such as washing hands frequently.關(guān)鍵詞：手機；健康；病原體傳播；細菌提??；鑒定分析Keywords：cellphone；health； bacterial extrac；pathogen transmission； identification and analysis1.引言 現(xiàn)在手機已成為我們生活中不可缺少的一部分，但是人們卻忽略了它們給我們帶來的危害。我們的手機表面有大量的細菌，我們很少去關(guān)注，且很少對其進行一定的清潔工作。手機表面上存在大量的細菌，通過與手的接觸，加上不良好的衛(wèi)生習(xí)慣，很可能導(dǎo)致病從口入。專家還指出，蠕動的致命細菌接觸到面部等部位，可能引致暗瘡、肺炎、腦膜炎，甚至超級病毒金黃色葡萄球菌。我們此次試驗的目的就是通過對手機表面細菌的研究，確定其所含菌的數(shù)量和種屬，確定它們的存在及危害，從而引起人們的關(guān)注。建議人們對手機進行定期的衛(wèi)生工作，如使用手機時可用除菌紙巾定期擦拭，定期消毒，以減少我們受手機感染的機會，勤洗手是最基本的衛(wèi)生習(xí)慣。 2.材料方法2.1.材料：2.1.1 實驗器材：手機2.1.2 實驗儀器：普通光學(xué)顯微鏡、接種環(huán)、酒精燈、培養(yǎng)皿、載玻片、鑷子、燒杯、試管、移液管、德漢氏小管、恒溫培養(yǎng)箱、目鏡測微尺、鏡臺測微尺等2.1.3 培養(yǎng)基種類牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（牛肉膏，蛋白胨，氯化鈉，瓊脂，蒸餾水）油脂培養(yǎng)基（蛋白胨，牛肉膏，氯化鈉，香油，1.6%中性紅水溶液，瓊脂，蒸餾水）淀粉培養(yǎng)基（蛋白胨，氯化鈉，牛肉膏，可溶性淀粉，蒸餾水，瓊脂）蛋白胨水培養(yǎng)基（蛋白胨，氯化鈉，蒸餾水）明膠培養(yǎng)基（牛肉膏蛋白胨液，明膠）糖發(fā)酵培養(yǎng)基（蛋白胨水培養(yǎng)基，1.6%溴甲酚紫乙醇溶液，20%糖溶液（葡萄糖，乳糖，蔗糖）檸檬酸鹽培養(yǎng)基（磷酸二氫銨，磷酸氫二鉀，氯化鈉，硫酸鎂，檸檬酸鈉，瓊脂，蒸餾水，1%溴香草酚藍乙醇液）醋酸鉛培養(yǎng)基（牛肉膏蛋白胨瓊脂，硫代硫酸鈉，10%醋酸鉛水溶液）石蕊牛奶培養(yǎng)基（牛奶粉，石蕊，水）尿素瓊脂培養(yǎng)基（尿素，瓊脂，氯化鈉，磷酸二氫鉀，蛋白胨，酚紅，蒸餾水）2.2.方法2.2.1.細菌的提取分離 （1）細菌的提取：用蘸有生理鹽水的消毒棉簽在手機表面一平方厘米的范圍內(nèi)涂抹，然后將該棉簽浸入到盛有一毫升生理鹽水的試管中，配成原倍數(shù)的菌懸液，然后再配成稀釋十倍的菌懸液。（2）細菌的培養(yǎng)：用滅菌后的移液管移取菌懸液，將1-2滴滴入培養(yǎng)皿中，用涂布棒將菌分布均勻，每種菌分別做兩個平板，放在37恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。（3）細菌的計數(shù)：取出培養(yǎng)好的平板，觀察菌落的多少，記下菌落數(shù)的多少（4）細菌的純化：挑取菌落上的細菌，用三段劃線法對其進行純化。放入37培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，直至所得菌落為單個菌落。2.2.2. 細菌的觀察 （1）細菌的形態(tài)大小觀察：無菌操作取菌，制成菌懸液。滴一滴到載玻片上，蓋上蓋玻片，在顯微鏡下觀察其形態(tài)。校正目鏡測微尺計算出在不同放大倍數(shù)下，目鏡測微尺每格所代表的長度，然后觀察細菌的大小。 （2）革蘭氏染色：制片初染（結(jié)晶紫染色12min,傾去染液）媒染（碘液覆蓋1min,傾去碘液）脫色（95%乙醇脫色2030s）復(fù)染（復(fù)紅染色2min,水洗）鏡檢2.2.3.糖發(fā)酵試驗：（1）用記號筆在各試管外壁上分別標明發(fā)酵培養(yǎng)基的名稱和所接種的細菌菌名。（2）取葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管3支，分別接入兩種菌，第三只不接種，作為對照。另取乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管3支，同樣接入兩種菌，第三只不接種，作為對照。蔗糖發(fā)酵同上。（3）將接過種和作為對照的6支試管均置37中培養(yǎng)24-48h。（4）觀察各試管顏色變化及德漢式小管中有無氣泡。2.2.4.大分子水解實驗： 淀粉水解實驗（1）將固體淀粉培養(yǎng)基溶化后冷卻至50左右，無菌操作制成平板。（2）用記號筆在平板底部劃成2部分。（3）將兩種菌分別在不同的部分劃線接種，在平板的反面分別寫上兩種菌的標號。（4）將平板倒置在37溫箱中培養(yǎng)24h。（5）取出平板，觀察菌苔顏色。 石蕊牛奶實驗：（1）取兩只石蕊牛奶培養(yǎng)基試管，用記號筆標明各管欲接種的菌名。（2）分別接種兩種菌。（3）將接種后的試管置35中培養(yǎng)24-48h。（4）觀察培養(yǎng)基顏色變化。 .明膠水解實驗：（1）取兩只明膠培養(yǎng)基試管，用記號筆標明各試管欲接種的菌名。（2）用接種針分別穿刺接種兩種菌。（3）將接種后的試管置20中培養(yǎng)2-5d。（4）觀察明膠液化情況。 油脂水解實驗：（1）將熔化的固體油脂培養(yǎng)基冷卻至50左右時，充分搖蕩，使油脂均勻分布，無菌操作倒入平板，待凝。（2）用記號筆在平板底部劃成兩部分，分別在兩部分標上軍的標號。（3）用無菌操作將兩種菌分別劃十字線接種于平板的相應(yīng)部分的中心。（4）將平板倒置，37溫箱中培養(yǎng)24h。（5）取出平板，觀察菌苔顏色。 尿素試驗：（1）取兩只尿素培養(yǎng)基斜面試管，用記號筆標明各管欲接種的菌名。（2）分別接種兩種菌。（3）將接種后的試管置35中培養(yǎng)24-48h。（4）觀察培養(yǎng)基顏色變化。2.2.5.IMViC實驗 吲哚試驗：將兩種菌分別接入2支蛋白胨水培養(yǎng)基中，置37培養(yǎng)48h。于培養(yǎng)48h后的蛋白胨水培養(yǎng)基內(nèi)加入3-4滴乙醚，搖動數(shù)次，靜置1min，待乙醚上升后，沿試管壁徐徐加入2滴吲哚試劑。在乙醚和培養(yǎng)物之間產(chǎn)生紅色環(huán)狀物為陽性反應(yīng)。 甲基紅實驗：將兩種菌分別接入2支葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中，置37培養(yǎng)48h。培養(yǎng)48h后，將1支葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基培養(yǎng)物內(nèi)加入甲基紅試劑2滴，培養(yǎng)基變?yōu)榧t色者為陽性，變?yōu)辄S色者為陰性。 伏-普實驗：將甲基紅實驗中的另一支葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)物內(nèi)加入5-10滴40%KOH，然后加入等量的5%-萘酚溶液，用力震蕩，再放入37溫箱中保溫15-30min.，以加快反應(yīng)速度，若培養(yǎng)物呈紅色者，為伏-普反應(yīng)陽性。 檸檬酸鹽實驗：將兩種菌分別接入2支檸檬酸鹽斜面培養(yǎng)基中，置37培養(yǎng)48h。培養(yǎng)48h后觀察檸檬酸鹽斜面培養(yǎng)基上有無細菌生長和是否變色，藍色為陽性，綠色為陰性。 2.2.6.硫化氫實驗：用接種針將兩種菌分別穿刺接入2支醋酸鉛培養(yǎng)基中，置37培養(yǎng)基48h。觀察黑色硫酸鉛是否產(chǎn)生。3.結(jié)果3.1.通過對細菌的分離純化及培養(yǎng)，我們得到兩種菌的菌落。稀釋十倍的菌懸液通過平板計數(shù)法記錄菌落數(shù)為42個。又對其進行細菌的大小、形態(tài)觀察及革蘭氏染色，觀察結(jié)參表一表一 細菌的觀察結(jié)果菌名形態(tài)大小顏色革蘭氏染色號邊緣整齊，濕潤，表面光滑，圓形0.8m淡黃色紅色號邊緣整齊，濕潤，表面光滑，金黃色0.6m金黃色藍紫色稀釋十倍的菌懸液培養(yǎng)后所得菌落如圖一，簡單染色如圖二 圖一：稀釋十倍的菌懸液菌落 圖二：簡單染色3.2 糖酵解實驗絕大多數(shù)細菌能利用糖類作為碳源，但是它們在分解糖類物質(zhì)的能力上有很大差異，有些細菌能分解某種糖產(chǎn)生有機酸和氣體，有些細菌只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。發(fā)酵培養(yǎng)基含有蛋白胨、指示劑、倒置的德漢氏小管和不同的糖類。當發(fā)酵產(chǎn)酸時，溴甲酚紫指示劑可有紫色變?yōu)辄S色。氣體的產(chǎn)生可由倒置的德漢氏小管中有無氣泡來證明。結(jié)果如下表二表二 糖酵解實驗結(jié)果糖類發(fā)酵號號對照葡萄糖發(fā)酵產(chǎn)酸產(chǎn)氣產(chǎn)酸不產(chǎn)氣不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣蔗糖發(fā)酵產(chǎn)酸產(chǎn)氣產(chǎn)酸不產(chǎn)氣不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣乳糖發(fā)酵產(chǎn)酸產(chǎn)氣產(chǎn)酸不產(chǎn)氣不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣3.3 大分子水解實驗微生物對大分子物質(zhì)如淀粉、蛋白質(zhì)和脂肪不能直接利用，必須依靠產(chǎn)生的胞外酶將大分子物質(zhì)分解后，才能吸收利用。 淀粉水解實驗：淀粉酶水解淀粉為小分子糊精、雙糖和單糖，淀粉遇碘會產(chǎn)生藍色，但細菌水解淀粉的區(qū)域，用碘測定時不再產(chǎn)生藍色，表明細菌產(chǎn)生淀粉酶。號菌周圍無現(xiàn)象，號菌周圍有透明光圈。現(xiàn)象如圖三圖三：淀粉水解實驗現(xiàn)象 油脂水解實驗：脂肪酶水解脂肪為甘油和脂肪酸，脂肪水解后產(chǎn)生脂肪酸，可以改變培養(yǎng)基的pH值，使pH降低，加入培養(yǎng)基的中性紅指示劑會使培養(yǎng)基從淡紅色轉(zhuǎn)變?yōu)樯罴t色，說明細胞外存在脂肪酶。現(xiàn)象：號菌苔周圍出現(xiàn)紅色斑點，為陽性；號菌苔周圍也出現(xiàn)紅色斑點，為陽性。 明膠水解實驗：明膠是由膠原蛋白水解產(chǎn)生的蛋白質(zhì)，在25以下可維持凝膠狀態(tài)，以固體形式存在，而在25以上明膠會液化。有些微生物可產(chǎn)生一種稱作明膠酶的胞外酶，水解這種蛋白質(zhì)，而使明膠液化，甚至在4仍能保持液化狀態(tài)。現(xiàn)象：兩種菌都使明膠液化，均為陽性。 石蕊牛奶實驗：有些微生物能水解牛奶中的蛋白質(zhì)酪素，酪素的水解可用石蕊牛奶來檢測。石蕊牛奶培養(yǎng)基由脫脂牛奶和石蕊配制而成，是渾濁的藍色，酪素水解成氨基酸和肽后，培養(yǎng)基會變得透明。兩培養(yǎng)基都為白色，均為陽性。 尿素實驗：尿素是有大多數(shù)哺乳動物消化蛋白質(zhì)后分泌在尿液中的廢物。尿素酶能分解尿素釋放出氨。尿素瓊脂含有尿素、葡萄糖和酚紅，酚紅在pH6.8時為黃色，而在培養(yǎng)過程中，產(chǎn)生尿素酶的細菌將分解尿素產(chǎn)生氨，使培養(yǎng)基的pH升高，在pH升至8.4時，指示劑就轉(zhuǎn)變?yōu)樯罘奂t色。號菌培養(yǎng)基由黃色變?yōu)榧t色，為陽性；號菌沒變，為陰性。表三 大分子水解實驗結(jié)果細菌淀粉水解實驗油脂水解實驗明膠水解實驗石蕊牛奶實驗?zāi)蛩貙嶒炋栮幮躁栃躁栃躁栃躁栃蕴栮栃躁幮躁栃躁栃躁幮?.4 IMViC和硫化氫實驗 吲哚實驗：有些細菌產(chǎn)生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸，產(chǎn)生吲哚和丙酮酸。吲哚與對二甲基氨基苯甲醛結(jié)合，形成紅色的玫瑰吲哚?，F(xiàn)象：號菌培養(yǎng)基與乙醚之間有紅色，為陽性；號菌培養(yǎng)基與乙醚之間無紅色，為陰性。 甲基紅實驗：細菌代謝糖產(chǎn)生酸時，培養(yǎng)基就會變酸，使加入培養(yǎng)基中的甲基紅指示劑由橙黃色轉(zhuǎn)變成紅色?，F(xiàn)象：兩種菌的培養(yǎng)基均由橙黃色變?yōu)辄S色，為陽性。 伏普實驗：某些菌可以利用葡萄糖產(chǎn)生非酸性或中性末端產(chǎn)物，如丙酮酸。丙酮酸進行縮合、脫羧生成乙酰甲基乙醇，此化合物能在堿性條件下能被空氣中的氧氣氧化成二乙酰。二乙酰與蛋白胨中精氨酸的胍基作用，生成紅色化合物?，F(xiàn)象：號菌無變化，為陰性；號菌變?yōu)榧t色，為陰性。 檸檬酸鹽實驗：有些細菌利用檸檬酸鹽作為碳源，有些則不能。細菌在分解檸檬酸鹽及培養(yǎng)基中的磷酸銨后，產(chǎn)生堿性化合物，使培養(yǎng)基的pH升高，當加入1%溴麝香草酚藍指示劑時，培養(yǎng)基就會由綠色轉(zhuǎn)變?yōu)樯钏{色。現(xiàn)象：兩種菌的培養(yǎng)基均由綠色轉(zhuǎn)變?yōu)樯钏{色，為陽性。 硫化氫實驗：有些細菌能分解含硫的有機物如胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸等產(chǎn)生硫化氫，硫化氫一遇培養(yǎng)基中的鉛鹽或鐵鹽等，就形成黑色的硫化鉛或硫化亞鐵沉淀物?，F(xiàn)象：號菌無明顯變化，為陰性；號菌有黑色沉淀，為陽性。表四 IMViC實驗和硫化氫實驗細菌IMViC實驗硫化氫實驗吲哚實驗甲基紅實驗伏普實驗檸檬酸鹽實驗號陽性陽性陰性陽性陰性號陰性陽性陽性陽性陽性4.結(jié)論 由以上實驗可知，手機上含有的菌至少包括大腸桿菌和金黃色葡萄球菌，并且含菌量為：42個菌落每平方厘米。由于所做的實驗有限，手機上可能含有的其它菌類未能全部驗證出來，但至少證明了手機上含有對人類有害的細菌，且菌量非常大