GB5009.169-2016食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中?；撬岬臏y(cè)定.pdf

中 華 人 民 共 和 國(guó) 國(guó) 家 標(biāo) 準(zhǔn)G B5 0 0 9.1 6 92 0 1 6食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中?；撬岬臏y(cè)定2 0 1 6 - 0 8 - 3 1發(fā)布2 0 1 7 - 0 3 - 0 1實(shí)施中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)發(fā) 布G B5 0 0 9.1 6 92 0 1 6 前 言 本標(biāo)準(zhǔn)代替G B/T5 0 0 9.1 6 92 0 0 3 食品中?；撬岬臏y(cè)定 和G B5 4 1 3.2 62 0 1 0 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)嬰幼兒食品和乳品中?；撬岬臏y(cè)定 。本標(biāo)準(zhǔn)與G B/T5 0 0 9.1 6 92 0 0 3相比, 主要變化如下: 標(biāo)準(zhǔn)名稱修改為“ 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中牛磺酸的測(cè)定” ; 增加了O P A柱后衍生高效液相色譜法為第一法; 增加了丹磺酰氯柱前衍生高效液相色譜法為第二法; 刪除了薄層色譜法。G B5 0 0 9.1 6 92 0 1 61 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中?；撬岬臏y(cè)定1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中?；撬釡y(cè)定的方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于嬰幼兒配方食品、 乳粉、 豆粉、 豆?jié){、 含乳飲料、 特殊用途飲料、 風(fēng)味飲料、 固體飲料、 果凍中?；撬岬臏y(cè)定。第一法 鄰苯二甲醛(O P A) 柱后衍生高效液相色譜法2 原理試樣用水溶解, 用偏磷酸沉淀蛋白, 經(jīng)超聲波震蕩提取、 離心、 微孔膜過(guò)濾后, 通過(guò)鈉離子色譜柱分離, 與鄰苯二甲醛(O P A) 衍生反應(yīng), 用熒光檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè), 外標(biāo)法定量。3 試劑和材料除非另有說(shuō)明, 本方法所用試劑均為分析純, 水為G B/T6 6 8 2規(guī)定的一級(jí)水。3.1 試劑3.1.1 偏磷酸。3.1.2 檸檬酸三鈉。3.1.3 苯酚。3.1.4 硝酸。3.1.5 甲醇: 色譜純。3.1.6 硼酸。3.1.7 氫氧化鉀。3.1.8 鄰苯二甲醛(O P A) 。3.1.9 2 -巰基乙醇。3.1.1 0 聚氧乙烯月桂酸醚(B r i j - 3 5) 。3.1.1 1 亞鐵氰化鉀。3.1.1 2 乙酸鋅。3.1.1 3 淀粉酶: 活力1.5U/m g。3.2 試劑配制3.2.1 偏磷酸溶液(3 0g/L)稱取3 0.0g偏磷酸(3.1.1) , 用水溶解并定容至10 0 0m L。G B5 0 0 9.1 6 92 0 1 62 3.2.2 檸檬酸三鈉溶液稱取1 9.6g檸檬酸三鈉(3.1.2) , 加9 5 0m L水溶解, 加入1m L苯酚(3.1.3) , 用硝酸(3.1.4) 調(diào)p H至3.1 03.2 5, 經(jīng)0.4 5m微孔濾膜過(guò)濾。3.2.3 柱后熒光衍生溶液( 鄰苯二甲醛溶液)3.2.3.1 硼酸鉀溶液(0.5m o l/L) : 稱取3 0.9g硼酸(3.1.6) ,2 6.3g氫氧化鉀(3.1.7) , 用水溶解并定容至10 0 0m L。3.2.3.2 鄰苯二甲醛衍生溶液: 稱取0.6 0g鄰苯二甲醛(3.1.8) , 用1 0m L甲醇(3.1.5) 溶解后, 加入0.5m L2 -巰基乙醇(3.1.9) 和0.3 5gB r i j - 3 5(3.1.1 0) , 用0.5 m o l/L硼酸鉀溶液(3.2.3.1) 定容至10 0 0m L, 經(jīng)0.4 5m微孔濾膜過(guò)濾。臨用前現(xiàn)配。3.2.4 沉淀劑3.2.4.1 沉淀劑: 稱取1 5.0g亞鐵氰化鉀(3.1.1 1) , 用水溶解并定容至1 0 0m L。該沉淀劑在室溫下3個(gè)月內(nèi)穩(wěn)定。3.2.4.2 沉淀劑: 稱取3 0.0g乙酸鋅(3.1.1 2) , 用水溶解并定容至1 0 0m L。該沉淀劑在室溫下3個(gè)月內(nèi)保持穩(wěn)定。3.3 標(biāo)準(zhǔn)品純度9 9%,C A S:1 0 7 - 3 5 - 7。3.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制3.4.1 牛磺酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(1m g/m L)準(zhǔn)確稱取0.1 0 00g?；撬針?biāo)準(zhǔn)品(3.3) , 用水溶解并定容至1 0 0m L。3.4.2 ?；撬針?biāo)準(zhǔn)工作液將?；撬針?biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(3.4.1) 用水稀釋制備一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液, 標(biāo)準(zhǔn)系列濃度為:0g/m L、5.0g/m L、1 0.0g/m L、1 5.0g/m L、2 0.0g/m L、2 5.0g/m L, 臨用前現(xiàn)配。4 儀器和設(shè)備4.1 高效液相色譜儀: 帶有熒光檢測(cè)器。4.2 柱后反應(yīng)器。4.3 熒光衍生溶劑輸液泵。4.4 超聲波震蕩器。4.5 p H計(jì): 精度0.0 1。4.6 離心機(jī): 不低于50 0 0r/m i n。4.7 微孔濾膜:0.4 5m。4.8 天平: 感量0.0 0 01g。G B5 0 0 9.1 6 92 0 1 63 5 分析步驟5.1 試樣制備準(zhǔn)確稱取固體試樣1g 5g( 精確至0.0 1g) 于錐形瓶中, 加入4 0左右溫水2 0m L, 搖勻使試樣溶解, 放入超聲波振蕩器中超聲提取1 0m i n。再加5 0m L偏磷酸溶液(3.2.1) , 充分搖勻。放入超聲波振蕩器中超聲提取1 0m i n 1 5m i n, 取出冷卻至室溫后, 移入1 0 0m L容量瓶中, 用水定容至刻度并搖勻; 樣液在50 0 0r/m i n條件下離心1 0m i n, 取上清液經(jīng)0.4 5m微孔膜(4.7) 過(guò)濾, 接取中間濾液以備進(jìn)樣。谷類(lèi)制品, 稱取試樣5g( 精確至0.0 1g) 于錐形瓶中, 加入4 0左右溫水4 0m L, 加入淀粉酶( 酶活力1.5U/m g)0.5g, 混勻后向錐形瓶中充入氮?dú)? 蓋上瓶塞, 置5 06 0培養(yǎng)箱中3 0m i n, 取出冷卻至室溫, 再加5 0m L偏磷酸溶液(3.2.1) , 充分搖勻。放入超聲波振蕩器中超聲提取1 0m i n 1 5m i n,取出冷卻至室溫后, 移入1 0 0m L容量瓶中, 用水定容至刻度并搖勻; 樣液在50 0 0r/m i n條件下離心1 0m i n, 取上清液經(jīng)0.4 5m微孔膜(4.7) 過(guò)濾, 接取中間濾液以備進(jìn)樣。準(zhǔn)確稱取液體試樣( 乳飲料除外)5g3 0g( 精確至0.0 1g) 于錐形瓶中, 加5 0m L偏磷酸溶液(3.2.1) , 充分搖勻。放入超聲波振蕩器中超聲提取1 0m i n1 5m i n, 取出冷卻至室溫后, 移入1 0 0m L容量瓶中, 用水定容至刻度并搖勻; 樣液在50 0 0r/m i n條件下離心1 0m i n, 取上清液經(jīng)0.4 5m微孔膜(4.7) 過(guò)濾, 接取中間濾液以備進(jìn)樣。?；撬岷扛叩娘嬃项?lèi)先用水稀釋到適當(dāng)濃度, 最后一步稀釋時(shí), 加入5 0m L偏磷酸溶液(3.2.1)充分搖勻。放入超聲波振蕩器中超聲提取1 0m i n1 5m i n, 取出冷卻至室溫后, 移入1 0 0m L容量瓶中, 用水定容至刻度并搖勻; 樣液在50 0 0r/m i n條件下離心1 0m i n, 取上清液經(jīng)0.4 5m微孔膜(4.7)過(guò)濾, 接取中間濾液以備進(jìn)樣。果凍類(lèi)試樣, 稱取試樣5g( 精確至0.0 1g) 于錐形瓶中, 加入2 0m L水,5 06 0水浴2 0m i n使之溶解, 冷卻后, 加入5 0m L偏磷酸溶液(3.2.1) 充分搖勻。放入超聲波振蕩器中超聲提取1 0m i n1 5m i n, 取出冷卻至室溫后, 移入1 0 0m L容量瓶中, 用水定容至刻度并搖勻; 樣液在50 0 0r/m i n條件下離心1 0m i n, 取上清液經(jīng)0.4 5m微孔膜(4.7) 過(guò)濾, 接取中間濾液以備進(jìn)樣。乳飲料試樣, 稱取5g 3 0g試樣( 精確至0.0 1g) 于錐形瓶中, 加入4 0左右溫水3 0m L, 充分混勻, 置超聲波振蕩器上超聲提取1 0m i n, 冷卻到室溫。加1.0m L沉淀劑(3.2.4.1) , 渦旋混合,1.0m L沉淀劑(3.2.4.2) , 渦旋混合, 轉(zhuǎn)入1 0 0m L容量瓶中用水定容至刻度, 充分混勻, 樣液于50 0 0r/m i n下離心1 0m i n, 取上清液經(jīng)0.4 5m微孔膜(4.7) 過(guò)濾, 接取中間濾液以備進(jìn)樣。5.2 儀器參考條件5.2.1 色譜柱: 鈉離子氨基酸分析專(zhuān)用柱(2 5c m4.6mm) 或相當(dāng)者。5.2.2 流動(dòng)相: 檸檬酸三鈉溶液(3.2.2) 。5.2.3 流動(dòng)相流速:0.4m L/m i n。5.2.4 熒光衍生溶劑流速:0.3m L/m i n。5.2.5 柱溫:5 5。5.2.6 檢測(cè)波長(zhǎng): 激發(fā)波長(zhǎng):3 3 8n m, 發(fā)射波長(zhǎng):4 2 5n m。5.2.7 進(jìn)樣量:2 0L。5.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液分別注入高效液相色譜儀中, 測(cè)定相應(yīng)的色譜峰高或峰面積, 以標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo), 以響應(yīng)值( 峰面積或峰高) 為縱坐標(biāo), 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。G B5 0 0 9.1 6 92 0 1 64 5.4 試樣溶液的測(cè)定將試樣溶液注入高效液相色譜儀中, 得到色譜峰高或峰面積, 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)液中牛磺酸的濃度。6 分析結(jié)果的表述試樣中牛磺酸含量按式(1) 計(jì)算:A=cVm10 0 01 0 0(1) 式中:A 試樣中?；撬岬暮? 單位為毫克每百克(m g/1 0 0g) ;c 試樣測(cè)定液中?；撬岬臐舛? 單位為微克每毫升(g/m L) ;V 試樣定容體積, 單位為毫升(m L) ;m 試樣質(zhì)量, 單位為克(g) 。計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示, 結(jié)果保留三位有效數(shù)字。7 精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的1 0%。8 其他當(dāng)取樣量為1 0.0 0g時(shí), 方法檢出限為:0.2m g/1 0 0g; 定量限為0.5m g/1 0 0g。第二法 丹磺酰氯柱前衍生法9 原理試樣用水溶解, 用亞鐵氰化鉀和乙酸鋅沉淀蛋白質(zhì)。取上清液用丹磺酰氯衍生反應(yīng), 衍生物經(jīng)C1 8反相色譜柱分離。用紫外檢測(cè)器(2 5 4n m) 或熒光檢測(cè)器( 激發(fā)波長(zhǎng):3 3 0n m; 發(fā)射波長(zhǎng):5 3 0n m) 檢測(cè),外標(biāo)法定量。1 0 試劑和材料除非另有說(shuō)明, 本方法所用試劑均為分析純, 水為G B/T6 6 8 2規(guī)定的一級(jí)水。1 0.1 試劑1 0.1.1 乙腈: 色譜純。1 0.1.2 冰乙酸。1 0.1.3 鹽酸。1 0.1.4 無(wú)水碳酸鈉。1 0.1.5 乙酸鈉。G B5 0 0 9.1 6 92 0 1 65 1 0.1.6 鹽酸甲胺( 甲胺鹽酸鹽) 。1 0.1.7 丹磺酰氯(5 -二甲氨基萘- 1 -磺酰氯) : 色譜純。注:丹磺酰氯對(duì)光和濕敏感不穩(wěn)定, 在干燥器中避光保存。1 0.2 試劑配制1 0.2.1 鹽酸溶液(1m o l/L) : 吸取9m L鹽酸(1 0.1.3) , 用水稀釋并定容到1 0 0m L。1 0.2.2 碳酸鈉緩沖液(p H9.5) (8 0mm o l/L) : 稱取0.4 2 4g無(wú)水碳酸鈉(1 0.1.4) , 加4 0m L水溶解, 用1m o l/L鹽酸溶液(1 0.2.1) 調(diào)p H至9.5, 用水定容至5 0m L。該溶液在室溫下3個(gè)月內(nèi)穩(wěn)定。1 0.2.3 丹磺酰氯溶液(1.5m g/m L) : 稱取0.1 5g丹磺酰氯(1 0.1.7) , 用乙腈(1 0.1.1) 溶解并定容至1 0 0m L。 臨使用前配制。1 0.2.4 鹽酸甲胺溶液(2 0m g/L) : 稱取2.0g鹽酸甲胺(1 0.1.6) , 用水溶解并定容至1 0 0m L。該溶液保存在4下3個(gè)月內(nèi)穩(wěn)定。1 0.2.5 乙酸鈉緩沖液(1 0mm o l/L,p H4.2) : 稱取0.8 2 0g乙酸鈉(1 0.1.5) , 加8 0 0m L水溶解, 用冰乙酸(1 0.1.2) 調(diào)節(jié)p H至4.2, 用水定容至10 0 0m L, 經(jīng)0.4 5m微孔濾膜過(guò)濾。1 0.3 標(biāo)準(zhǔn)品純度9 9%,C A S:1 0 7 - 3 5 - 7。1 0.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制1 0.4.1 牛磺酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(1m g/m L)準(zhǔn)確稱取0.1 0 00g牛磺酸標(biāo)準(zhǔn)品(3.3) , 用水溶解并定容至1 0 0m L。1 0.4.2 ?；撬針?biāo)準(zhǔn)工作液( 紫外檢測(cè)器用)將牛磺酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(1 0.4.1) 用水稀釋制備一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液, 標(biāo)準(zhǔn)系列濃度為:0g/m L、5.0g/m L、1 0.0g/m L、1 5.0g/m L、2 0.0g/m L、2 5.0g/m L, 臨用前現(xiàn)配。1 0.4.3 ?；撬針?biāo)準(zhǔn)工作液( 熒光檢測(cè)器用)將?；撬針?biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(1 0.4.1) 用水稀釋制備一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液, 標(biāo)準(zhǔn)系列濃度為:0g/m L、0.5g/m L、2.0g/m L、5.0g/m L、1 0.0g/m L、2 0.0g/m L, 臨用前現(xiàn)配。1 1 儀器和設(shè)備1 1.1 高效液相色譜儀: 帶有熒光檢測(cè)器或紫外檢測(cè)器或二極管陣列檢測(cè)器。1 1.2 渦旋混合器。1 1.3 超聲波震蕩器。1 1.4 p H計(jì): 精度0.0 1。1 1.5 離心機(jī): 不低于50 0 0r/m i n。1 1.6 微孔濾膜:0.4 5m。1 1.7 天平: 感量0.0 0 01g、0.0 0 1g。G B5 0 0 9.1 6 92 0 1 66 1 2 分析步驟1 2.1 試樣制備1 2.1.1 試液提取準(zhǔn)確稱取固體試樣1g 5g( 精確至0.0 1g) 于錐形瓶中, 加入4 0左右溫水4 0m L, 搖勻使試樣溶解, 放入超聲波振蕩器中超聲提取1 0m i n。冷卻到室溫, 加1.0m L沉淀劑(3.2.4.1) , 渦旋混合,1.0m L沉淀劑(3.2.4.2) , 渦旋混合, 轉(zhuǎn)入1 0 0m L容量瓶中, 用水定容至刻度, 充分混勻。樣液于50 0 0r/m i n下離心1 0m i n, 取上清液備用。上清液在4暗處保存放置2 4h內(nèi)穩(wěn)定。谷類(lèi)制品, 稱取試樣5g( 精確至0.0 1g) 于錐形瓶中, 加入4 0左右溫水4 0m L, 加入淀粉酶( 酶活力1.5U/m g)0.5g, 混勻后向三角瓶中充入氮?dú)? 蓋上瓶塞, 置5 06 0培養(yǎng)箱中3 0m i n, 取出冷卻至室溫。放入超聲波振蕩器中超聲提取1 0m i n。冷卻到室溫, 加1.0m L沉淀劑(3.2.4.1) , 渦旋混合,1.0m L沉淀劑(3.2.4.2) , 渦旋混合, 轉(zhuǎn)入1 0 0m L容量瓶中, 用水定容至刻度, 充分混勻。樣液于50 0 0r/m i n下離心1 0m i n, 取上清液備用。上清液在4暗處保存放置2 4h內(nèi)穩(wěn)定。準(zhǔn)確稱取液體試樣( 乳飲料試樣除外)5g 3 0g( 精確至0.0 1g) 于錐形瓶中, 加2 0m L水, 充分搖勻。加1.0m L沉淀劑(3.2.4.1) , 渦旋混合,1.0m L沉淀劑(3.2.4.2) , 渦旋混合, 轉(zhuǎn)入1 0 0m L容量瓶中, 用水定容至刻度, 充分混勻。樣液于50 0 0r/m i n下離心1 0m i n, 取上清液備用。上清液在4暗處保存放置2 4h內(nèi)穩(wěn)定。?；撬岷扛叩娘嬃项?lèi)先用水稀釋到適當(dāng)濃度, 最后一步稀釋時(shí), 于錐形瓶中加1.0m L沉淀劑(3.2.4.1) , 渦旋混合,1.0m L沉淀劑(3.2.4.2) , 渦旋混合, 之后轉(zhuǎn)入1 0 0m L容量瓶中, 用水定容至刻度, 充分混勻, 樣液于50 0 0r/m i n下離心1 0m i n, 取上清液備用。上清液在4暗處保存放置2 4h內(nèi)穩(wěn)定。果凍類(lèi)試樣, 稱取試樣5g( 精確至0.0 1g) 于錐形瓶中, 加入2 0m L水,5 06 0水浴2 0m i n使之溶解, 冷卻后, 加入5 0m L偏磷酸溶液(3.2.1) 充分搖勻, 放入超聲波振蕩器中超聲提取1 0m i n1 5m i n, 取出冷卻至室溫后, 移入1 0 0m L容量瓶中, 用水定容至刻度并搖勻; 樣液在50 0 0r/m i n條件下離心1 0m i n, 取上清液備用。上清液在4暗處保存放置2 4h內(nèi)穩(wěn)定。乳飲料試樣, 稱取5g 4 0g試樣( 精確至0.0 1g) 于錐形瓶中, 加入4 0溫水2 0m L, 充分混勻, 置超聲波振蕩器上超聲提取1 0m i n, 冷卻到室溫。加1.0m L沉淀劑(3.2.4.1) , 渦旋混合,1.0m L沉淀劑(3.2.4.2) , 渦旋混合, 轉(zhuǎn)入1 0 0m L容量瓶中, 用水定容至刻度, 充分混勻, 樣液于50 0 0r/m i n下離心1 0m i n, 取上清液備用。上清液在4暗處保存放置2 4h內(nèi)穩(wěn)定。1 2.1.2 試液衍生化準(zhǔn)確吸取1.0 0m L1 2.1.1所得上清液到1 0m L具塞玻璃試管中, 加入1.0 0m L碳酸鈉緩沖液(1 0.2.2) ,1.0 0m L丹磺酰氯溶液(1 0.2.3) , 充分混合, 室溫避光衍生反應(yīng)2h(1h后需搖晃1次) , 加入0.1 0m L鹽酸甲胺溶液(1 0.2.4) 渦旋混合, 以終止反應(yīng), 避光靜置至沉淀完全。取上清液經(jīng)0.4 5m微孔濾膜(1 1.6) 過(guò)濾, 取濾液備用。衍生物在4以下可避光保存4 8h。另取1.0 0m L標(biāo)準(zhǔn)工作液(1 0.4.2) , 與試液同步進(jìn)行衍生。1 2.2 儀器參考條件1 2.2.1 色譜柱:C1 8反相色譜柱(2 5 0mm4.6mm,5m) 或相當(dāng)者。1 2.2.2 流動(dòng)相: 乙酸鈉緩沖液(1 0.2.5)+乙腈(1 0.1.1)=7 0+3 0( 體積比) 。1 2.2.3 流動(dòng)相流速:1.0m L/m i n。G B5 0 0 9.1 6 92 0 1 67 1 2.2.4 柱溫: 室溫。1 2.2.5 檢測(cè)波長(zhǎng): 熒光檢測(cè)器: 激發(fā)波長(zhǎng):3 3 0n m, 發(fā)射波長(zhǎng):5 3 0n m。紫外檢測(cè)器或二極管陣列檢測(cè)器:2 5 4n m。1 2.2.6 進(jìn)樣量:2 0L。1 2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液的衍生液分別注入高效液相色譜儀中, 測(cè)定相應(yīng)的色譜峰高或峰面積, 以標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐