DB37T3234-2018動(dòng)物源食品中泰萬菌素殘留量的測定液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜法.doc

ICS67.120B45DB37山東省地方標(biāo)準(zhǔn)DB 37/T 32342018動(dòng)物源食品中泰萬菌素殘留量的測定 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法Determination of tylvalosin residue in animal source food by high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry2018 - 05 - 17發(fā)布2018 - 06 - 17實(shí)施山東省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布DB37/T 32342018前言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T 1.1-2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由山東省畜牧獸醫(yī)局提出。本標(biāo)準(zhǔn)由山東省畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：青島農(nóng)業(yè)大學(xué)。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：郝智慧、魏秀麗、曲少奇、唐啟和、翟冰、孫京新、徐坤、袁玉清、黃亭亭。5動(dòng)物源食品中泰萬菌素殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了動(dòng)物源食品中泰萬菌素藥物殘留量的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于豬肉、牛肉、雞肉、豬肝等動(dòng)物源食品中泰萬菌素藥物殘留量的測定。本標(biāo)準(zhǔn)檢測限為0.4 g/kg，定量限為1.0 g/kg。2 規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3 原理采用乙腈提取試樣中殘留的泰萬菌素，提取液采用氮?dú)獯蹈芍匦氯芙夂螅?jīng)混合型陰離子固相萃取小柱凈化，濃縮，用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測，外標(biāo)法定量。4 試劑或材料除非另有規(guī)定，僅使用分析純?cè)噭?，水符合GB/T 6682一級(jí)水的規(guī)定。4.1 乙腈（CH3CN）：色譜純。4.2 甲醇（CH3OH）：色譜純。4.3 甲酸（HCOOH）：色譜純。4.4 氨水（NH3H2O）。4.5 異丙醇（C3H8O）。4.6 2 %甲酸水溶液：準(zhǔn)確取甲酸（4.3）2.0 mL，加水稀釋并定容至100 mL。4.7 10 %氨化甲醇異丙醇溶液：10 %氨化甲醇+異丙醇=1+1，準(zhǔn)確取濃氨水（4.4）10 mL，加甲醇（4.2）90 mL稀釋至100 mL，再加入100 mL異丙醇（4.5）混勻即得。4.8 0.1 %甲酸乙腈溶液：0.1 %甲酸+乙腈=7+3，準(zhǔn)確量取0.1%甲酸水溶液（4.9）70 mL，加甲醇（4.2）30 mL，用水稀釋至100 mL。4.9 0.1 %甲酸水溶液：準(zhǔn)確移取甲酸（4.3）0.5 mL，加水稀釋并定容至500 mL，過0.22 m水系微孔濾膜脫氣備用?，F(xiàn)用現(xiàn)配。4.10 標(biāo)準(zhǔn)品：酒石酸乙酰異戊酰泰樂菌素（Acetylisovaleryltylosin Tartrate），CAS編號(hào)：63428-13-7。泰萬菌素（Tylvalosin）又稱為乙酰異戊酰泰樂菌素。4.11 泰萬菌素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取酒石酸乙酰異戊酰泰樂菌素標(biāo)準(zhǔn)品約11.5 mg（精確到0.01 mg）（4.10），加乙腈（4.1）至100 mL，配制成100.0 g/mL的溶液，作為外標(biāo)儲(chǔ)備液，-20 冰箱保存。4.12 泰萬菌素標(biāo)準(zhǔn)工作液：準(zhǔn)確量取一定體積的泰萬菌素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（4.11），用乙腈稀釋成濃度為1 g/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液?，F(xiàn)配現(xiàn)用。4.13 混合型陰離子固相萃取小柱： 150 mg/6 mL,，30 m。4.14 聚丙烯離心管：50 mL，15 ml具塞，帶刻度。4.15 微孔濾膜：0.22 m有機(jī)相過濾膜。5 儀器設(shè)備5.1 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源（ESI）。5.2 天平：感量0.01 g。5.3 分析天平：感量0.00001 g。5.4 均質(zhì)器（20000 r/min）。5.5 氮?dú)獯蹈蓛x。5.6 真空泵及固相萃取裝置。5.7 色譜柱：C18（4.6 mm150 mm, 5 m，或相當(dāng)者）。5.8 高速冷凍離心機(jī)（10000 r/min）。5.9 渦旋振蕩器。6 測定步驟6.1 試料的制備試料的制備包括：a) 取均質(zhì)后的供試樣品，作為供試試樣；b) 取均質(zhì)后的空白樣品，作為空白試樣；c) 取均質(zhì)后的空白樣品，添加適宜濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，作為空白添加試樣。6.2 試料的保存-18 以下保存。6.3 提取a) 稱取試樣2 g（精確至0.01 g），置于50 mL聚丙烯離心管中，加入10 mL乙腈(4.1)，均質(zhì)提取1 min后，5000 r/min離心5 min，取上清液至另一干凈的50 mL離心管中；b) 殘?jiān)屑尤?0 mL乙腈重復(fù)提取一下，離心后合并上清液；c) 將提取液置于50 水浴中，吹氮濃縮至干；d) 在殘?jiān)屑尤? mL甲醇(4.2)，渦旋振蕩30 s，待凈化。6.4 凈化a) 取混合型陰離子固相萃取小柱(4.3)，依次使用3 mL甲醇、3 mL水活化，保持柱體濕潤；b) 將待凈化溶液轉(zhuǎn)移至已活化好的混合型陰離子固相萃取小柱上；c) 依次用3 mL 2 %甲酸水溶液(4.6)、3 mL甲醇清洗，用真空泵抽干小柱10 s；d) 用10 %氨化甲醇異丙醇溶液6 ml (4.7)洗脫入15 mL離心管，將提取液置于50 水浴中；e) 吹氮濃縮至干，加入1 mL 0.1 %甲酸乙腈溶液（4.8），渦旋振蕩30 s，過有機(jī)微孔濾膜后，液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。6.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備準(zhǔn)確量取適量的泰萬菌素標(biāo)準(zhǔn)工作液，用0.1 %甲酸乙腈溶液（4.8）稀釋成濃度分別為0.5 g/L、1 g/L、2 g/L、5 g/L、10 g/L的對(duì)照溶液，供液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀分析。6.6 測定6.6.1 液相色譜參考條件6.6.1.1 色譜柱：C18色譜柱，4.6 mm150 mm, 5 m, 或相當(dāng)者。6.6.1.2 流動(dòng)相A：0.1 %甲酸水溶液；流動(dòng)相B：乙腈；流速：0.3 mL/min。6.6.1.3 進(jìn)樣量：5 L。6.6.1.4 柱溫：35 。6.6.1.5 流動(dòng)相及梯度洗脫條件見表1。表1 流動(dòng)相及梯度洗脫條件時(shí)間（min）0.1%甲酸水溶液（%）乙腈（%）0.070300.570304.030704.570307.070306.6.2 質(zhì)譜參考條件 6.6.2.1 電離模式：電噴霧正離子（ESI+）a) 毛細(xì)管電壓：3 v；離子源溫度：110 ；b) 脫溶劑溫度：320 ；c) 脫溶劑氮?dú)饬魉伲?50 L/h；d) 監(jiān)測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）。6.6.2.2 泰萬菌素的特征離子對(duì)、碰撞能量和錐孔電壓見表2。表2 泰萬菌素的特征離子對(duì)、碰撞能量和錐孔電壓序號(hào)化合物母離子子離子錐孔電壓/V碰撞能量/eV1泰萬菌素1042.5109.630456.6.3 定性測定6.6.3.1 通過試樣色譜圖的保留時(shí)間與相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間、各色譜峰的特征離子與相應(yīng)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液各色譜峰的特征離子相對(duì)照定性。6.6.3.2 試樣與對(duì)照品保留時(shí)間的相對(duì)偏差在2.5 %之內(nèi)；試樣特征離子的相對(duì)豐度與濃度相當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)溶液的相對(duì)豐度一致，相對(duì)豐度偏差不超過表3的規(guī)定，則可判斷試樣中存在泰萬菌素殘留。表3 定性測定時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差相對(duì)離子豐度,%5020 至 5010 至 2010允許的相對(duì)偏差,%202530506.6.4 定量測定6.6.4.1 對(duì)基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)樣，以峰面積為縱坐標(biāo)、基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，用標(biāo)準(zhǔn)工作曲線對(duì)樣品進(jìn)行定量，樣品溶液中泰萬菌素的響應(yīng)值應(yīng)在儀器測定的線性范圍內(nèi)。6.6.4.2 泰萬菌素標(biāo)準(zhǔn)溶液的多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）色譜圖參見附錄A中的圖A.1。7 結(jié)果計(jì)算供試試樣中泰萬菌素殘留量X，單位為ng/g，按式(1)計(jì)算：(1)式中：A1試樣溶液中泰萬菌素峰面積；A2標(biāo)準(zhǔn)溶液中泰萬菌素峰面積；C標(biāo)準(zhǔn)溶液中泰萬菌素濃度，單位為納克每毫升(ng/mL)；V溶解殘?jiān)某跏剂鲃?dòng)相體積，單位為毫升(mL)；m試樣質(zhì)量，單位為克(g)。注1： 測定結(jié)果用平行測定的算術(shù)平均值表示，保留三位有效數(shù)字。8 檢測方法的靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度8.1 靈敏度本方法泰萬菌素檢出限為