(論文)雌激素受體_基因大鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型的建立及微血管觀察

1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. 多學者用來研究缺血性心肌損傷的理想動物模型。本實驗通 過給大鼠腹腔注射異丙基腎上腺素5mg/kg,共2次,結(jié)果成功 復(fù)制了大鼠急性心肌損傷的動物模型,且病理特點與以往報 道一致 4 - 5。 在本實驗中,筆者用卡托普利對造模大鼠進行預(yù)處理,盡 管仍有壞死的心肌細胞,但與Iso損傷組比較,心肌壞死面積 明顯減少,同時,心肌細胞凋亡指數(shù)減少,Bax蛋白表達水平降 低,Bcl - 2蛋白表達增高。由此可見,卡托普利通過升高凋亡 相關(guān)蛋白Bcl - 2表達,抑制Bax的表達而減少心肌細胞凋亡, 心肌細胞凋亡減少,心肌壞死隨之減少,從而發(fā)揮對心肌的保 護作用?？ㄍ衅绽軠p少心肌細胞凋亡的原因有很多,最主 要的是通過抑制血管緊張素II誘導(dǎo)的細胞凋亡。心肌細胞在 缺血、 缺氧的情況下,體內(nèi)腎素-血管緊張素系統(tǒng)過度激活, 促進血管緊張素I(Ang I)轉(zhuǎn)變?yōu)檠芫o張素II(Ang II)。An2 gII可使促凋亡基因Bax蛋白表達增加,抗凋亡基因Bcl - 2蛋 白表達下降,從而使Bcl - 2/Bax比值下調(diào)而誘導(dǎo)細胞凋 亡 6。而卡托普利通過抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的活性 ,阻止 了Ang I轉(zhuǎn)換為Ang II,從而不但使Ang II所產(chǎn)生的氧自由基 和炎性介質(zhì)減少,而且阻斷Ang II介導(dǎo)的細胞凋亡作用。同 時,還能降低促凋亡基因Bax的表達,上調(diào)抗凋亡基因Bcl - 2 的表達,從分子水平發(fā)揮抗細胞凋亡的作用。 總之,卡托普利等血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑可以發(fā)揮心 肌保護作用,這可能是通過上調(diào)Bcl - 2和下調(diào)Bax蛋白的表 達來實現(xiàn)的。 4 參考文獻 1 Krijnen PA,Nijmeijer R,Meijer CJ, et al1Apoptosis inmyo2 cardial ischemia and infarctionJ 1J Clin Pathol, 2002, 55 (11) : 8011 2 Takemura G, Fujiwara H1Role of apoptosis in remodeling aftermyocardial infarctionJ 1Phar macol Ther, 2004, 104 (1) : 11 3 Itoh G, Tamura J, SuzukiM, et al1DNA fragmentation of hu2 man infarcted myocardial cells demonstrated by the nick end labe2 ling method and DNA agarose gel electrophoresis J 1Am J Pathol, 1995, 146(6) : 13251 4 Manikandan P, Sumitra M, Kumar DA, et al1Antioxidant potential of a novel tetrapeptide derivative in isoproterenol - in2 duced myocardial necrosis in rats J 1Pharmacology, 2002, 65 (2) : 1031 5 劉 濱,李紅莉,劉 陽,等 1大鼠急性心肌損傷E選擇 素和細胞因子的變化J 1中國地方病學雜志, 2005, 24 (2) : 1581 6 Monteiro P, Goncalves L, Providencia LA1Diabetes and cardiovascular disease:the road to cardioprotection J 1Heart, 2005, 91(12) : 16211 收稿日期: 2009 - 04 - 03 編校:李曉飛 雌激素受體基因大鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型的建立及微血管觀察 李本楠 (長春醫(yī)學高等?？茖W校,吉林 長春 130031) 摘 要 目的:對皮下筋膜層與腹壁肌層之間移植自體子宮內(nèi)膜制作的子宮內(nèi)膜異位癥模型進行評估,且進一步研究雌 激素受體在宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生發(fā)展過程中的作用。方法:用外科手術(shù)方法對15只 基因雌性性成熟大鼠進行自體子宮移植,術(shù) 后21d、29 d取出病灶組織進行組織形態(tài)學觀察,免疫組織化學染色觀察微血管密度。結(jié)果:異位子宮內(nèi)膜可形成明顯囊腫,內(nèi)含 黏液,具有正常子宮內(nèi)膜上皮細胞生長,異位內(nèi)膜中微血管密度較正常子宮內(nèi)膜高。結(jié)論:應(yīng)用手術(shù)方法建立的大鼠子宮內(nèi)膜異 位癥模型,可以作為子宮內(nèi)膜異位研究的動物模型,便于研究雌激素受體在子宮內(nèi)膜異位發(fā)生發(fā)展過程中的作用。 關(guān)鍵詞 子宮內(nèi)膜異位癥;微血管密度;雌激素受體;大鼠 Establishment of model of endometriosis with estrogen receptorgene in rats and capillary vessel observation LIBen - nan (Changchun M edical College, Changchun 130031, China) Abstract:Objective To evaluate the model of endometriosis that was made through transplantion between superficial fascia and ab2 dominalwall, and research the effection of estrogen receptoron developmentof endometriosis1M ethod Total15 femal rats that tookgene were transplanted with autoallergic uterus thruogh surgical intervention, the tissue and shape of focus of infection and density of capillary vesselwere observed through i mmunohistochemistry 21days and 29 days after operation1Results Dystopic endometria formed obvious cyst with mucus and had normal endometria endothelial cell, the density of capillary vessel in dystopic endometriawas higher than normal endo2 metrias1Conclusion Themodelof ratsendometriosis through surgical intervention can take for themodelof researching of endometriosis, it is easy to research the effection of estrogen receptor on development of endometriosis1 9652吉林醫(yī)學2009年11月第30卷第21期 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. KeyW ords: Endometriosis;Density of capillary vessel; Estrogen receptor; Rat 子宮內(nèi)膜異位癥,是指子宮內(nèi)膜組織出現(xiàn)在子宮體以外 的部位,是婦科常見病、 多發(fā)病,近年來有上升趨勢,而臨床藥 物治療及手術(shù)效果欠佳,目前眾多國內(nèi)外學者研究發(fā)現(xiàn)子宮 內(nèi)膜異位癥與雌激素受體的作用密切,但機制不詳。因此,建 立子宮內(nèi)膜異位癥動物模型,對其病因?qū)W研究及新的治療藥 物的篩選和深入研究雌激素受體在子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生發(fā)展 過程中的作用有深遠意義。 1 材料與方法 111 材料 11111 實驗動物:健康清潔級雌性大鼠30只,年齡3075d, 體重 (189 10) g,由長春生物制品研究所提供,并進行基因鑒 定。 11112 試劑:微血管染色所用的兔抗鼠(D3)多克隆抗體和 SP免疫組化染色劑盒及DAB顯色劑購自吉林省金泰化玻有 限公司。 112 方法 11211 分組:隨機分兩組, 15只大鼠選模, 15只大鼠作為對 照組,適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。 11212 建模方法: 10%水合氯醛(3ml/kg) ,腹腔注射麻醉大 鼠,腹部備皮,常規(guī)碘附消毒,正中縱行開腹,切口約12cm, 分離子宮周圍結(jié)締組織,鈍鑷分離出大鼠右側(cè)子宮,將子宮體 縱行剖開,暴露于宮內(nèi)膜,剪下中間一段子宮,置于生理鹽水 中,切割成約4mm4mm4mm的子宮片,將切好的子宮片置 入腹肌與皮下筋膜層之間,使宮內(nèi)膜與腹壁緊密貼合,常規(guī)關(guān) 腹,術(shù)后肌內(nèi)注射青霉素預(yù)防感染。常規(guī)飼養(yǎng),連續(xù)觀察。 113 觀察指標和方法 11311 大體觀察:術(shù)后每周觸摸包塊至少2次,觀察大小。 喂養(yǎng)3周后,用脊柱拉斷法處死大鼠后剖開腹腔,觀察移植病 灶體積大小。 11312 形態(tài)學觀察:取出模型組大鼠的異位內(nèi)膜包塊和左側(cè) 未行手術(shù)的正常子宮,保存在10%甲醛中,將取材病灶制成石 蠟標本,常規(guī)HE染色,光鏡下觀察異位內(nèi)膜,在位內(nèi)膜的組 織形態(tài)學特征。 11313 微血管密度觀察:分別將模型組大鼠的異位包塊及正 常子宮內(nèi)膜常規(guī)石蠟包埋、 切片,用SP法檢測內(nèi)膜組織微血 管密度,低倍鏡下 (10 10) 檢視切片的微血管染色分布,其中 在較高微血管區(qū)域內(nèi)選擇8個最高微血管染色區(qū)域置于高倍 鏡下 (10 40) 標記微血管記數(shù)。 2 結(jié)果 211 術(shù)后觸摸包塊情況:術(shù)后7d,有8只模型組大鼠在腹壁 可觸及小米粒大小的包塊, 21d處死前有10只大鼠腹壁兩側(cè) 可觸及包塊,其余5只大鼠一側(cè)可觸及包塊。 212 形態(tài)學及組織學觀察:肉眼見異位病灶大小不一,內(nèi)形 成透亮的囊狀,內(nèi)充滿液狀物,其表面及四周見明顯新生血 管,部分病灶與大網(wǎng)膜、 腸管等相黏連。鏡下觀察: 異位病 灶的內(nèi)膜沒有明顯外膜,而在位子宮內(nèi)膜為臟層腹膜。異 位內(nèi)膜為多囊,囊內(nèi)壁為內(nèi)膜上皮覆蓋,個別病灶伴有火性壞 死,內(nèi)呈渾濁黃白色結(jié)節(jié)狀,病理切面見大片炎性壞死細胞, 正常在位子宮內(nèi)膜無此現(xiàn)象。 異位內(nèi)膜病灶間質(zhì)層較薄, 而在位子宮內(nèi)膜下層腺體豐富。 異位內(nèi)膜病灶周邊肌層也 較薄,其內(nèi)血管較少。 3 討論 大鼠生命力較強,激素水平高,性周期短且規(guī)律,因此,用 大鼠做關(guān)于子宮內(nèi)膜異位癥造模及前后對此觀察,較方便且 經(jīng)濟。手術(shù)移植法是造模較常用的方法。本實驗將大鼠本位 的子宮內(nèi)膜移植在腹肌與皮下筋膜間,位置好固定,異位的內(nèi) 膜不易移動,手術(shù)程序簡便,較傳統(tǒng)的造模方式將子宮內(nèi)膜移 植直腸、 卵巢等部位更有操作性、 實用性。本實驗造模后因肌 內(nèi)注射青霉素預(yù)防感染, 15只造模大鼠無一例感染,使造模后 期觀察得以順利進行。本造模實驗選擇3075d的大鼠,此 時期為大鼠的青壯年期,激素水平高,營養(yǎng)狀態(tài)好,使異位子 宮內(nèi)膜包塊得以順利生成,便于觀察。對此,本實驗在術(shù)后7d 即在造模大鼠腹壁觸及小米粒大小的包塊, 21d處死前有10 只大鼠腹壁兩側(cè)可觸及包塊,其余5只造模大鼠一側(cè)可觸及 包塊?？梢哉f,此次造模成功 2 。 本實驗中檢測的子宮內(nèi)膜異位癥包塊與正常在位宮內(nèi)膜 鏡下提示:微血管密度(MVD)在異位內(nèi)膜中值較高,由此推論 異位病灶與血管供應(yīng)豐富有關(guān),符合本實驗結(jié)論及人類的子 宮內(nèi)膜異位癥的病理現(xiàn)象。本實驗具有進一步研究價值。目 前認為雌激素受體存在兩種亞型, ER -和ER -。在女性 生殖系統(tǒng)中ER -mRNA表達較ER -mRNA為強。兩種受 體在子宮內(nèi)膜異位癥中的作用,專家們對此意見不統(tǒng)一。有 關(guān)資料證實,與ERKO鼠相比,ERKO鼠的表型變化為仔鼠 產(chǎn)率低,體形小、 雌鼠皮質(zhì)骨變粗,在中樞神經(jīng)系統(tǒng),ERKO 鼠的部分腦部神經(jīng)元細胞數(shù)減少。認為ER -在卵泡、 骨 骼、 細胞增殖等方面有抑制作用。本實驗彩用ERKO鼠為研 究對象,未受以上 ERKO性狀影響,造模成功。異位宮內(nèi)膜 病灶內(nèi)的囊泡生長良好,光鏡下見囊內(nèi)壁有子宮內(nèi)膜上皮細 胞生成,與人類子宮內(nèi)膜異位癥包塊在光鏡下顯示符合,本實 驗對于深入探討雌激素受體,尤其是ER -與子宮內(nèi)膜異位 癥的關(guān)系和尋找子宮內(nèi)膜異位癥的新的治療方法具有一定意 義 3 。 4 參考文獻 1 張 穎,曹 洪,張昌軍 1改良大鼠子宮內(nèi)膜異位癥模 型的建立微血管密度觀察J 1中國實驗動物學報, 2008, 14 (1) : 561 2 宮庭鈺,關(guān) 錚,張卓梅,等 1雌激素受體基因敲除小 0752吉林醫(yī)學2009年11月第30卷第21期 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. 鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型的建立 J 1中國實驗動物學報, 2008, 16 (2) : 1481 3 王澤華,程麗坤,孫麗君,等 1婦產(chǎn)科學M 1北京:人 民衛(wèi)生出版社, 2008: 2151 收稿日期: 2009 - 04 - 27 編校:李曉飛 病例報告 骨盆骨折合并嚴重骶髂關(guān)節(jié)脫位3例報告 姜殿鳳 (敦化市醫(yī)院,吉林 敦化 133700) 關(guān)鍵詞 骨盆骨折;骶髂關(guān)節(jié)脫位 我院于1995年2月 2002年10月收治3例骨盆骨折合 并嚴重骶髂關(guān)節(jié)脫位、 傷側(cè)肢體短縮較為嚴重的患者?，F(xiàn)將 診治體會報告如下。 1 病歷摘要 例1,患者,男, 30歲,藏族。以“ 車禍摔傷左髖部10h”,于 1995年2月11日急診入院。查體:一般情況良好,抬入病房, 表情痛苦,恥骨聯(lián)合及左骶髂關(guān)節(jié)部有明顯壓痛,骨盆擠壓試 驗( + ) ,左下肢較右下肢短縮6cm。X線片示:左側(cè)骶髂關(guān)節(jié) 脫位,恥骨聯(lián)合分離,左側(cè)恥、 坐骨支骨折。入院急診在硬膜 外麻醉下行閉合式手法復(fù)位。硬膜外麻醉后,取仰臥位,用力 對抗牽引復(fù)位,復(fù)位時聽到“ 咯嚓 ” 聲即可,測量雙側(cè)下肢長度 相同,行皮牽引治療。2d后床旁拍片,觀察骨折脫位已復(fù)位。 2個月后拆除牽引,復(fù)查X線片,骨折復(fù)位良好,出院回家休 養(yǎng), 1月后,再次復(fù)查X線片,骨折愈合良好,并可下地做輕微 的活動。7年后隨訪,行動正常。 例2,患者,男, 35歲,漢族。以“ 翻車致傷右髖部20d”,于 2002年3月13日收入我院,患者于20d前因車禍致傷,曾在 外院治療,未見好轉(zhuǎn),即轉(zhuǎn)入我院治療。查體:一般情況良好, 恥骨聯(lián)合處及右骶髂關(guān)節(jié)處有明顯壓痛,骨盆擠壓試驗( + ) , 右下肢較左下肢短縮5cm。X線片示:右髂骨翼骨折,骶髂關(guān) 節(jié)脫位,右恥骨、 坐骨支骨折,恥骨聯(lián)合分離。入院4d后行大 重量右股骨髁上牽引治療,重量約為本人體重的1/5。2周 后,行床旁X線片發(fā)現(xiàn)骨折已基本復(fù)位,骶髂關(guān)節(jié)亦復(fù)位,此 后將牽引重量減至本人體重的1/10,維持牽引。2個月后拆 除牽引,測量雙側(cè)下肢長度相同,扶雙拐下地活動。1年后隨 訪,行動正常。 例3,患者,女, 28歲,藏族。以“ 車禍致傷左髖部,疼痛不 能站立,血尿2h” 于1999年3月2日入院?；颊哂醒?請泌 尿科會診,診斷為“ 膀胱破裂 ” 并急診行膀胱修補術(shù), 10天后 轉(zhuǎn)入我科。查體:一般情況良好,左骶髂關(guān)節(jié)壓痛( + ) ,骨盆 擠壓試驗( + ) ,左下肢較右下肢短縮5cm。X線片示:左髂骨 翼骨折,骶髂關(guān)節(jié)脫位