DB3205T 201-2011 荷花種質(zhì)資源保存及提純復(fù)壯技術(shù)規(guī)范.doc

Q/320500 JM 03-2001江蘇省蘇州質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局 發(fā)布20120301實施20120301發(fā)布荷花種質(zhì)資源保存及提純復(fù)壯技術(shù)規(guī)范DB3205/T 201-2011DB3205蘇州市農(nóng)業(yè)地方標(biāo)準(zhǔn)B 051DB3205/T 201-2011前 言荷花因兼具觀賞、凈化水環(huán)境等功能，在休閑農(nóng)業(yè)、綠化美化、環(huán)境凈化等方面具有廣闊應(yīng)用前景。荷花主要以種藕進(jìn)行無性繁殖，種質(zhì)容易退化。目前蘇州市各類生態(tài)園及濕地系統(tǒng)中荷花得到廣泛應(yīng)用，但普遍存在品種雜亂、種性退化等問題，荷花種質(zhì)資源保存與提純復(fù)壯尚缺少技術(shù)規(guī)范。為規(guī)范荷花種質(zhì)資源保存與提純復(fù)壯技術(shù)，防止荷花種質(zhì)資源流失與品種退化，推動標(biāo)準(zhǔn)化荷花種質(zhì)保存與提純復(fù)壯技術(shù)應(yīng)用，根據(jù)中華人民共和國標(biāo)準(zhǔn)法，特制訂本標(biāo)準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)編寫按GB/T 1.1-2009標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫。本標(biāo)準(zhǔn)由蘇州市農(nóng)業(yè)委員會提出。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：蘇州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院、蘇州市相城區(qū)荷花濕地公園開發(fā)有限公司。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：李靜會、徐正庭、李欣、姜紅衛(wèi)、徐君、楊雪星。I荷花種質(zhì)資源保存及提純復(fù)壯技術(shù)規(guī)范1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了荷花種質(zhì)資源保存及提純復(fù)壯的術(shù)語和定義、種質(zhì)資源種植保存技術(shù)、荷花種質(zhì)資源試管苗保存技術(shù)、荷花種質(zhì)資源分藕提純復(fù)壯技術(shù)、荷花種質(zhì)資源組培提純復(fù)壯技術(shù)。本標(biāo)準(zhǔn)適用于荷花種質(zhì)資源保存及提純復(fù)壯。2 規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB 4285 農(nóng)藥安全使用標(biāo)準(zhǔn)GB/T 8321.(19) 農(nóng)藥合理使用準(zhǔn)則(所有部分)NY/T 837-2004 蓮藕栽培技術(shù)規(guī)程3 術(shù)語和定義下列術(shù)語的定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。3.1荷花 本標(biāo)準(zhǔn)中荷花指觀賞花的蓮藕品種。3.2荷花種質(zhì)資源攜帶不同遺傳物質(zhì)的蓮植物的統(tǒng)稱，包括野生種、地方品種、選育品種、品系、特殊遺傳材料。4 種質(zhì)資源種植保存技術(shù)4.1 種質(zhì)資源圃建設(shè)4.1.1 環(huán)境條件臨近水源，遠(yuǎn)離污染源，附近無高大樹木、建筑物等，有充足的陽光。4.1.2 資源圃規(guī)格資源圃由若干個品種池組成，一份資源種植一個池，池的數(shù)量由需要保存的種質(zhì)資源數(shù)量決定。單個品種池長、寬各為1.2m3m，面積為2m24m2，各品種池間完全隔斷，間隔在0.8m以上。為防止漏水和便于操作，資源圃品種池一般采用半地下式，2/3在地下，1/3在地上。資源圃主體一般為混凝土或磚砌結(jié)構(gòu)，亦可根據(jù)立地條件和投入規(guī)模選用其他建池材料。4.1.3 池底池底土壤先拌和生石灰，分層用機(jī)械整平壓實，再鋪10cm厚C15混凝土抹平，切割好伸縮縫。簡易條件也可在機(jī)械密實后用5cm12cm24cm規(guī)格實心磚平鋪，再抹1.5cm厚水泥砂漿。4.1.4 池埂池埂宜用空心磚砌成。共用進(jìn)水口的品種池池埂高為25cm30cm，灌溉時水能越過池埂流通。不共用進(jìn)水口的品種池埂高為40cm50cm。品種池之間的池埂寬度0.8m以上，周圍排水溝池埂寬為20cm30cm。池埂表面抹1.5cm厚水泥砂漿。4.1.5 灌水溝和排水溝灌水溝與排水溝分開，一般灌水溝在中間，排水溝在四周，保證每個品種池水能灌溉進(jìn)去，遇到大雨時水能越過池埂進(jìn)入排水溝排出。進(jìn)水也可用管道連通到每個品種池。進(jìn)水溝或孔的底邊高于品種池底面10cm15cm，排水溝略低于品種池土層高度。4.1.6 土壤品種池中土層厚度在15cm20cm，土質(zhì)疏松肥沃，土壤有機(jī)質(zhì)含量較高，ph值為5.57.5的水稻土、菜園土均適宜種植，品種池中土壤3年須更換一次。4.2 資源圃田間栽培管理技術(shù)4.2.1 土壤準(zhǔn)備前一年冬前將土壤翻耕，拌好有機(jī)肥，拌腐熟糞肥45000kg/hm2或商品有機(jī)肥4500kg/hm2，冬季充分凍融，早春土壤過篩后入池。4.2.2 上水宜于種藕定植前3d5d上水充分浸泡土壤，耙平泥面。4.2.3 基肥施用在冬前有機(jī)肥充足的情況下基肥可以不施，有機(jī)肥不足可以適量施用基肥，宜于定植前15d施少量15:15:15復(fù)合肥，用量0.8 kg/m31.0 kg/m3土壤。4.2.4 種藕選擇種藕必須是藕身健壯、無病蟲害，具有頂芽、側(cè)芽和葉芽的完整藕，并嚴(yán)格區(qū)分品種。4.2.5 種藕貯運應(yīng)符合NY/T 837-2004規(guī)定。4.2.6 定植4.2.6.1 定植時間應(yīng)在日平均氣溫達(dá)15以上時開始定植。蘇州地區(qū)在3月下旬至4月中旬定植。4.2.6.2 定植方法種質(zhì)資源圃內(nèi)每池按1支/m2的密度種植。種藕以2025角斜插入土，藕頭入泥5cm15cm，藕梢翹露泥面。種藕種植時保持池面基本無水。4.2.7 資源圃田間管理4.2.7.1 追肥于定植后每隔25d30d追肥，第1次在1片2片立葉長出時，第2次在封行前，第3次在結(jié)藕前。每次施腐熟糞肥22500kg/hm2或尿素150kg/hm2225kg/hm2，15:15:15復(fù)合肥300kg/hm2375kg/hm2。施肥前將水位降低，追肥時氮磷鉀配合使用。施肥后應(yīng)及時澆水沖葉，防止灼傷葉片。4.2.7.2 水層管理水層管理遵循前期淺、中期深、后期又淺的原則。不同時期的適宜水深分別為：定植期至萌芽階段3cm5cm；生長中期開始抽生立葉至封行前5cm10cm，封行期至結(jié)藕期10cm25cm；結(jié)藕期至枯荷期5cm10cm；蓮藕留地越冬期間3cm5cm。4.3 病蟲害及雜草防治4.3.1 主要病蟲草害危害荷花的主要病害有蓮藕腐敗病、褐斑??；蟲害有斜紋夜蛾、蓮縊管蚜、蓮潛葉搖蚊、稻食根葉甲、克氏原螯蝦及椎實螺、福壽螺；主要草害為雜草。4.3.2 防治原則堅持“預(yù)防為主，綜合防治”的植保方針，優(yōu)先采用“農(nóng)業(yè)防治、物理防治和生物防治”措施，配套使用化學(xué)防治措施的原則。嚴(yán)禁使用高毒高殘留農(nóng)藥。農(nóng)藥使用應(yīng)符合GB 4285和GB/T 8321.(19)規(guī)定。4.3.3 防治方法蓮藕腐敗病 應(yīng)選用抗病品種、栽植無病種藕，盡量減少人為造成地下莖傷口。于種植前3d5d，每公頃施生石灰750kg；或種藕用50%多菌靈可濕性粉劑800倍液或70%甲基硫菌靈可濕性粉劑800倍液浸泡1min。蓮藕褐斑病 一般每公頃用50%多菌靈可濕性粉劑1:1000倍液，于發(fā)病初期噴霧1次，或75%百菌清可濕性粉劑1:600倍液，于發(fā)病初期噴霧1次；病情嚴(yán)重時交替用藥。斜紋夜蛾 可用黑光燈或頻振式殺蟲燈誘殺成蟲，或用糖6份、醋3份、白酒1份、水10份及90%敵百蟲1份（重量比）調(diào)勻配成糖醋液誘殺成蟲；人工摘除卵塊或撲殺幼蟲；分散后的幼蟲每公頃用國產(chǎn)Bt粉劑500800倍液噴霧防治，或5%定蟲?。ㄒ痔＃?500倍液噴霧1次；病情嚴(yán)重時交替用藥。蓮縊管蚜 清除水生雜草，特別是水生寄生植物。宜用黃板誘殺有翅成蟲，或50%抗蚜威可濕性粉劑1:1200倍液噴霧。蓮潛葉搖蚊 如用90%晶體敵百蟲8001000倍液噴殺，前期摘去受害較重的葉片，隔1周噴1次，連續(xù)噴3次。稻食根葉甲 冬季排干積水，促使越冬幼蟲死亡，清除野生寄主，減少成蟲取食及產(chǎn)卵場所。用茶籽餅粉300kg/hm2耕入田中消滅幼蟲?？耸显r（龍蝦） 在定植前7d每公頃用2.5%溴氰菊酯乳油3000倍液均勻澆潑1次，水深保持3cm。椎實螺、福壽螺 于定植前7d，每公頃可施用滅螺魚安（20硫酸煙酰苯胺粉）7.5kg或2%三苯醇錫粒劑15kg20kg撒于田間，水深保持3cm。雜草 定植前，結(jié)合耙地清除雜草；定植后至封行前，人工拔除雜草，清理綠萍與苔蘚。4.4 采收蓮子資源圃品種池中荷花結(jié)的蓮子要及時套袋采收（或在成熟前套袋），隨熟隨采，防止散落到池中，或者在成熟前將蓮蓬剪除，防止品種混雜。4.5 種藕出圃種藕出圃時間為種藕生長休眠期，一般在二月中下旬。起挖后將藕鞭剪掉，留主藕、子藕和孫藕。 對種藕進(jìn)行分品種、分類、分級貯藏：一般將種藕直接假植在水池中，有條件可將種藕放入溫度為58、濕度為9095的冷庫中儲存。5 荷花種質(zhì)資源試管苗保存技術(shù)5.1 外植體取材取材時間：在蓮藕萌發(fā)期（2月4月）或結(jié)藕期（10月12月）取材；取材要求：選取符合原品種特性、無明顯病蟲害癥狀的大田植株，挖出蓮藕莖段，切取2cm3cm長的飽滿頂芽。5.2 外植體表面消毒切取蓮藕的頂芽，在自來水下洗凈，并用洗衣粉溶液浸泡15min，在流水狀態(tài)下沖洗1 h以上，轉(zhuǎn)入無菌操作室。在無菌條件下，外植體先用75的乙醇浸泡30s，再用0.1升汞浸泡5min，無菌水沖洗 5次，每次30s以上，將材料置于無菌燒杯中備用。5.3 莖尖剝?nèi)⒔馄淑R置于超凈工作臺上，用75%酒精擦拭2遍，打開超凈工作臺風(fēng)機(jī)與紫外燈，消毒2h。將表面消毒的材料置于滅過菌的濾紙上，用消毒的鑷子和手術(shù)刀在解剖鏡下剝離外層幼葉，切取0.3mm0.5mm頂端帶2個葉原基的莖尖組織。5.4 分化培養(yǎng)將剝?nèi)〉那o尖組織接種在經(jīng)高溫消毒（121，15min）過的分化培養(yǎng)基（MS+0.05 mg/L0.5 mg/L BA，3蔗糖，0.7%瓊脂粉）上，封口后置于252，光照1500lux2000lux，每天光照12h的條件下培養(yǎng)，經(jīng)過1個月2個月分化培養(yǎng)可獲得試管苗。5.5 繼代培養(yǎng)保存 在超凈工作臺上操作，將分化試管苗的叢芽切割，分為單芽或帶1個腋芽的莖段，在無菌狀態(tài)下轉(zhuǎn)入高溫消毒過的繼代培養(yǎng)基（MS+0.3mg/L0.5mg/L BA，3蔗糖），置于202，光照1500lux2000lux，每天光照12h的條件下培養(yǎng)，繼代周期為90d，待新芽形成后，重復(fù)上述步驟。5.6 生根培養(yǎng)將試管苗切成帶2片3片葉或1個2個腋芽的莖段接入生根培養(yǎng)基（MS+0.05mg/L0.1mg/L NAA + 1.0mg/L2.0mg/L BA，3%蔗糖）中，培養(yǎng)20d左右可以長出較多的根。5.7 煉苗移栽將已長根且長勢正常的試管苗拿到室外，閉瓶煉苗5d7d后再敞瓶煉苗2d。將試管苗取出洗凈根部附著的培養(yǎng)基，栽入2cm3cm深的淺水滅菌基質(zhì)（70%泥土+30%泥炭土），覆蓋有透氣孔的塑料薄膜，在溫度2025、遮蔭條件下培養(yǎng)7d10d，揭膜。噴灑適當(dāng)營養(yǎng)液，經(jīng)3周培養(yǎng)可移栽至小池或缸中種植，一般于5月7月移栽，前期晴天注意遮蔭、雨天注意防止雨水沖刷。大田移栽成活后，仔細(xì)對照該品種的品種特性，辨別株型、長勢、花色、花型、花期、著花密度、葉色等特征，通過品種鑒定的種苗所結(jié)的種藕，翌年春天可收獲作為該品種的原種種藕。 6 荷花種質(zhì)資源分藕提純復(fù)壯技術(shù)6.1 方法采用改良混合選擇方法，即單株選擇、分系比較、二圃制（株系圃、原種圃)。6.2 種藕來源6.2.1 單株選擇 提純用種藕來源從株系圃中選優(yōu)或從育種單位購買，第一年種植到種質(zhì)資源圃進(jìn)行初選?；ㄆ诔踹x，從種質(zhì)資源圃里選取生長強(qiáng)勢、無退化表現(xiàn)、并符合原品種特性植株作為母株。選擇數(shù)量依原種圃面積而定，初選數(shù)應(yīng)比決選數(shù)增加一倍。結(jié)實結(jié)藕期決選，將健壯并具有該品種典型開花與結(jié)實結(jié)藕特征的單株品種池中所結(jié)的全部種藕單獨貯藏，作為株系圃的種藕。6.2.2 株系圃株系圃一般為若干個面積不低于1m2的種植池或排列整齊的直徑不低于0.65m的種植缸組成，各池（缸）間距不低于0.8m。第二年，將貯藏的全部種藕分品種分株單獨種植，一池或一缸一藕，做好標(biāo)識。生長期間進(jìn)行多次品種特性觀察，結(jié)合指示標(biāo)志、抗血清法鑒定，嚴(yán)格淘汰病毒株和變異株系，對各品種株系苗期、開花期、結(jié)實結(jié)藕期綜合觀察甄別與檢測，精選出的1株2株健壯、生長勢強(qiáng)且符合品種典型特性的株系做好標(biāo)志，所結(jié)種藕作為提純復(fù)壯后的新種藕，下一年種植到種質(zhì)資源圃中，余下的種藕去雜去劣后混收，作為該品種的原原種，用于繁殖生產(chǎn)原種。6.2.3 種質(zhì)資源圃第三年，在株系圃中精選出的植株所結(jié)的種藕，已是提純復(fù)壯后的新種藕，淘汰原種質(zhì)資源圃中的種藕，用復(fù)壯后的新種藕種植到種質(zhì)資源圃中，當(dāng)年在種質(zhì)資源圃中再選優(yōu)良單株，下一年種植到株系圃中。6.3 隔離條件品種間用品種池隔離，各池根系不相連通。同品種池連續(xù)幾年種植，滿3年更換一次土壤。6.4 去雜去劣6.4.1 定植前 原種圃與株系圃，定植前都需要先挖出上年殘留植株，清理掉落的種子。6.4.2 生長期及時清除花色、花形、葉色、葉形等性狀與所繁品種明顯有異的植株?；ㄆ诿?d5d巡查一遍，結(jié)實期每5d7d巡查一遍，蓮子成熟前及時套袋，防止種子掉落，成熟時及時采收，或者在成熟前將蓮蓬剪除。6.4.3 枯荷期挖除田塊內(nèi)保持綠色的個別植株。6.4.4 挖采期剔除皮色、芽色、藕頭與藕條形狀等與所繁品種有異的藕支及感病藕支。6.5 定植與栽培管理參照4.2.6、4.2.7。6.6 種藕采收與儲藏參照4.2.8、4.2.6。7 荷花種質(zhì)資源組培提純復(fù)壯技術(shù)方法同5。在5.6生根培養(yǎng)后和5.7煉苗移栽前進(jìn)行病毒檢測，淘汰帶毒苗，未檢測出的其余試管苗，1個月后再檢測一次，確認(rèn)無病毒可作為原種苗保存和繁殖。荷花種質(zhì)資源保存及提純復(fù)壯技術(shù)規(guī)范編制說明一、任務(wù)的來歷及工作簡要過程蘇州是典型的江南水鄉(xiāng)，湖泊眾多，濕地資源豐富，隨著濕地資源的快速開發(fā)利用，荷花因兼具觀賞、凈化水環(huán)境等功能，在休閑農(nóng)業(yè)、綠化美化、環(huán)境凈化等方面具有廣闊應(yīng)用前景。目前我市各類生態(tài)園及濕地系統(tǒng)中荷花得到廣泛應(yīng)用，但普遍存在品種雜亂、種性退化等問題，導(dǎo)致觀賞性下降，迫切需要收集、保存與提純復(fù)壯荷花種質(zhì)資源，防止種性退化。我市尚無荷花種質(zhì)資源保存與提純復(fù)壯技術(shù)規(guī)范。2011年由蘇州市農(nóng)業(yè)委員會提出，蘇州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院、蘇州市相城區(qū)荷花濕地公園開發(fā)有限公司負(fù)責(zé)起草了荷花種質(zhì)資源保存及提純復(fù)壯技術(shù)規(guī)范。經(jīng)過廣泛征求專家意見，查閱了大量相關(guān)資料，根據(jù)實際情況進(jìn)行了多次修改，于2011年11月完成了荷花種質(zhì)資源保存及提純復(fù)壯技術(shù)規(guī)范蘇州市農(nóng)業(yè)地方標(biāo)準(zhǔn)的起草工作。二、編寫過程進(jìn)行的主要調(diào)查及數(shù)據(jù)來源本標(biāo)準(zhǔn)制訂前，我們已從全國各地收集荷花種質(zhì)資源，建設(shè)荷花種質(zhì)資源圃，并且開展了荷花種質(zhì)資源保存和提純復(fù)壯的相關(guān)研