淀粉的國標(biāo)測定方法

1、.淀粉的國標(biāo)測定方法測定食物中淀粉的方法有酶水解法、酸水解法、可消化淀粉和抗性淀粉的測定方法（酶-直接法）一、酶水解法1.原理樣品經(jīng)除去脂肪及可溶性糖類后，其中淀粉用淀粉酶水解成雙糖，再用鹽酸將雙糖水解成單糖，最后按還原糖測定，并折算成淀粉。2.適用范圍gb5009.9-85，適用于所有含淀粉的食物。3.儀器（1） 回流冷凝器（2） 水浴鍋4.試劑除特殊說明外，實驗用水為蒸餾水，試劑為分析純。（1） 乙醚（2） 0.5 % 淀粉酶溶液：稱取淀粉酶（sigma公司， e.c3.2.1.1）0.5 g，加100ml水溶解，加入數(shù)滴甲苯或三氯甲烷，防止長霉，貯于冰箱中。（注：配成溶液的淀粉酶破壞很快

2、，最好鄰用現(xiàn)配。）（3） 碘溶液：稱取3.6 g碘化鉀溶于20 ml水中，加入1.3 g碘，溶解后加水稀釋至100 ml。（4） 85 %乙醇。（5） 其余試劑同蔗糖測定方法5.操作方法5.1 樣品處理稱取25 g樣品，置于放有折疊濾紙的漏斗內(nèi)，先用50 ml乙醚分5次洗除脂肪（注：如果脂肪含量少，此步驟可免），再用約100 ml85 %乙醇洗去可溶性糖類（注：此步驟目的是去除可溶性糖），將殘留物移入250 ml燒杯內(nèi)，并用50ml水洗濾紙及漏斗，洗液并入燒杯內(nèi)，將燒杯置沸水浴上加熱15 min，使淀粉糊化，放冷至60 以下，加20ml淀粉酶溶液，再5560 保溫1h，并時時攪拌（注：溫度過高

3、，淀粉酶的活性破壞）。然后取1滴此液加1滴碘溶液，應(yīng)不現(xiàn)蘭色，若顯蘭色，再加熱糊化并加20ml淀粉酶溶液，繼續(xù)保溫，直至加碘不顯蘭色為止。加熱至沸，冷后移入250ml容量瓶中，并加水至刻度，混勻，過濾。（注：此時淀粉已水解成雙糖，過濾可去除殘渣和纖維素）棄去初濾液，取50 ml濾液，置于250ml錐形瓶中，加5 ml 6 mol/l鹽酸，裝上回流冷凝器，在沸水浴中回流1h，冷后加2滴甲基紅指示劑，用5mol/l氫氧化鈉溶液中和至中性，溶液轉(zhuǎn)入100 ml容量瓶中，洗滌錐形瓶，洗液并入100ml容量瓶中，加水至刻度，混勻備用。（淀粉在沸水浴條件下糊化是淀粉水解的第一步反應(yīng)，然后在淀粉酶的作用下，

4、分解成短鏈淀粉、糊精、麥芽糖等低聚合的糖，所以在淀粉酶解后需用酸進(jìn)一步水解得到葡萄糖。）5.2 測定按還原糖的測定方法操作。同時量取50 ml水及與樣品處理時相同量的淀粉酶溶液，按同一方法做試劑空白試驗。6.計算x1=（a1-a2）0.9100（1）精品.m1v1v31000v2100精品.式中： x1-樣品中淀粉的含量，%；a1-測定用樣品中還原糖的含量。mg；a2-試劑空白中還原糖的含量，mg；0.9-還原糖（以葡萄糖計）換算成淀粉的換算系數(shù)；m1-稱取樣品質(zhì)量，g；v1-水解用樣品溶液體積，ml；v2-樣品定容總體積，ml；v3-測定用樣品處理液的體積，ml。二、酸水解法1.原理樣品經(jīng)除

5、去脂肪及可溶性糖類后，其中淀粉用酸水解成具有還原性的單糖，然后按還原糖測定，折算成淀粉。2.適用范圍本法適用于含淀粉的食物3.儀器（1） 水浴鍋。（2） 高速組織搗碎機(jī)：1200 rpm。（3） 皂化裝置并附250 ml錐形瓶。4.試劑除特殊說明外，實驗用水為蒸餾水，試劑為分析純。（1） 乙醚。（2） 85%乙醇溶液。（3） 6mol/l鹽酸溶液。（4） 10mol/l氫氧化鈉溶液。（5） 2.5mol/l氫氧化鈉溶液。（6） 甲基紅指示液：0.2 %乙醇溶液。（7） 精密ph試紙。（8） 20 % 乙酸鉛溶液，（9） 10 % 硫酸鈉溶液。（10） 其余試劑同還原糖的測定。5.操作方法5.1

6、樣品處理5.1.1糧食、豆類、糕點、餅干等較干燥的樣品：稱取2.05.0 g磨碎過40目篩的樣品，置于放有慢速濾紙的漏斗中，用30ml乙醚分三次洗去樣品中脂肪，棄去乙醚。再用150 ml 85 %乙醇溶液分?jǐn)?shù)次洗滌殘渣，除去可溶性糖類物質(zhì)。并濾干乙醇溶液，以100ml水洗滌漏斗中殘渣并轉(zhuǎn)移至250ml錐形瓶中，加入30 ml 6 mol/l鹽酸，接好冷凝管，置沸水浴中回流2h。回流完畢后，立即置流水中冷卻。待樣品水解冷卻后，加入2滴甲基紅指示劑，先以40 %氫氧化鈉溶液調(diào)至黃色，再以6mol/l鹽酸校正至水解液剛變紅色為宜。若水解液顏色較深，可用精密ph試紙測試，使樣品水解液的ph約為7。然后

7、加20 ml 20%乙酸鉛溶液，搖勻，放置10 min。再加20 ml 10 %硫酸鈉溶液，以除去過量的鉛。搖勻后將全部溶液及殘渣轉(zhuǎn)入500ml容量瓶中，用水洗滌錐形瓶，洗液合并于容量瓶中，加水稀釋至刻度。過濾，棄去初濾液20 ml，濾液供測定用。5.1.2蔬菜、水果、各種糧豆含水熟食制品：按1：1加水在組織搗碎機(jī)種搗成勻漿（蔬菜、水果需先洗凈、涼干，取可食部分）。稱取510g勻漿（液體樣品可直接量?。?，于250 ml錐形瓶中，加30 ml乙醚振搖提?。ǔ悠分兄荆?，用濾液過濾去除乙醚，再用30ml乙醚淋洗兩次，棄去乙醚。以下按5.1.1自再用150 ml 85%乙醇溶液起依法操作。5.2

8、 測定按還原糖的測定步驟操作。6.計算x2=（a3-a4）0.9100（1）m250v21000250100式中： x2-樣品中淀粉的含量，%；a3-測定用樣品中還原糖的含量。mg；a4-試劑空白中還原糖的含量，mg；m2-稱取樣品質(zhì)量，g；v2-測定用樣品處理液的體積，ml。500-樣品液總體積，ml；0.9-還原糖（以葡萄糖計）換算成淀粉的換算系數(shù)；（注：酸水解能分解部分半纖維素，形成具有還原力的單糖，如木糖、阿拉伯糖等，可影響分析結(jié)果。為了比較正確地測定食物中淀粉含量，建議采用淀粉酶糖化淀粉，除去不可溶性的殘渣后，再用酸水解使之成為葡萄糖，然后測定其含量，最后換算成淀粉。三、可消化淀粉和

9、抗性淀粉的測定方法（酶-直接法）1.原理樣品先在37下經(jīng)-淀粉酶水解，使可消化淀粉轉(zhuǎn)化成葡萄糖，用80%乙醇提取，未水解的抗性淀粉部分經(jīng)沸水浴凝膠化后，在淀粉葡萄糖苷酶轉(zhuǎn)化成葡萄糖，用葡萄糖氧化酶法分別測定葡萄糖含量，再換算成可消化淀粉和抗性淀粉含量。2.適用范圍參考englyst和champ的方法。適用于所有含淀粉食物的測定。3.儀器（1） 恒溫水浴箱（2） 溫箱（3） 分光光度計4.試劑除特殊說明外，實驗用水為蒸餾水，試劑為分析純。（1） 0.1mol/l乙酸緩沖液 （ph 5.0）：稱取14.28 g 乙酸鈉 （ch3coona3h2o）溶于水中，加入2.7ml 冰乙酸，并調(diào)節(jié)ph 5.

10、0， 用水定容至1 l。（2） 酶溶液：分別稱取4g-淀粉酶溶液（-amylase，sigma公司）、1g淀粉葡萄糖苷酶溶液（amyloglucosidase，sigma 公司）和0.3g轉(zhuǎn)換酶（invertase，sigma公司）溶液于研缽中，用 0.1mol/l乙酸緩沖液研磨制成勻漿，并調(diào)節(jié)體積為100ml。3000rpm離心5min，取上清液。（3） 淀粉葡萄糖苷酶溶液： 稱取2 g 淀粉葡萄糖苷酶（amyloglucosidase, sigma 公司），加100 ml0.1 mol/l 乙酸緩沖液研磨成勻漿。3000 rpm離心5 min，取上清液。（4） 80%乙醇：800ml 乙醇

11、加水至1l。（5） 4mol/l氫氧化鉀溶液：稱取224g氫氧化鉀，用水溶解并加至1l。（6） 2 mol/l乙酸溶液：量取冰乙酸118ml，加水至1l，混勻。（7） 其它試劑同葡萄糖測定方法。5.操作步驟5.1樣品處理：測定rs1時，直接稱取樣品0.2g1g；測定rs2時，選用生的樣品，先研磨打碎后再稱取樣品0.2g1g，。測定rs3時，則先將樣品加水煮沸至少15min，使之凝膠化，然后取出放入4冰箱冷藏過夜，再混勻后稱取樣品0.2g1g （需折合水分）。加入10 ml酶溶液，輕輕混勻。37 溫箱或水浴中酶解16 h。加入40 ml 無水乙醇，使乙醇含量終濃度為80%，充分搖勻。靜置30mi

12、n，3000 rpm 離心15min，上清液轉(zhuǎn)移至100ml 容量瓶中。用80%乙醇反復(fù)洗滌沉淀2 3次。合并上清液并用乙酸緩沖液定容，供測定可消化淀粉用。5.2水解抗性淀粉：將經(jīng)反復(fù)洗滌的沉淀置于100干燥，然后用15ml水將沉淀轉(zhuǎn)移至錐形瓶中，沸水浴中加熱30min。冷卻至室溫。加入1倍體積的4 mol/l 氫氧化鉀溶液，使氫氧化鉀終濃度為2mol/l，室溫下混合30min。（注：在樣品凝膠化后，2mol/l氫氧化鉀的作用是進(jìn)一步破壞淀粉結(jié)構(gòu)，如果氫氧化鉀的濃度過高或過低，不利于結(jié)構(gòu)破壞，操作中需注意。）加入約30ml2 mol/l 乙酸溶液，調(diào)節(jié)ph為5.0，再加入淀粉葡萄糖苷酶溶液5

13、ml，6570水浴90min。冷卻后將水解液轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中，用乙酸緩沖液定容至刻度。過濾。5.3測定：吸取0.5ml上清液（5.1）和抗性淀粉水解液（5.2），按照葡萄糖氧化酶法分別測定葡萄糖含量（從測定步驟開始）。同時做葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線。6.計算根據(jù)葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線得出上清液中和抗性淀粉水解液中葡萄糖濃度，再根據(jù)稀釋定容體積和稱樣量分別計算出可消化淀粉和抗性淀粉含量。精品.x=(as-ab)vf0.10.9精品.0.5m式中: x-樣品中可消化淀粉/抗性淀粉含量，g/100g;as- 由標(biāo)準(zhǔn)回歸方程求出的樣品測定管中葡萄糖含量，mg；ab-由標(biāo)準(zhǔn)回歸方程求出的樣品空白管中葡萄糖含量，mg；v-樣品定容體積，ml；f-稀釋倍數(shù)0.5-測定時吸取樣品提取液的體積，ml；m-樣品質(zhì)量，g；0.1-將mg/g轉(zhuǎn)換成g/100g的系數(shù)。7.注意事項7.1 eglyst根據(jù)抗性淀粉的分類，對樣品處理采用不同的處理方法。讀者可根據(jù)實驗需要選擇相應(yīng)的方法。7.2eglyst測定抗性淀粉時，模擬胃腸道內(nèi)環(huán)境，根據(jù)-淀粉酶水解時間長短，將20min時已水解的淀粉稱為快消化淀粉，20min120min水解的淀粉稱為慢消化淀粉，120min后仍沒有水解的淀粉稱為抗性淀粉。有的學(xué)者指出在體內(nèi)實驗中，腸道對淀粉的消化能力可能超過6h,