GB 5413.12-2010發(fā)布稿 嬰幼兒食品和乳品中維生素B2的測(cè)定 發(fā)布稿.pdf

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn) GB 5413.122010 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 嬰幼兒食品和乳品中維生素 B2的測(cè)定 National food safety standard Determination of vitamin B2 in foods for infants and young children, milk and milk products 中 華 人 民 共 和 國 衛(wèi) 生 部中 華 人 民 共 和 國 衛(wèi) 生 部 發(fā)布 2010-03-26 發(fā)布 2010-06-01 實(shí)施 GB 5413.122010 I 前 言 本標(biāo)準(zhǔn)代替GB/T 5413.12-1997嬰幼兒食品和乳粉 維生素B2的測(cè)定。 本標(biāo)準(zhǔn)與GB/T 5413.12-1997相比，主要變化如下： 標(biāo)準(zhǔn)名稱改為嬰幼兒食品和乳品中維生素B2的測(cè)定。 取消了方法一熒光分光光度法； 對(duì)原標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了修改； 混合酶液中增加了酸性磷酸酶，以解決添加核黃素磷酸鹽作為維生素B2強(qiáng)化劑的樣品測(cè)定； 樣品處理方法中增加了“避免強(qiáng)光照射”的注意點(diǎn)； 外標(biāo)法定量采用多點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)曲線法； 在結(jié)果計(jì)算時(shí)明確樣品中維生素B2含量以核黃素計(jì)； 增加附錄A標(biāo)準(zhǔn)溶液的液相色譜圖。 本標(biāo)準(zhǔn)附錄A為資料性附錄。 本標(biāo)準(zhǔn)所代替標(biāo)準(zhǔn)的歷次版本發(fā)布情況為： GB 5413-1985、GB/T 5413.12-1997。 GB 5413.122010 1 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 嬰幼兒食品和乳品中維生素B2的測(cè)定 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了嬰幼兒食品和乳品中維生素 B2的測(cè)定方法。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于嬰幼兒食品和乳品中維生素 B2的測(cè)定。 2 規(guī)范性引用文件 本標(biāo)準(zhǔn)中引用的文件對(duì)于本標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 僅所注日期的版本 適用于本標(biāo)準(zhǔn)。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本標(biāo)準(zhǔn)。 3 原理 試樣在稀鹽酸環(huán)境中恒溫水解，酶解，經(jīng) C18反相色譜柱分離，用熒光檢測(cè)器（Ex：462 nm，Em： 522 nm）檢測(cè)，外標(biāo)法定量。 4 試劑和材料 除非另有規(guī)定，本方法所用試劑均為分析純，水為 GB/T 6682 規(guī)定的一級(jí)水。 4.1 鹽酸。 4.2 三水乙酸鈉。 4.3 冰乙酸。 4.4 甲醇：色譜純。 4.5 維生素 B2（核黃素）標(biāo)準(zhǔn)品：純度99%。 4.6 鹽酸（1+1） ：量取 100 mL 鹽酸（4.1）緩慢倒入 100 mL 水中，混勻。 4.7 鹽酸（0.1 mol/L） ：吸取 9 mL 鹽酸（4.1） ，溶于 1000 mL 水中。 4.8 鹽酸（0.01 mol/L） ：吸取 0.1 mol/L 鹽酸（4.7）50 mL，用水稀釋并定容至 500 mL。 4.9 乙酸鈉溶液（0.05 mol/L） ：稱取 6.80 g 三水乙酸鈉（4.2） ，加 900 mL 水溶解，用冰乙酸調(diào) pH 值 至 4.05.0，用水定容至 1000 mL。經(jīng) 0.45 m 微孔濾膜過濾。 4.10 乙酸鈉溶液（2.0 mol/L） ：稱取 27.22 g 三水乙酸鈉（4.2） ，用水溶解并定容至 100 mL。 4.11 混合酶溶液： 稱取2.345 g木瓜蛋白酶 （活力單位600 U/g） 、 1.175 g淀粉酶 （活力單位4000 U/g） 和 1.000 g 酸性磷酸酶（活力單位4000 U/g） ，用水定容至 50 mL。臨用前配制。 4.12 標(biāo)準(zhǔn)溶液 GB 5413.122010 2 4.12.1 維生素 B2 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（250 g/mL）：稱取 25mg （精確至 0.1 mg）維生素 B2標(biāo)準(zhǔn)品（4.5） ， 加入鹽酸（4.6）2 mL，超聲溶解后，立即用水轉(zhuǎn)移并定容至 100 mL。置于棕色玻璃容器中在 04 冰箱貯存，保存期為 3 個(gè)月。 4.12.2 維生素 B2 標(biāo)準(zhǔn)中間液：準(zhǔn)確吸取 4.00 mL 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（4.12.1） ，用水稀釋并定容至 100 mL， 此溶液中維生素 B2濃度為 10 g/mL。臨用前配制。 4.12.3 維生素 B2 標(biāo)準(zhǔn)系列工作液：分別吸取維生素 B2 標(biāo)準(zhǔn)中間液（4.12.2）0.00 mL、0.50 mL、 1.00 mL、 2.00 mL、 5.00 mL、 10.00 mL， 用水溶解并定容至 100 mL。 該標(biāo)準(zhǔn)系列濃度分別為 0.00 g/mL、 0.05 g/mL、0.10 g/mL、0.20 g/mL、0.50 g/mL、1.00 g/mL。臨用前配制。 5 儀器和設(shè)備 5.1 高效液相色譜儀，帶有熒光檢測(cè)器。 5.2 高壓滅菌鍋。 5.3 pH 計(jì)：精度為 0.01。 5.4 組織搗碎機(jī)。 5.5 0.45 m 微孔水相濾膜。 5.6 天平：感量 1 mg 和 0.1 mg。 6 分析步驟 6.1 試樣的處理 稱取5 g10 g（精確至0.01 g） 試樣 （如有必要， 將試樣放入搗碎機(jī)中搗碎； 試樣中含維生素B2 5 g 以上）于100 mL三角瓶中，加60 mL 0.1 mol/L鹽酸（4.7），充分搖勻，用棉花塞和牛皮紙封口，放入 高壓滅菌鍋內(nèi)，在121 下保持30 min，待冷卻至40 以下后取出，輕搖數(shù)次；用2.0 mol/L乙酸鈉溶液 （4.10）調(diào)pH值至4.0左右，加入2.0 mL混合酶溶液（4.11），搖勻后，置于37培養(yǎng)箱中過夜；將酶解 液轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，用水定容至刻度，用定量濾紙過濾，取濾液再經(jīng)0.45 m濾膜（5.5）過濾， 取濾液備用。 注：操作過程應(yīng)避免強(qiáng)光照射。 6.2 測(cè)定 6.2.1 參考色譜條件 色譜柱：C18反相色譜柱（粒徑 5 m，250 mm 4.6 mm）或同等性能的色譜柱。 流動(dòng)相：0.05 mol/L 乙酸鈉溶液（4.9）甲醇（4.4）= 6535。 流速：1.0 mL/min。 檢測(cè)波長：激發(fā)波長 462 nm，發(fā)射波長 522 nm。 進(jìn)樣量：20 L。 6.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 將維生素 B2 標(biāo)準(zhǔn)系列工作液（4.12.3）依次進(jìn)行色譜測(cè)定（其標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖參見附錄 A 中圖 A.1） ，記錄色譜峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 6.2.3 試液測(cè)定 將試液進(jìn)行色譜測(cè)定，從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查得試液相應(yīng)的濃度。 GB 5413.122010 3 6.2.4 空白試驗(yàn) 除不加試樣外，按上述操作步驟進(jìn)行。 7 分析結(jié)果的表述 試樣中維生素B2的含量按式（1）計(jì)算： cV100 X （1） m1000 式中： X試樣中維生素 B2的含量（以核黃素計(jì)） ，單位為毫克每百克（mg/100 g） ； c試液的進(jìn)樣濃度，單位為微克每毫升（g/mL） ； V試樣定容體積，單位為毫升（mL） ； m試樣質(zhì)量，單位為克（g） 。 以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。 8 精密度 在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的 10 %。 9 其他 本