GB5009.35-2016食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中合成著色劑的測(cè)定.pdf

中 華 人 民 共 和 國(guó) 國(guó) 家 標(biāo) 準(zhǔn)G B5 0 0 9 .3 52 0 1 6食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中合成著色劑的測(cè)定2 0 1 6 - 0 8 - 3 1發(fā)布2 0 1 7 - 0 3 - 0 1實(shí)施中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)發(fā) 布G B5 0 0 9.3 52 0 1 6 前 言 本標(biāo)準(zhǔn)代替G B/T5 0 0 9.3 52 0 0 3 食品中合成著色劑的測(cè)定 。本標(biāo)準(zhǔn)與G B/T5 0 0 9.3 52 0 0 3相比, 主要變化如下: 標(biāo)準(zhǔn)名稱修改為“ 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中合成著色劑的測(cè)定” ; 增加了試劑的級(jí)別和分子式; 增加了標(biāo)準(zhǔn)品; 修改了計(jì)算公式; 修改了色譜圖; 刪除第二法薄層色譜法; 刪除第三法示波極譜法。G B5 0 0 9.3 52 0 1 61 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中合成著色劑的測(cè)定1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了飲料、 配制酒、 硬糖、 蜜餞、 淀粉軟糖、 巧克力豆及著色糖衣制品中合成著色劑( 不含鋁色錠) 的測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于飲料、 配制酒、 硬糖、 蜜餞、 淀粉軟糖、 巧克力豆及著色糖衣制品中合成著色劑( 不含鋁色錠) 的測(cè)定。2 原理食品中人工合成著色劑用聚酰胺吸附法或液-液分配法提取, 制成水溶液, 注入高效液相色譜儀, 經(jīng)反相色譜分離, 根據(jù)保留時(shí)間定性和與峰面積比較進(jìn)行定量。3 試劑和材料除非另有說(shuō)明, 本方法所用試劑均為分析純, 水為G B/T6 6 8 2規(guī)定的一級(jí)水。3.1 試劑3.1.1 甲醇(CH3OH) : 色譜純。3.1.2 正己烷(C6H1 4) 。3.1.3 鹽酸(HC l) 。3.1.4 冰醋酸(CH3C OOH) 。3.1.5 甲酸(HC OOH) 。3.1.6 乙酸銨(CH3C OONH4) 。3.1.7 檸檬酸(C6H8O7H2O) 。3.1.8 硫酸鈉(N a2S O4) 。3.1.9 正丁醇(C4H1 0O) 。3.1.1 0 三正辛胺(C2 4H5 1N) 。3.1.1 1 無(wú)水乙醇(CH3CH2OH) 。3.1.1 2 氨水(NH3H2O) : 含量2 0%2 5%。3.1.1 3 聚酰胺粉( 尼龍6) : 過(guò)2 0 0m( 目) 篩。3.2 試劑配制3.2.1 乙酸銨溶液(0.0 2m o l/L) : 稱取1.5 4g乙酸銨, 加水至10 0 0m L, 溶解, 經(jīng)0.4 5m微孔濾膜過(guò)濾。3.2.2 氨水溶液: 量取氨水2m L, 加水至1 0 0m L, 混勻。3.2.3 甲醇-甲酸溶液(6+4, 體積比) : 量取甲醇6 0m L, 甲酸4 0m L, 混勻。G B5 0 0 9.3 52 0 1 62 3.2.4 檸檬酸溶液: 稱取2 0g檸檬酸, 加水至1 0 0m L, 溶解混勻。3.2.5 無(wú)水乙醇-氨水-水溶液(7+2+1, 體積比) : 量取無(wú)水乙醇7 0m L、 氨水溶液(3.2.2)2 0m L、 水1 0m L,混勻。3.2.6 三正辛胺-正丁醇溶液(5%) : 量取三正辛胺5m L, 加正丁醇至1 0 0m L, 混勻。3.2.7 飽和硫酸鈉溶液。3.2.8 p H6的水: 水加檸檬酸溶液調(diào)p H到6。3.2.9 p H4的水: 水加檸檬酸溶液調(diào)p H到4。3.3 標(biāo)準(zhǔn)品3.3.1 檸檬黃(C A S:1 9 3 4 - 2 1 - 0) 。3.3.2 新紅(C A S:2 2 0 6 5 8 - 7 6 - 4) 。3.3.3 莧菜紅(C A S:9 1 5 - 6 7 - 3) 。3.3.4 胭脂紅(C A S:2 6 1 1 - 8 2 - 7) 。3.3.5 日落黃(C A S:2 7 8 3 - 9 4 - 0) 。3.3.6 亮藍(lán)(C A S:3 8 4 4 - 4 5 - 9) 。3.3.7 赤蘚紅(C A S:1 6 4 2 3 - 6 8 - 0) 。3.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制3.4.1 合成著色劑標(biāo)準(zhǔn)貯備液(1m g/m L) : 準(zhǔn)確稱取按其純度折算為1 0 0%質(zhì)量的檸檬黃、 日落黃、 莧菜紅、 胭脂紅、 新紅、 赤蘚紅、 亮藍(lán)各0.1g( 精確至0.0 0 01g) , 置1 0 0m L容量瓶中, 加p H6的水到刻度。配成水溶液(1.0 0m g/m L)。3.4.2 合成著色劑標(biāo)準(zhǔn)使用液(5 0g/m L) : 臨用時(shí)將標(biāo)準(zhǔn)貯備液加水稀釋2 0倍, 經(jīng)0.4 5m微孔濾膜過(guò)濾。配成每毫升相當(dāng)5 0.0g的合成著色劑。4 儀器和設(shè)備4.1 高效液相色譜儀, 帶二極管陣列或紫外檢測(cè)器。4.2 天平: 感量為0.0 0 1g和0.0 0 01g。4.3 恒溫水浴鍋。4.4 G 3垂融漏斗。5 分析步驟5.1 試樣制備5.1.1 果汁飲料及果汁、 果味碳酸飲料等: 稱取2 0g 4 0g( 精確至0.0 0 1g) , 放入1 0 0m L燒杯中。含二氧化碳樣品加熱或超聲驅(qū)除二氧化碳。5.1.2 配制酒類: 稱取2 0g 4 0g( 精確至0.0 0 1g) , 放入1 0 0m L燒杯中, 加小碎瓷片數(shù)片, 加熱驅(qū)除乙醇。5.1.3 硬糖、 蜜餞類、 淀粉軟糖等: 稱取5g 1 0g( 精確至0.0 0 1g) 粉碎樣品, 放入1 0 0m L小燒杯中,加水3 0m L,溫?zé)崛芙? 若樣品溶液p H較高, 用檸檬酸溶液調(diào)p H到6左右。5.1.4 巧克力豆及著色糖衣制品: 稱取5g 1 0g( 精確至0.0 0 1g) , 放入1 0 0m L小燒杯中,用水反復(fù)洗滌色素, 到巧克力豆無(wú)色素為止, 合并色素漂洗液為樣品溶液。G B5 0 0 9.3 52 0 1 63 5.2 色素提取5.2.1 聚酰胺吸附法: 樣品溶液加檸檬酸溶液調(diào)p H到6, 加熱至6 0, 將1g聚酰胺粉加少許水調(diào)成粥狀, 倒入樣品溶液中, 攪拌片刻, 以G 3垂融漏斗抽濾, 用6 0 p H為4的水洗滌3次5次, 然后用甲醇-甲酸混合溶液洗滌3次5次 ( 含赤蘚紅的樣品用5.2.2法處理) , 再用水洗至中性, 用乙醇-氨水-水混合溶液解吸3次5次, 直至色素完全解吸, 收集解吸液, 加乙酸中和, 蒸發(fā)至近干, 加水溶解, 定容至5m L。經(jīng)0.4 5m微孔濾膜過(guò)濾, 進(jìn)高效液相色譜儀分析。5.2.2 液-液分配法( 適用于含赤蘚紅的樣品) : 將制備好的樣品溶液放入分液漏斗中, 加2m L鹽酸、 三正辛胺-正丁醇溶液(5%)1 0m L2 0m L, 振搖提取, 分取有機(jī)相, 重復(fù)提取, 直至有機(jī)相無(wú)色,合并有機(jī)相, 用飽和硫酸鈉溶液洗2次, 每次1 0m L, 分取有機(jī)相, 放蒸發(fā)皿中, 水浴加熱濃縮至1 0m L, 轉(zhuǎn)移至分液漏斗中, 加1 0m L正己烷, 混勻, 加氨水溶液提取2次3次, 每次5m L, 合并氨水溶液層( 含水溶性酸性色素) , 用正己烷洗2次, 氨水層加乙酸調(diào)成中性, 水浴加熱蒸發(fā)至近干, 加水定容至5m L。經(jīng)0.4 5m微孔濾膜過(guò)濾, 進(jìn)高效液相色譜儀分析。5.3 儀器參考條件5.3.1 色譜柱:C1 8柱,4.6mm2 5 0mm,5m。5.3.2 進(jìn)樣量:1 0L。5.3.3 柱溫:3 5。5.3.4 二極管陣列檢測(cè)器波長(zhǎng)范圍:4 0 0n m8 0 0n m, 或紫外檢測(cè)器檢測(cè)波長(zhǎng):2 5 4n m。5.3.5 梯度洗脫表見(jiàn)表1。表1 梯度洗脫表時(shí)間m i n流速m L/m i n0.0 2m o l/L乙酸銨溶液%甲醇%01.09 5531.06 53 571.001 0 01 01.001 0 01 0.11.09 552 11.09 555.4 測(cè)定將樣品提取液和合成著色劑標(biāo)準(zhǔn)使用液分別注入高效液相色譜儀, 根據(jù)保留時(shí)間定性, 外標(biāo)峰面積法定量。6 分析結(jié)果的表述試樣中著色劑含量按式(1) 計(jì)算:X=cV10 0 0m10 0 010 0 0(1)G B5 0 0 9.3 52 0 1 64 式中:X 試樣中著色劑的含量, 單位為克每千克(g/k g) ;c 進(jìn)樣液中著色劑的濃度, 單位為微克每毫升(g/m L) ;V 試樣稀釋總體積, 單位為毫升(m L) ;m 試樣質(zhì)量, 單位為克(g) ;10 0 0 換算系數(shù)。計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示, 結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。7 精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的1 0%。8 其他方法檢出限: 檸檬黃、 新紅、 莧菜紅、 胭脂紅、 日落黃均為0.5m g/k g, 亮藍(lán)、 赤蘚紅均為0.2m g/k g( 檢測(cè)波長(zhǎng)2 5 4n m時(shí)亮藍(lán)檢出限為1.0m g/k g, 赤蘚紅檢出限為0.5m g/k g) 。G B5 0 0 9.3 52 0 1 65 附 錄 A著色劑標(biāo)準(zhǔn)色譜圖A.1 著色劑標(biāo)準(zhǔn)色譜圖(:4 0 0n m8 0 0n m最大值圖)著色劑標(biāo)準(zhǔn)色譜圖(:4 0 0n m8 0 0n m最大值圖) 見(jiàn)圖A.1。 說(shuō)明:1 檸檬黃;2 新紅;3 莧菜紅;4 胭