NY227-1994_微生物肥料.pdf

中華 人 民共 和 國(guó) 農(nóng)業(yè) 行 業(yè) 標(biāo) 準(zhǔn)N Y 2 2 7 一 9 4微生物肥料主題內(nèi)容與適用范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了微生物肥料產(chǎn)品的分類、 技術(shù)要求、 試驗(yàn)方法、 檢驗(yàn)規(guī)則、 包裝、 標(biāo)志、 運(yùn)輸與貯存本標(biāo)準(zhǔn)適用于有益微生物制成的， 能改善作物營(yíng)養(yǎng)條件( 又有刺激作用) 的活體微生物肥料制品。弓 I 用標(biāo)準(zhǔn)G B 8 1 7 2 蛔蟲(chóng)卵測(cè)定方法G B 4 7 8 9 大腸菌值測(cè)定方法G B 7 4 6 8 總汞測(cè)定方法G B 7 4 7 1 總錫測(cè)定方法G B 7 4 6 6 總鉻測(cè)定方法G B 7 4 8 5 總砷測(cè)定方法G B 7 4 7 。 總鉛測(cè)定方法3 產(chǎn)品分類3 . 1 根瘤菌肥料: 能在豆科植物上形成根瘤( 或莖瘤) ， 同化空氣中的氮?dú)猓?供應(yīng)豆科植物的氮素營(yíng)養(yǎng)。用根瘤菌屬( R h i z o b i u m) 或慢生根瘤菌屬( B r a d y r h i z o b i u m ) 的菌株制造。3 . 2 固 氮菌肥料: 在土壤和很多作物根際中同 化空氣中的氮?dú)猓?供應(yīng)作物氮素營(yíng)養(yǎng); 又能分泌激素刺激作物生長(zhǎng)。用下列菌種之一制造。 固氮菌屬( A z o t o b a c t e r ) 氮單胞菌屬( A z o m o n a s ) 固氮根瘤菌屬( A z o r h i r o b i u m) 根際聯(lián)合固氮菌: 固 氮螺菌屬( A z o s p i r i l l u m ) 陰溝腸桿菌( E n t e r o b a c t e r c l o a c e a ) 經(jīng)鑒定為非致病菌 糞產(chǎn)堿菌( A l c a l i g e n e s f a e c a l i s ) 經(jīng)鑒定為非致病菌 肺炎克氏桿菌( K l e b s i e l l a p n e u m o n i a e ) 經(jīng)鑒定為非致病菌 其他經(jīng)過(guò)鑒定的用于固氮菌肥料生產(chǎn)的菌種。 這些菌主要特征是在含一種有機(jī)碳源的無(wú)氮培養(yǎng)基中能固定分子態(tài)氮。3 . 3 磷細(xì)菌肥料: 能把土壤中難溶性磷， 轉(zhuǎn)化為作物可以利用的有效磷， 改善作物磷素營(yíng)養(yǎng)。用下列菌種之一制造。 分解有機(jī)磷化合物的細(xì)菌: 解磷巨 大芽胞桿菌( B a c i l l u s m e g a t h e r i u m p h o s p h a t i c u m ) 解磷珊瑚紅賽氏 桿菌( S e r r a t i a c a r o l l e r a p h o s p h a t i c u m ) 節(jié)桿菌屬中的一些種( A r t h r o b a c t e r s p . ) 轉(zhuǎn)化無(wú)機(jī)磷化合物的細(xì)菌:中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部1 9 9 4 一 0 5 一 1 3 批準(zhǔn)1 9 9 4 一 0 5 一 3 0 實(shí)施N Y 2 2 7 一 9 4 假 單 胞 菌 屬中 的 一 些 種( P s e u d o m o n a s s p . ) 其他經(jīng)過(guò)鑒定的用于磷細(xì)菌肥料生產(chǎn)的菌種。 有機(jī)磷細(xì)菌在含磷礦粉或卵磷脂的合成培養(yǎng)基上有一定解磷作用， 在麥熬發(fā)酵液中都含刺激植物生長(zhǎng)的生長(zhǎng)素物質(zhì) 無(wú)機(jī)磷細(xì)菌具有溶解難溶性磷酸鹽的作用。I 4 硅酸鹽細(xì)菌肥料: 能對(duì)土壤中云母， 長(zhǎng)石等含鉀的鋁硅酸鹽及磷灰石進(jìn)行分解， 釋放出 鉀、 磷與其他灰分元素， 改善作物的營(yíng)養(yǎng)條件。 本品的生產(chǎn)菌種為膠質(zhì)芽胞桿菌( B a c i l l u s m u c i l g i n o s u s ) 的菌株及其他經(jīng)過(guò)鑒定的用于硅酸鹽細(xì)菌肥料生產(chǎn)的菌種。 該菌在含鉀長(zhǎng)石粉的無(wú)氮培養(yǎng)基上有一定解鉀作用， 菌體內(nèi)和發(fā)酵液中存在刺激植物生長(zhǎng)的生長(zhǎng)素物質(zhì)。I5 復(fù)合微生物肥料: 含有上述( 解磷、 解鉀、 固氮微生物) 或其他經(jīng)過(guò)鑒定的兩種以上互不 拮抗微生， 通過(guò)其生命活動(dòng)， 能增加作物營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)量。技術(shù)要求4 門成品技術(shù)指標(biāo)， 表 I 成品技術(shù)指標(biāo)， ，在產(chǎn)品標(biāo)明的失效期前有效活菌數(shù)應(yīng)符合指標(biāo)要求， 出廠時(shí)產(chǎn)品有效活菌數(shù)必須高出本指標(biāo)3 0 %以上4 . 2 成品無(wú)害化指標(biāo)N Y 2 2 7 一 9 4表 2 成品無(wú)害化指標(biāo)編號(hào)單位標(biāo)準(zhǔn)限值蛔蟲(chóng)卵死亡率 大腸桿菌值9 5 - 1 0 0勻鄰蜘枷汞及化合物( 以H g 計(jì))錫及化合物( 以C d 計(jì))鉻及化合物( 以C r 計(jì))砷及化合物( 以A s 計(jì))鉛及化合物( 以P b 計(jì))mg / k gm g / k gmg / k gm g / k gmg / k g10-10 55 檢測(cè)方法5 . 1 外觀 感觀檢驗(yàn)符合4 . 1 成品技術(shù)指標(biāo)。5 . 2 有效活菌數(shù)和雜菌含量測(cè)定5 . 2 . 1 試劑和溶液 a . 無(wú)菌水、 蒸餾水; b ， 選擇培養(yǎng)基( 附錄A ) ; c . 剛果紅染液( 0 . 5 %) 05 . 2 . 2 儀器 a . 顯微鏡 1 o 0 o x; b搖床旋轉(zhuǎn)式2 0 0 r / m i n ; c . 恒溫培養(yǎng)箱; d . 恒溫烘干箱; e滅菌鍋; f ， 扭力天平( 分度值0 . 0 1 g ) ; S . 玻璃儀器( 滅菌的9 c m平皿、 1 0 m L , 5 m L , l m L吸管、 三角瓶、 玻璃刮刀) 。5 . 2 - 3 測(cè)定步驟5 . 2 . 3 . 1 采樣應(yīng)不少于5 0 0 g ， 從中 稱取1 0 2 0 g ( 精確0 . 0 1 g ) ， 加入帶玻璃珠的1 0 0 -2 0 0 m L的無(wú)菌水中( 液體菌劑取1 0 2 0 m L ， 加入9 0 1 8 0 m L的無(wú)菌水中) ， 靜置2 0 m i n 后在旋轉(zhuǎn)式搖床上2 0 0 r /m i n 充分振蕩3 0 m i n ， 即成母液的菌懸液。5 . 2 . 3 . 2 用無(wú)菌吸管吸取5 m L上述母液的菌懸液加入4 5 m L 無(wú)菌水中， 混勻成1 : 1 0 稀釋的菌懸液， 這樣依次稀釋， 分別得到1 : 1 X1 叭 1 : 1 X1 0 “ 和 1 : 1 X1 0 , 1 : 1 X1 0 等濃度( 每個(gè)稀釋度必須更換無(wú)菌吸管) 。5 . 2 . 3 . 3 用1 m L 無(wú)菌吸管分別吸取不同稀釋度菌懸液0 . 1 m L ， 加至直徑為9 c m平皿的瓊脂培養(yǎng)基表面， 用無(wú)菌玻璃刮刀將菌 懸液均勻地徐于瓊脂表面。 或取1 m L不同稀釋度菌懸液加入培養(yǎng)皿內(nèi)， 與瓊脂培養(yǎng)基混勻。 每個(gè)樣品取3 個(gè)連續(xù)適宜稀釋度， 每一稀釋度重復(fù)3 次， 同時(shí)加無(wú)菌水的空白對(duì)照， 培養(yǎng)2 - 5 d ， 每個(gè)稀釋度取5 1 0 個(gè)菌落的菌體， 涂片染色， 顯微鏡觀察識(shí)別后計(jì)數(shù)菌落。5 . 2 . 4 計(jì)算公式: 統(tǒng)計(jì)算出同一稀釋度三個(gè)平皿上菌落平均數(shù)。 根據(jù)式( 1 ) 和式( 2 ) 計(jì)算:N Y 2 2 7 一 9 4菌劑含菌數(shù) 一 菌落平均數(shù) x母液菌懸液的體積菌劑數(shù)雜菌率( %)=稀釋倍數(shù) x雜菌數(shù)有效菌數(shù) 十雜菌數(shù)火 1 0 0 (2) 根據(jù)菌落特征判定， 分別計(jì)算出制品中的特定微生物及雜菌數(shù)率。 固 體( 包括顆粒) 菌劑含菌數(shù)以億/ 9 表示， 液體菌劑含菌數(shù)以 億/ m L 表示。5 . 2 . 5 菌落計(jì)數(shù)5 . 2 . 5 . 1 以平板上出現(xiàn)3 0 -3 0 0 個(gè)菌落數(shù)的稀釋度平板為計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)。5 . 2 . 5 . 2 當(dāng)只有一個(gè)稀釋度， 其平均菌落數(shù)在 3 0 -3 0 0 之間時(shí)， 則以該平均菌落數(shù)乘以其稀釋倍數(shù)( 見(jiàn)表 3 例1 ) 05 . 2 . 53 若有兩個(gè)稀釋度， 其平均菌落數(shù)均在3 0 3 0 0 之間， 應(yīng)按兩者菌落總數(shù)之比 值來(lái)決定。 若其比例小于2 應(yīng)計(jì)數(shù)兩者的平均數(shù)， 若大于2 則計(jì)數(shù)其中稀釋較小的菌落總數(shù)( 見(jiàn)表3 例2 及例3 ) ,5 . 2 . 5 . 4 若三個(gè)稀釋度的平均菌落數(shù)均大于3 0 0 ， 則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)( 見(jiàn)表 3 例4 ) ,5 . 2 - 5 . 5 若三個(gè)稀釋度的平均菌落數(shù)均小于3 0 ， 則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)( 見(jiàn)表3 例 5 ) ,5 . 2 - 5 . 6 若三個(gè)稀釋度的平均菌落數(shù)均不在3 0 - 3 0 0 之間， 則以最接近3 0 0 或3 0 的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)( 見(jiàn)表3 例6 ) a 表 3 計(jì)算菌落總數(shù)方法的示例例次不同稀釋度的平均菌落數(shù)兩個(gè)稀釋度菌落數(shù)之比 菌落總數(shù)個(gè)/ . L 或個(gè)/ H1 0 - 1 0 - 1 0 - 11 4 3 11 5 92 21 . 6 X1 0 22 7 6 02 3 53 11 . 32 . 7 X1 0 32 6 7 61 3 63 42 . 51 . 4 X1 0 4無(wú)法計(jì)數(shù)1 1 4 23 1 23 . 1 X1 0 52 81 252 . 8 火1 0 ,6無(wú)法計(jì)數(shù)3 0 31 83 . 0 X1 0 5 . 3 含水量測(cè)定5 . 3 門儀器 a . 土壤鋁盒; b . 扭力天平( 分度值。 . 0 1 g ) ; c恒溫烘干箱; d干燥器。5 . 3 . 2 測(cè)定步驟 稱取樣品3 0 - 4 0 g ( 精確到。 . 0 1 g ) 二份放人鋁盒中， 于1 0 5 條件下烘烤入干燥器內(nèi) 冷卻， 一般冷卻2 0 m i n ， 再稱其殘重和鋁盒重， 損失量即為水分含量4 h 直至恒重， 取出后放N Y 2 2 7 一 9 4.(3)533 汁算公式:式中: 。 。 表示烘干前樣品重， 9 ; m , 表示烘干后樣品重， 9 。5 . 4 p H值測(cè)定5 . 4 . 1 試劑和溶液 無(wú)離子水5 . 4 . 2 儀器 a燒杯 ; b ， 酸度計(jì); c . 扭力天平( 分度值。 - 0 1 g ) ,5 . 4 . 3 測(cè)定步驟H BO % 一 m 糯 尹 = X 1 0 0 隨機(jī)稱取樣品8 g ， 將樣品置于干凈燒杯內(nèi)， 按1 : 2 加入無(wú)離子水， 浸泡振蕩均勻。預(yù)熱p H計(jì)， 用標(biāo)準(zhǔn)溶液( p H 6 . 8 6 ) 校正儀器后， 測(cè)定樣品懸液p H， 邊測(cè)邊攪拌， 儀器讀數(shù)穩(wěn)定后記錄。 每個(gè)樣品重復(fù)三次5 . 5 細(xì)度檢驗(yàn)5 . 5 . 1 儀器 扭力天平( 分度值。 . 0 1 g ) ; b . 標(biāo)準(zhǔn)篩孔徑 0 . 1 8 m m孔徑0 . 2 5 m m,5 - 5 - 2 測(cè)定步驟 供檢樣 1 0 0 g ， 經(jīng)過(guò)1 0 5 烘干1 h ， 過(guò)孔徑0 . 1 8 m m標(biāo)準(zhǔn)篩， 篩下部分占檢樣重量)8 0 ， 其他部分全部通過(guò)孔徑0 . 2 5 m m篩， 即為合格。5 . 6 有機(jī)質(zhì)測(cè)定5 . 6 . 1 儀器 a . 瓷柑竭; b . 烘箱; c . 高溫電爐; d . 干燥器; e . 扭力夭平( 分度值。 . 0 1 g ) ,5 . 6 . 2 測(cè)定步驟 采用灼燒減重法測(cè)定。 稱取樣品1 0 g , 置已稱重的瓷柑鍋中于6 0 C 烘箱中烘4 -6 h , 冷卻稱重( m。 ) 。然后在5 5 0. 6 0 0 高溫電爐中 灼燒2 h ， 用增禍鉗取至干燥器中， 放冷至室溫， 稱重( 二 ， ) 。計(jì)算公式.，.(4 有機(jī)質(zhì)。 。 表示柑塌加烘干樣品重， 9 ;m , 表示增禍加灼燒后樣品 重， 9 ;m表示風(fēng)干后樣品重， 9 。% m o - M , X1 0 0。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 . ， 。 。 。 。 .有毒物質(zhì)( 重金屬) 的測(cè)定 汞，J:1卜已中7又415式55N Y 2 2 7 一 9 4 按G B 7 4 6 8 操作5 . 了 . 2 鎬 按G B 7 4 7 1 操作。5 ， 7 . 3 鉻 按G B 7 4 6 6 操作。5 . 7 . 4 砷 按G B 7 4 8 5 操作。5 . 7 . 5 鉛 按G B 7 4 7 0 操作。58 蛔蟲(chóng)卵的測(cè)定 按G B 8 1 7 2 操作5 . 9 大腸菌值的測(cè)定 按G B 4 7 8 9 操作6 檢驗(yàn)規(guī)則6 門 生產(chǎn)微生物肥料所使用的菌種， 須在本標(biāo)準(zhǔn)菌種規(guī)定范圍 之內(nèi)。 若使用規(guī)定之外的菌種 必須經(jīng)過(guò)國(guó)家級(jí)科研單位的鑒定， 包括菌種屬及種的學(xué)名， 形態(tài)， 生理生化特性， 效力， 安全性等完整資料。 以杜絕一切植物檢疫對(duì)象， 傳染病病源作為菌種生產(chǎn)的產(chǎn)品6 . 2 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定中的成品無(wú)害化指標(biāo)和有效活菌數(shù)、 雜菌數(shù)及有效期， 是微生物肥料質(zhì)量安全、 有效的重要依據(jù)， 一切微生物肥料的產(chǎn)品必須達(dá)到的指標(biāo)。成品無(wú)害化檢驗(yàn)可委托省市以上環(huán)境監(jiān)測(cè)機(jī)構(gòu)進(jìn)行， 并提供檢驗(yàn)證明。 有效活菌數(shù)、 雜菌數(shù)， 由 農(nóng)業(yè)部指定檢測(cè)機(jī)構(gòu)檢驗(yàn)。 本標(biāo)準(zhǔn)所規(guī)定的外觀、 水分、 細(xì)度、 有機(jī)質(zhì)和p H值等指標(biāo) 作為微生物肥料質(zhì)量檢驗(yàn)參考指標(biāo).6 . 3 復(fù)合微生物肥料， 是指兩種以上微生物菌種的復(fù)合。不論使用何種微生物菌種、 幾種菌種生產(chǎn)， 其菌種必須符合本標(biāo)準(zhǔn)( 6 . 1 ) 規(guī)定。 而且有效活菌數(shù): 液體型不得低于1 0 億/ m L固體型不得低于2 億/ g .顆粒型不得低于1 億/ 9 。 復(fù)合微生物肥料的成分中， 除主體微生物外， 含有其他基質(zhì)成分的， 其基 質(zhì)成分應(yīng)有利于 微生物肥料中的菌體生存， 絕不能降低或抑制菌體的存活。 因加基質(zhì)成分過(guò)多、 不當(dāng)， 微生物肥料有效活菌數(shù)過(guò)低或有效活菌數(shù)測(cè)不出來(lái)的而不達(dá)標(biāo)者， 則該產(chǎn)品不是微生物肥料。64 微生 物肥料應(yīng)由 生產(chǎn)廠的技術(shù)檢驗(yàn)部門進(jìn)行檢驗(yàn)， 生產(chǎn)廠應(yīng)保證所有出廠的微生 物肥料都達(dá)到本標(biāo)準(zhǔn)要求， 每批出廠的微生物肥料都應(yīng)附有一定格式的質(zhì)量合格證明。6 . 5 微生物肥料按批檢驗(yàn)， 以每一發(fā)酵罐生產(chǎn)的產(chǎn)品為一批。6 . 6 取樣方法， 隨機(jī)抽樣， 以箱或袋為抽樣單位。每批固體菌劑抽樣 5 - 1 0 箱。每箱中抽 1 袋， 無(wú)菌操作取祥1 0 0 g , 混勻用四分法縮分到5 0 0 g ， 供檢驗(yàn)用。 顆粒菌劑每批抽樣5 或1 0 袋， 無(wú)菌 操作， 每袋取樣。5 k g ， 仔細(xì)混勻后， 用四分法縮分到5 0 0 g ， 以供檢驗(yàn)用。 液體菌劑每批抽樣5 或1 0 箱， 每箱抽1 瓶， 無(wú)菌操作， 每瓶吸取5 m L一同放入無(wú)菌的三角瓶中， 搖均勻， 瓶上粘貼標(biāo)簽， 標(biāo)明 產(chǎn)品名稱、 取樣日 期、 批號(hào)、 取樣人， 以供檢驗(yàn)用.G7 如果檢驗(yàn)結(jié)果不符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定時(shí)， 應(yīng)以加倍數(shù)量按規(guī)定選取試樣進(jìn)行檢驗(yàn)， 如仍不符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，該批產(chǎn)品判為不合格。7 包裝、 標(biāo)志、 運(yùn)輸與貯存71 微生物肥料固 體菌劑內(nèi) 包裝材料用聚乙 爆薄膜袋， 外用紙箱包裝。 液體菌劑小包裝用玻璃質(zhì)疫苗瓶或塑料瓶， 外包裝紙箱。顆粒菌劑用編織袋內(nèi)襯塑料薄膜袋包裝， 袋口須密封牢固。72 包裝箱( 袋) _ r . 應(yīng)印有產(chǎn)品名稱、 商標(biāo)、 標(biāo)準(zhǔn)號(hào)、 生產(chǎn)許可證號(hào)、 生產(chǎn)廠名、 廠址、 生產(chǎn)日 期、 有效期、批號(hào)、 凈重、 防曬、 防潮、 易碎、 防倒置等標(biāo)記。 內(nèi)包裝袋上應(yīng)印有產(chǎn)品名稱、 商標(biāo)、 標(biāo)準(zhǔn)號(hào)、 有效細(xì)菌含量，N Y 2 2 7 一 9 4研制、 生產(chǎn)單位， 產(chǎn)品性能及使用說(shuō)明。7 . 3 每箱( 袋) 產(chǎn)品中附有產(chǎn)品合格證和使用說(shuō)明書(shū)。7 . 4 適用于常用運(yùn)輸工具， 運(yùn)輸過(guò)程中應(yīng)有遮蓋物， 防雨淋、 防日曬及 3 5 以上高溫氣溫低于。 時(shí)需用保溫車( 8 -1 0 0c ) 運(yùn)輸。輕裝輕卸， 避免破損了 . 5 微生物肥料應(yīng)貯存在常溫、 陰涼、 干燥、 通風(fēng)的庫(kù)房?jī)?nèi)， 不得露天堆放， 以防雨淋和日曬， 防止長(zhǎng)時(shí)間3 5 以上高溫。碼放高度毛1 3 0 c mN Y 2 2 7 一 9 4 附錄A有效活菌數(shù)測(cè)定的選擇培養(yǎng)基 ( 補(bǔ)充件)1 %N a , Mo O , 。 2 H, 01 0 o H , B O ,酵母膏1 . 0 g ( 或酵母粉0 . 8 g )。 ， 5 %剛果紅P H: m l.M L059025喲A l 根瘤菌培養(yǎng)基: K, HP 04 Mg S 0 4 7 H , 0 Na Cl C 6 H14 0 6 C a C O,10 g1. 5 gm L0A 2 固氮菌用阿須貝氏( A s h b y ) 培養(yǎng)基: K H , P 0 4 0 . 2 g Mg S 0 4 7 H 2 0 0 . 2 g N a C I 0 . 2 gC a C O ,C fi H1 4 0 6C a S 0 4 2 H2 0P HA 3 聯(lián)合固氮菌培養(yǎng)基: ( 1 ) 培養(yǎng)基: 7 -C e H, 1 0 7 N a K H , P 0 4 K 2 H P 0 4 Mg S 0 4 . 7 H , 0 酵母膏5g0 . 4 g0 . 1 g0 . 2 g1 . 0 gNa ClC a C l ,F e C l ,N a , Mo 0 4 2 H , 0P H0 . 1 g0 . 0 2 g0 . 0 1 g0 . 0 0 2 g6 . 8 - 7 . 0瑰傀魄瑰六nnUn( 2 ) 培養(yǎng)基:C , H, O , N a ,K 2 H P 0 ,K H2 P O aMg S 0 , 7 H , 0Na Cl5gC a C l ,N a , Mo O , 2 H 2 0F e C l ,B T B ( 0 . 5 g / L )P H0 . 0 2 g0 . 0 0 2 g0 . 0 1 g5 mL7 . 0A 4 硅酸鹽細(xì)菌培養(yǎng)基: C 1 2 H2 2 01 1 Mg S O 一 7 H , 0 C a C O,Na , HP O,F e C l ,玻璃粉P H2 . 0 g0 . 0 0 5 g1 . 0 g7 . 0999OLa，土亡Jonn 5 解磷細(xì)菌培養(yǎng)基: ( 1 ) 有機(jī)磷細(xì)菌培養(yǎng)基: C , R2 0 fi H, O1 0只( NH4 ) I S O0. 5 g421N Y