GB 29698-2013 食品安全國家標準 奶及奶制品中17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇多殘留的測定 氣相色譜-質(zhì)譜法

  G 中 華 人 民 共 和 國 國 家 標 準  9698 2013 食品安全國家標準  奶及奶制品中 17 雌二醇、雌三醇、炔雌醇 多 殘留 的測定   氣相色譜 7（電子版本僅供參考，以標準正式出版物為準）  2013布  2014施  中華人民共和國農(nóng)業(yè)部  中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會  發(fā)布  I 目   次  目   次  . I 前   言  . 及奶制品中 17雌二醇、雌三醇、炔雌醇 多 殘留的測定  氣相色譜法 .  1  范圍  .  2  規(guī)范性引用文件  .  3  原理  .  4  試劑和材料  .  5  儀器和設(shè)備  .  6 試樣制備與保存  .  料的制備  .  料的保存  .  7 測定步驟  .  準工作曲線制備  .  提取  .  凈化  .  衍生化  .  測定  .   空白試驗  .  8 結(jié)果計算和表述  .  9  檢測方法靈敏度、準確度 和精密度  .  敏度  .  確度  .  密度  .  附錄 A .     言  本標準的附錄 A 為資料性附錄。  本標準系國內(nèi)首次發(fā)布的國家標準。    奶及奶制品中 17雌二醇、雌三醇、炔雌醇 多 殘留 的測定  氣相色譜 1  范圍  本標準規(guī)定了奶及奶制品中雌激素類藥物殘留 量 檢測的制樣和氣相色譜質(zhì)譜測定方法。  本標準適用于鮮奶和奶粉樣品中 17雌二醇、雌三醇、炔雌醇 單個或多個藥物 殘留量的檢 測。  2  規(guī)范性引用文件  下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單 (不包括勘誤的內(nèi)容 )或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據(jù)本標準達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標準。   準化工作導(dǎo)則  第 1 部分：標準的結(jié)構(gòu)和編寫規(guī)則   6682 分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法  3  原理  試料中 殘留 的雌激素 ， 用乙酸乙酯和乙腈混合溶劑提取，固相萃取柱凈化 ， 硅烷化試劑衍生， 離子模式 氣 相色譜 定， 外標法定量。  4  試劑和材料  以下所用試劑，除特殊注明外均為分析純試劑，水為符合  6682 規(guī)定的一級水。   17雌二醇、雌三醇、炔雌醇 ：含量    二硫赤蘚糖醇    三甲基硅烷   乙腈   乙酸乙酯   甲醇   甲苯     正己烷   鹽酸   氫氧化鈉   相萃取 柱： 18， 500  相當(dāng)者。   硅膠固相萃取 柱： i,  500  相當(dāng)者。  95%正己烷乙酸乙酯溶液：取正己烷 95  乙酸乙酯 溶解并稀釋至 100  70%正己烷乙酸乙酯溶液：取正己烷 70 乙酸乙酯溶解并稀釋至 100  1 氫氧化鈉溶液： 取 氫氧化鈉 40 g，用水溶解并稀釋至 1 000  5 鹽酸溶液： 取濃鹽酸 48 水溶解并稀釋至 100  衍生化試劑： 取二硫赤蘚糖醇 g， 用 5 解 ，于液面下加 三甲基硅烷 10 L，混勻， 2 8 放置過夜 ， 避光防潮密封保存 。 衍生化試劑應(yīng) 無色，如果發(fā)生棕紅色等顏色變化，表明試劑失效 。    1 mg/二醇、雌三醇、炔雌醇標準貯備液 ： 精確稱取 17雌二醇、雌三醇、炔雌醇標準品 各 10 別 于 10 瓶中， 用甲醇 溶解并 稀釋至刻度 ， 配成濃度為 1 mg/標準 貯備液。   20 以下保存，有效期 6 個月。  10 17雌二醇、雌三醇、炔雌醇 混合 標準 工作 液 ： 精密 量取 1 mg/7雌二醇、雌三醇 和 炔雌醇 標準 貯備 液各 于 100 瓶中，用甲醇稀釋 至刻度 ， 配制成濃度為 10  的 混合 標準工作液， 2 8 保存，有效期 1 個月。  5  儀器和設(shè)備   氣相色譜   。   分析天平： 感量 1 g。   天平： 感量 g。   氮吹儀   固相萃取裝置   均質(zhì)器   旋渦混合器  離心機  烘箱      旋轉(zhuǎn)濃縮儀。  濾膜： m。  6 試樣制備與保存  料 的制備  取適量新鮮或冷藏的空白或供試樣品， 混合 ，并使均質(zhì) 。   取均質(zhì)后的供試樣品，作為供試試料。   取均質(zhì)后的空白樣品，作為空白試料。   取均質(zhì)后的空白樣品，添加適宜濃度的標準 工作 液，作為空白添加試料。  料的 保存  2 8 保存 。  7 測定步驟  準工作曲線制備  精密 量取 10  混合標工作液 適量，用甲醇稀釋 ，配制 成濃度為 10、 50、 100、 200、 500 和 1000 g/L 系列標準工作液 ， 于 40 水浴氮氣吹干，按衍生化步驟處理， 供氣相色譜法 測得峰面積為縱坐標，對應(yīng)的標準溶液濃度為橫坐標，繪制標準曲線。求回歸方程和相關(guān)系數(shù)。  提取  液態(tài) 試料  稱取 試料 （ 10g， 于 50  乙腈 5 乙酸乙酯 15 渦振蕩 3 8 000 r/ 集上清液于另一 50 渣重復(fù)提取一次，合并 兩次 上清液， 于 40 水浴旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā) 至近干，用 1 氫氧化鈉溶液 6 至另一 50 加正己烷 20  8 000 r/ 集下層提取液，用 5 鹽酸溶液調(diào) 用。  固態(tài) 試料  稱取 試料 （ 10g， 于 50 加 乙酸乙酯 15 渦振蕩 3 8 000 r/  集上清液于另一 50 殘渣 重復(fù)提取一次，合并 兩次 上清液 ， 40 水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，用 1 氫氧化鈉溶液 6 至另一 50 正己烷 20  8 000 r/ 集下層提取液，用 5 鹽酸溶液調(diào) 用。  凈化  次 用甲醇 5  水 5 化， 取備用液過柱， 用 水 5 洗，抽干， 用 甲醇 5 脫，收集洗脫液， 于 40 水浴氮氣吹干。用 95%正己烷乙酸乙酯 溶液 5 解 殘余物 ， 過經(jīng) 正己烷5 化后的 硅膠柱 ， 加 正己烷 5 洗，抽干，再用 70%正己烷乙酸乙酯 溶液 5 脫，收集洗脫液， 于 40 水浴氮氣吹干。  衍生化   殘余物 加 甲苯和衍生化試劑各 100 L 溶解 ， 混勻 ，封口，在 80 烘箱中衍生 60 卻 ， 供氣相色譜   測定  譜 條件  色譜柱   S 石英毛細管色譜柱（ 30 m 膜厚 m），或相當(dāng)者。  載氣為高純 氦氣 ，恒流 1.0 mL/ 進樣口溫度 220 ；  進樣體積： 1 L，不分流；  色譜柱起始溫度 100 (保持 1 以 20 /升溫速率升至 200 （保持 3 再以 20/升溫速率升至 260 （保持 5 再以 20 /升溫速率升至 280 （保持 5   譜條件  離子源 (度： 200 ；  壓：高于調(diào)諧電壓 200 V；  電子能量： 70 S 傳輸線溫度： 280 ；  四極桿溫度： 160 ；  選擇離子監(jiān)測 ( (m/z)232， 285， 326， 416（ 17雌二醇 ）； 311， 345， 414， 504（ 雌三醇 ）；  285， 300， 425， 440（ 炔雌醇 ）。  測定法  定性 測定  通過 試樣 色譜圖的保留時間與 相應(yīng)標準品 的保留時間、各色譜峰的特征離子與相應(yīng)濃度 標準溶液各色譜峰 的特征離子相對照定性。 試樣 與標準 品 保留時間的相對偏差不大于 5； 試樣 特征離子的相對豐度 與濃度相當(dāng)混合標準溶液的相對豐度一致，相對豐度偏差不超過表 1 的規(guī)定，則可判斷 試樣 中存在相應(yīng)的被測物 。  表 1 定性確診時相對離子豐度的最大允許誤差  相對豐度，   50 20 50 10 20 10 允許偏差，  10 15 20 50 定量 測定  取適量試樣溶液和相應(yīng)的標準溶液，做單點或多點校準，按外標法，以峰面積定量，標準 溶 液及試樣液中 17雌二醇 、 雌三醇 和 炔雌醇 的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測 的線性范圍之內(nèi)。在上述色譜條件下，標準溶液 、空白試樣和空白添加 試樣的色譜圖及質(zhì)譜圖見附錄 A。   空白試驗  除不加試樣外，采用完全相同的測定步驟進行平行操作。  8 結(jié)果計算和表述  試料 中 17雌二醇、雌三醇、炔雌醇的殘留量 （ g/：  按 下 式計算。  X=                                         式中：  X 供試 試料中 相應(yīng)的 17雌二醇、雌三醇、炔雌醇 殘留量， g/  標準 溶液 中 相應(yīng)的 17雌二醇、雌三醇 和 炔雌醇 濃度 ， g/L；  A 試樣中 相應(yīng)的 17雌二醇、雌三醇 和 炔雌醇的峰面積 ；   標準溶液中 相應(yīng)的 17雌二醇、雌三醇 和 炔雌醇的峰面積 ；  V 溶解殘余物 體積，  m 供試試料質(zhì)量 ， g。  A V m  注：計算結(jié)果需扣除空白 值，測定結(jié)果用平行測定的算術(shù)平均值表示，保留三位有效數(shù)字。  9  檢測方法靈敏度、準確度和精密度  敏度  本方法檢測限為 g/量限 為 g/ 確度  本方法 在 1 10g/加濃度水平上 的回收率 為 60%