4微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)

1、課題1 微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng),專題2 :微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用,課題1 微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng),微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)條件：,（1）合適的營(yíng)養(yǎng)和環(huán)境條件,（2）確保其他微生物無(wú)法混入,一. 培養(yǎng)基,1. 概念：,按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。,2. 培養(yǎng)基種類：,液體培養(yǎng)基： 固體培養(yǎng)基：,用途應(yīng)用微生物分離、鑒定、 計(jì)數(shù)和菌種保存等方面,用途工業(yè)生產(chǎn),3. 成分：,水、無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源,+滿足微生物對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、氧氣的要求,碳源：凡是為微生物提供所需碳元素的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) 無(wú)機(jī)碳：二氧化碳、碳酸氫鈉等 有機(jī)碳：糖類、脂肪石油等,氮源：凡是為微生物提供所需氮元素的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)

2、 無(wú)機(jī)氮源：氮?dú)狻?、硝酸鹽等 有機(jī)氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨 基酸等,菌落：,單個(gè)或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí)，就會(huì)形成一個(gè)肉眼可見的，具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫做菌落。 菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。,菌落,細(xì)菌的菌落特征因種而異,二. 無(wú)菌技術(shù),思考： 1. 什么是無(wú)菌技術(shù)？包括哪些方面？ 2. 無(wú)菌技術(shù)除了用來(lái)防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來(lái)微生物污染外，還有什么目的？（P15旁欄思考） 3. 消毒和滅菌有何不同？ 4. 常用的消毒和滅菌方法有哪些？,無(wú)菌技術(shù)：泛指培養(yǎng)微生物操作中，所有防 止雜菌污染的方法。,無(wú)菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。,3. 常用的消毒方法：

3、,煮沸消毒法，巴氏消毒法，紫外線或化學(xué)藥劑消毒法,常用的滅菌方法：,灼燒滅菌 干熱滅菌 高壓蒸汽滅菌 ：100kPa 121 15-30min,判斷下列各項(xiàng)是否需要消毒或滅菌。如需要，選擇合適方法。 （1）豆?jié){ （2）游泳池 （3）超凈工作臺(tái) （4）玻棒、試管、吸管、錐形瓶 （5）培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)皿 （6）無(wú)菌水 （7）牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 （8）接種環(huán)、接種針（9）實(shí)驗(yàn)操作者的雙手,牛奶,接種室、接種箱或超凈工作臺(tái),接種工具，接種環(huán)、接種針或其他金屬用具,玻璃器皿（吸管、培養(yǎng)皿）,2、消毒和滅菌，什么時(shí)候需要消毒，什么時(shí)候需要滅菌？,三. 實(shí)驗(yàn)操作-大腸桿菌的純化培養(yǎng),（一）制備牛肉膏蛋白胨固

4、體培養(yǎng)基 計(jì)算稱量溶化滅菌倒平板 （二）純化大腸桿菌 最常用的接種方法有： 平板劃線法和稀釋涂布平板法,（冷卻至50）,問題討論,涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無(wú)菌操作要求，想一想，第2步應(yīng)如何進(jìn)行無(wú)菌操作？,應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保證“無(wú)菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等。,菌種的保存,1、臨時(shí)保藏法： 對(duì)象： 溫度： 缺點(diǎn)： 2、甘油管藏法： 對(duì)象： 溫度：,結(jié)果分析與評(píng)價(jià) 課題延伸,（P20）,頻繁使用的菌種,4（冰箱）,容易被污染或 產(chǎn)生變異,長(zhǎng)期保存的菌種,-20（冷凍箱）,返回,接種環(huán),接種針,

5、返回,倒平板,討論1，2,討論3，4,平板劃線法,討論2，3,1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？,操作的第一步灼燒接種環(huán)： 每次劃線前灼燒接種環(huán)： 劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)：,避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；,殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端，從而通過(guò)劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。,及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。,2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？ 3.在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)

6、，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？,以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。,劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少， 每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落,返回1,涂布器,1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50 左右時(shí)，才能用來(lái)倒平板。你用什么辦法來(lái)估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？ 2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰？,提示：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可以進(jìn)行倒平板了。,通過(guò)灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基,返回1,返回2,3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？ 4.在倒平板的過(guò)程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來(lái)培養(yǎng)微生物嗎？為什么？,平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠