sjq6維生素C的測(cè)定.ppt

實(shí)驗(yàn)六、抗壞血酸含量的測(cè)定,維生素C(vitamin C)屬于水溶性維生素，是人體營(yíng)養(yǎng)必需的一種維生素，其生理作用廣泛。它不僅作為重要的醫(yī)藥產(chǎn)品用于治療多種疾病，也廣泛用于食品、飼料及化妝品中。,維生素c又稱L-抗壞血酸（L-ascorbic acid),在化學(xué)結(jié)構(gòu)上和糖類十分相似，有4種光學(xué)異構(gòu)體，其中以L-構(gòu)型右旋體的生物活性最強(qiáng)。中國(guó)、美國(guó)、英國(guó)、日本藥典收載都是L-抗壞血酸。中國(guó)藥典收載有維生素C原料及其片劑、泡騰片、顆粒劑和注射液。 白色針狀結(jié)晶 有酸味, 可溶于水,維生素C分子結(jié)構(gòu)中有二烯醇結(jié)構(gòu)，具有內(nèi)酯環(huán)，且有2個(gè)手性碳原子（C4、C5), 這不僅使維生素C性質(zhì)極為活潑，而且具旋光性，L ( + )-抗壞血酸的比旋光度為+20. 5+21.5 ,維生素C在水中易溶，水溶液呈酸性；在乙醇中略溶，在氯仿或乙醚中不溶。維生素C 分子結(jié)構(gòu)中的二烯醇基，尤其是碳3位的OH由于受共軛效應(yīng)的影響，酸性較強(qiáng)（pK1 =4. 17)；碳2位的OH的酸性極弱（Pk2 = ll. 57)，故維生素C 一般表現(xiàn)為一元酸，可與碳酸氫鈉作用生成鈉鹽。維生素C分子中的二烯醇基具極強(qiáng)的還原性，易被氧化為二酮基而成為去氫抗壞血酸，加氫又可還原為抗壞血酸。在堿性溶液或強(qiáng)酸性溶液中能進(jìn)一步水解為二酮古洛糖酸而失去活性，此反應(yīng)為不可逆反應(yīng)。,維生素C的含量測(cè)定多基于其具有較強(qiáng)的還原性，可被不同氧化劑定量氧化，容量法 (如碘量法、2，6-氯靛酚法等）因簡(jiǎn)便快速、結(jié)果準(zhǔn)確，被各國(guó)藥典所采用，為適用于復(fù)方制劑和體液中的微量維生素C的測(cè)定，又相繼發(fā)展了比色法、紫外分光光度法和高效液相色譜法等。,維生素C的含量測(cè)定多基于其具有較強(qiáng)的還原性，可被不同氧化劑定量氧化，容量法(如碘量法、2，6-氯靛酚法等）因簡(jiǎn)便快速、結(jié)果準(zhǔn)確，被各國(guó)藥典所采用，為適用于復(fù)方制劑和體液中的微量維生素C的測(cè)定，又相繼發(fā)展了比色法、紫外分光光度法和高效液相色譜法等。,碘量法測(cè)定維生素C的含量,1、原理,維生素C在乙酸的酸性條件下，可被碘定量氧化。根據(jù)消耗碘標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積，即可計(jì)算維生素C的含量。反應(yīng)式如下:,2、儀器和試劑,(1)儀器 電子天平（0. lmg)。 (2)試劑 c（I2）=0.1000moL/L 碘標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液配制與標(biāo)定參見9. 2節(jié)。 1%淀粉指示劑 配制方法參見9.2節(jié)。 c(CH3COOH)=lmol/L乙酸溶液 取6mL冰醋酸，用水稀釋定容至l00mL。,3、測(cè)定方法,稱取試樣0. 2g (稱準(zhǔn)至0.0001g)于500mL三角瓶中，加新煮沸過(guò)的冷水100mL與lmol/L乙酸溶液10mL使之溶解，加淀粉指示劑l.0mL，立即用碘標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定，至溶液顯藍(lán)色并在30s內(nèi)不褪色。記錄消耗c（I2）=0.1000mol/L的碘標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積。,4、計(jì)算,1.00mL c（1/2 I2）=0. 1000mol/L碘標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液相當(dāng)于8. 806mg的維生素,C(C6H806)。,2，6-氯靛酚滴定法測(cè)定維生素C的含量,1、原理,2，6-二氯靛酚（2，6-氯吲哚酚）為一染料，其氧化型在酸性溶液中顯紅色，在堿性溶 液中為藍(lán)色。當(dāng)與維生素C反應(yīng)后，即轉(zhuǎn)變?yōu)闊o(wú)色的酚亞胺（還原型）。因此，維生素C可在酸性溶液中用2，6-二氯靛酚標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，至溶液顯玫瑰紅色時(shí)，即為終點(diǎn)，無(wú)須另加指示劑。反應(yīng)式如下,2、試劑,1%草酸溶液 稱取10g草酸，加水溶解后，定容至1000mL。 c(1/6KI03)=0.001mol/L 碘酸鉀標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 準(zhǔn)確稱取0.3567g基準(zhǔn)碘酸鉀溶于水，移人100mL容量瓶中，用水定容至刻度；從中取出1.00mL于100mL容量瓶中，用水稀釋刻度。,維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液 準(zhǔn)確稱取0.02g維生素C(稱準(zhǔn)至0.0001g)溶于1%草酸溶液中，并用1 %草酸溶液稀釋定容至100mL。從中吸取5.00mL于50mL容量瓶中，加入1% 草酸溶液至刻度，此溶液每毫升含有0.02mg維生素C。,a.標(biāo)定 吸取維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液5.00mL于100mL三角瓶中，加6%KI溶液0.5mL, 加1%淀粉3滴，用0.00lmol/L碘酸鉀標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定到淺藍(lán)色。 b.計(jì)算 抗壞血酸濃度(mg/mL)=V10.088/V2 式中 V1滴定時(shí)消耗0.001mol碘酸鉀標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積,mL; V2滴定時(shí)吸取維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mL; 0. 088與1.00mL碘酸鉀標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液C(1/6KI03)=0.001mol/L相當(dāng)?shù)木S生素C 的質(zhì)量，g., 0.02% 2，6-二氯靛酚溶液 準(zhǔn)確稱取2，6-二氯靛酚溶液0.05g (標(biāo)準(zhǔn)至0.0002g)，溶于200mL含有0.052g碳酸氫鈉的熱水中。冷卻后，稀釋定容至250mL。過(guò)濾，濾液接收于棕色瓶中，置于冰箱內(nèi)保存，使用時(shí)每周標(biāo)定一次s,a. 標(biāo)定：吸取5.00mL已知濃度的維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液，加5.00mL 1 %草酸溶液，用 2,6-二氯靛酚溶液滴定至溶液呈粉紅色，15s不褪色為終點(diǎn)。,b.計(jì)算 T=CV1/V2 式中：T滴定度（即每毫升2，6-二氯靛酚溶液相當(dāng)于維生素C的質(zhì)量）mg/mL； c維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液的實(shí)際濃度，mg/mL; V1維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mL； V2滴定消耗2,6-二氯靛酚溶液的體積，mL。 1%淀粉指示劑。 1%KI溶液 稱取6gKI，溶于l00mL水中。 偏磷酸-乙酸溶液 稱取15g偏磷酸，加入40mL冰醋酸及250mL水，加熱攪拌，使其溶解，冷卻后加水至500mL，于4冰箱保存（710天)。,3、測(cè)定方法（維生素C注射液）,精密量取試樣適量（約相當(dāng)于維生素C 50mg,如有必要，先用水稀釋）置lOOmL容量瓶中，加偏磷酸-乙酸溶液20mL，用水稀釋至刻度，搖勻；精密吸取稀釋液適量（約相當(dāng)于維生素C 2mg)置50mL錐形瓶中，加偏磷酸-乙酸溶液5mL，用0. 02% 2，6-二氯靛酚溶液滴定，至溶液顯玫瑰紅色并持續(xù)5s不褪色。另取偏磷酸-乙酸溶液5.5mL，加水15mL，用 0.02% 2，6-二氯靛酚溶液滴定，做空白試驗(yàn)校正。,4、計(jì)算,維生素 C 含量（mg/100g）=（V1-V0） T m 100 式中 V1滴定試樣時(shí)消耗的0.02% 2，6-二氯靛酚溶液的體積，mL； V0空白試驗(yàn)時(shí)消耗的0.03% 2，6-二氯靛酚溶液的體積，mL； m滴定時(shí)所取樣液中含有樣品的質(zhì)量，g,5、討論,本法并非維生素C的專一反應(yīng)，其他還原性物質(zhì)對(duì)測(cè)定也有干擾。但由于維生素C 的氧化速度遠(yuǎn)比干擾物質(zhì)的快，故快速滴定可減少干擾物質(zhì)的影響。 可用2，6-二氯靛酚進(jìn)行剩余比色測(cè)定，即在加入維生素C后，在很短的時(shí)間間隔內(nèi)， 測(cè)定剩