DB33T 615-2006 水產(chǎn)品中甲氧芐氨嘧啶殘留量的測定 液相色譜法.doc

DB DB33浙江省質量技術監(jiān)督局 發(fā)布2006-12-27實施2006-11-27發(fā)布水產(chǎn)品中甲氧芐氨嘧啶殘留量的測定液相色譜法Determination of trimethoprim residues in aquatic product-Liquid chromatographyDB33/T 6152006浙江省地方標準ICS67.050B 501DB33/T 6152006前 言本標準附錄A為資料性附錄。本標準由浙江省海洋與漁業(yè)局提出并歸口。本標準起草單位：農(nóng)業(yè)部漁業(yè)環(huán)境及水產(chǎn)品質檢中心（舟山）。本標準主要起草人：陳雪昌、鄭斌、劉士忠。1水產(chǎn)品中甲氧芐氨嘧啶殘留量的測定 液相色譜法1 范圍本標準規(guī)定了水產(chǎn)品中甲氧芐氨嘧啶殘留量的液相色譜測定方法。 本標準適用于水產(chǎn)品可食部分中甲氧芐氨嘧啶殘留量的測定。2 規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內容）或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據(jù)本標準達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標準。GB/T 6682 分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法3 原理樣品用堿性二氯甲烷提取，正己烷脫脂， 固相萃取小柱凈化，反相色譜柱分離，紫外檢測器檢測，外標法定量。4 試劑與材料實驗用水應符合GB/T 6682 中一級水標準。4.1 甲氧芐氨嘧啶標準品：純度98%。4.2 正己烷：分析純。4.3 二氯甲烷：分析純。4.4 三乙胺：分析純。4.5 堿性二氯甲烷：每500mL二氯甲烷加三乙胺10mL。4.6 甲醇：色譜純。4.7乙酸：優(yōu)級純。4.8 5%乙酸溶液。4.9 1%乙酸溶液。4.10 氨水：分析純。4.11 氨水甲醇溶液（5+95，V/V）。4.10無水硫酸鈉：分析純，650灼燒4h，冷卻后貯存于密封容器中備用。4.11 陽離子固相萃取小柱(60mg/3mL)。4.12甲氧芐氨嘧啶標準儲備液：100mg/L，準確稱取10mg的標準品于100mL 容量瓶中, 用1%乙酸溶液溶解并定容，配成標準儲備液，濃度為100 mg/ L 。 避光4冷藏保存，保存期為三個月。4.13甲氧芐氨嘧啶標準工作液：用流動相稀釋成各質量濃度的標準溶液0.10mg/L、0.50mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L、5.00mg/L，現(xiàn)配現(xiàn)用。5 儀器與設備5.1 液相色譜儀：配紫外檢測器。5.2 組織搗碎機。5.3 均質機。5.4 超聲波儀。5.5 離心機：4000rpm。5.6 旋轉蒸發(fā)器。5.7 固相萃取裝置。5.8 旋渦混勻器。5.9 天平，感量0.01g和0.0001g。6 色譜條件6.1 色譜柱：ODS C-18，5m，250mm4.6mm或同類型號色譜柱。6.2 柱溫：35。6.3 流動相：甲醇+0.5%乙酸溶液=25+75（V/V）。6.4 流速：0.8mL/min。6.5 進樣量：20L。6.6檢測器波長：275nm。7 分析步驟7.1 試樣制備魚去鱗、去皮沿背脊取肌肉；蝦去頭、去殼、去附肢，取可食部分；蟹、中華鱉等取可食部分；樣品經(jīng)組織搗碎機搗碎，放置-18以下冷凍貯存?zhèn)溆谩?.2 提取將樣品自然解凍，稱取樣品10g（稱準至0.01g），置于100mL聚丙烯離心管，加入無水硫酸鈉約10g，加入堿性二氯甲烷20mL，超聲波輔助提取15min（每5min取出振搖幾下），取出均質（10000r/min）2min，4000r/min離心5min，二氯甲烷層經(jīng)過無水硫酸鈉濾入100mL梨形瓶，加入20mL二氯甲烷于離心管中，重復提取1次，合并二氯甲烷于100mL梨形瓶。7.3 凈化將提取液于30減壓旋轉蒸發(fā)濃縮至近干。3mL乙酸溶液（4.8）溶解殘渣，移入10mL離心試管，加3mL正己烷渦旋振蕩萃取脫脂，重復2次，下層通過（預先以6mL甲醇活化，6mL乙酸溶液（4.8）平衡）MCX固相萃取柱后上樣。依次以6mL乙酸溶液（4.8），6mL甲醇洗滌。最后以15mL氨水甲醇溶液（4.11）洗脫。洗脫液經(jīng)40減壓旋轉蒸發(fā)濃縮至近干，以1.0mL乙酸溶液（4.9）溶解殘渣，流動相定容至2.0mL，經(jīng)0.45m微孔濾膜過濾，濾液備用。7.4 工作曲線取甲氧芐氨嘧啶標準儲備液，用流動相稀釋成濃度為0.10mg/L、0.50mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L、5.00mg/L的標準工作液。分別取20L進樣，以峰面積為縱坐標，以標準樣品中甲氧芐氨嘧啶含量為橫坐標，繪制工作曲線。7.5 色譜測定取試樣濾液20L進樣，記錄峰面積，從工作曲線查得樣品提取液中甲氧芐氨嘧啶的含量。8 計算樣品中甲氧芐氨嘧啶的含量按下式計算。式中：X試樣中甲氧芐氨嘧啶的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；C試樣溶液中甲氧芐氨嘧啶的含量，單位為毫克每升（mg/L）；m試樣質量，單位為克（g）；V試樣溶液體積，單位為毫升（mL）。9 方法準確度和精密度本方法回收率為74.4%-97.0%。本方法的相對標準偏差為10%。10 方法檢出限本