微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)-水中大腸菌群的簡易檢測.ppt

水中細(xì)菌總數(shù)的測定及 大腸菌群的簡易檢測,實(shí)驗(yàn)八,了解水質(zhì)狀況與細(xì)菌數(shù)量的聯(lián)系。 了解水中細(xì)菌總數(shù)的測定依據(jù)及應(yīng)用，掌握水中細(xì)菌總數(shù)測定的方法及操作。 了解飲水健康與水中大腸菌群的聯(lián)系，掌握水中大腸菌群簡易檢測的方法及操作。,實(shí)驗(yàn)?zāi)康?實(shí)驗(yàn)原理,水中細(xì)菌總數(shù)可以說明水被有機(jī)物污染的程度，細(xì)菌數(shù)越多，有機(jī)物質(zhì)含量越大。水中細(xì)菌種類繁多，生長條件各異。在一種培養(yǎng)條件下滿足所有細(xì)菌生長是不可能的。通常采用牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，測得水中細(xì)菌總數(shù)的近似值。 水中病原菌（如沙門氏菌、志賀氏菌等）多數(shù)源于病人和病畜的糞便，病原菌數(shù)量少且檢測過程復(fù)雜。大腸菌群作為腸道內(nèi)的正常菌，在糞便中數(shù)量大，且體外的存活時間與腸道致病菌相近，因此，一般采用測定大腸菌群數(shù)量來判斷水源是否被糞便污染，并推測是否受腸道病原菌污染的可能。,實(shí)驗(yàn)原理,大腸菌群并非細(xì)菌學(xué)分類命名，不代表某一種或某一屬細(xì)菌。是衛(wèi)生細(xì)菌檢測領(lǐng)域用語，指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關(guān)的細(xì)菌。 大腸菌群是一群好氧和兼性厭氧、無芽孢的革蘭氏陰性桿菌，在乳糖培養(yǎng)基中經(jīng)37培養(yǎng)2448h，能產(chǎn)酸產(chǎn)氣。主要包括埃希氏菌屬、腸桿菌屬、克雷伯氏菌屬和檸檬酸桿菌屬，這類菌是溫血動物腸道內(nèi)的正常菌群，隨糞便污染水源。 測定大腸菌群的方法有多管發(fā)酵法、濾膜法和各種簡便檢測盒。國家標(biāo)準(zhǔn)中采用的多管發(fā)酵法分為三步：初發(fā)酵試驗(yàn)、平板分離培養(yǎng)和復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)。,實(shí)驗(yàn)原理,實(shí)驗(yàn)原理,伊紅美蘭瓊脂平板含有伊紅與美蘭染料，大腸菌群發(fā)酵乳糖造成酸性環(huán)境是，該兩種種染料即可結(jié)合成復(fù)合物，使大腸菌群產(chǎn)生帶核心的、有金屬光澤的深紫色菌落。 濾膜法是將水樣通過一定孔徑的濾膜，然后將濾膜放在適宜的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)計(jì)數(shù)。,實(shí)驗(yàn)原理,實(shí)驗(yàn)原理,我國1985年起實(shí)施的飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)（GB5749-85)規(guī)定：1毫升自來水中的細(xì)菌總數(shù)不得超過100個，每升自來水中腸道菌群不得超過3個。,實(shí)驗(yàn)內(nèi)容,一、自來水中細(xì)菌總數(shù)的測定 1、采水樣：開放水龍頭使水流5min，以無菌三角瓶接取水樣，迅速測定。 2、用無菌吸管分別吸取1ml水樣與兩個無菌平皿中，分別倒入融化并冷卻至45左右的牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，立即旋轉(zhuǎn)混勻。 3、另取一無菌培養(yǎng)皿，傾注牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，作為空白對照。 4、凝固后倒置于37培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后計(jì)數(shù)，取兩皿平均數(shù)作為1ml水樣中的細(xì)菌總數(shù)。,實(shí)驗(yàn)內(nèi)容,注意事項(xiàng)： 自來水取樣時避免取樣中造成污染。 自來水中含有余氯，可能對細(xì)菌有殺滅和抑制作用，會造成結(jié)果偏低或假陰性，可以加入少量硫代硫酸鈉，與氯發(fā)生反應(yīng)。 操作過程要迅速，避免雜菌污染。 傾注培養(yǎng)基時溫度應(yīng)冷卻至45，避免燙死細(xì)菌。,實(shí)驗(yàn)內(nèi)容,二、池水中大腸菌群的簡易檢測 1、采取水樣：取學(xué)?！拌b湖”水面1015cm，離岸邊5cm的水樣，立即測試。 2、稀釋水樣：取3支無菌試管，分別加9ml無菌水，加1ml水樣到第一管內(nèi)搖勻，再自第一管中取1ml至第二管中，如此稀釋到第4管。 3、吸取第三、第四管稀釋液各1ml至無菌平皿中，每一個稀釋度重復(fù)兩皿。 4、各傾注已經(jīng)融化并冷卻至45 左右的伊紅美蘭瓊脂培養(yǎng)基，立即搖勻。 5、凝固后倒置于37 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后計(jì)數(shù)。,實(shí)驗(yàn)要求,1、本次實(shí)驗(yàn)四人一組。通過實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析實(shí)驗(yàn)室自來水樣是否符合標(biāo)準(zhǔn)。 2、每組完成后清洗10個培養(yǎng)皿，包1包培養(yǎng)皿、1包（5支1ml）移液管、1包試管（5支）。 3、每組衛(wèi)生區(qū)域打掃干凈后才能離開。 4、值日生配制牛肉膏蛋白胨瓊