2.2.2動物細胞的融合與單克隆抗體.ppt

1、2002年月日， 兩場籌備了10年的“太空婚禮”首次在神舟四號飛船上舉行，植物細胞“新人”黃花煙草和革新一號煙草葉肉細胞原生質(zhì)體，動物細胞“新人”是小鼠B淋巴細胞和骨髓瘤細胞，兩批新人同時在 “產(chǎn)房”電融合儀內(nèi)孕育新生命。一段時間后，我國首批”太空娃娃”終于順利誕生。對照實驗結(jié)果表明，細胞融合率大大提高。,STS,“太空婚禮”,神舟放飛強國夢,“太空婚禮”科研項目一：,“太空婚禮”科研項目二：,挑戰(zhàn)自我,植物體細胞雜交技術(shù),動物細胞融合技術(shù),溫故而知新： 哪種植物細胞工程技術(shù)可以突破不同生物之間的生殖隔離，克服遠緣雜交不親和的障礙，培育出新的作物類型？,植物體細胞雜交技術(shù),你能回憶出植物體細胞

2、雜交的過程嗎？,雜合的原生質(zhì)體,雜種細胞,愈傷組織,雜種植株,溫故知新:,植物體細胞雜交過程,植物細胞A,植物細胞B,原生質(zhì)體A,原生質(zhì)體B,原生質(zhì)體融合,雜合的原生質(zhì)體,雜種細胞,愈傷組織,雜種植株,思考： 1、動物細胞融合的概念是什么？ 2、動植物細胞在結(jié)構(gòu)上有何區(qū)別？這對它們雜交或融合過程有什么影響？ 3、植物體細胞雜交誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合常用的方法有哪些？那動物細胞融合呢？ 4、動物細胞融合與植物原生質(zhì)體融合的基本原理是否相同？是什么原理？ 5、動物細胞融合有什么意義？主要應(yīng)用在哪些方面？,一、動物細胞融合,雜合的細胞,2個完整的雜交細胞AB,討論： 6、植物體細胞雜交可得到雜種植株，動物

3、細胞融合后能象電影上一樣形成雜種動物個體嗎? 為什么？,植物細胞A,植物細胞B,原生質(zhì)體A,原生質(zhì)體B,原生質(zhì)體融合,雜合的原生質(zhì)體,雜種細胞,愈傷組織,雜種植株,1970年，有兩位科學(xué)家 做了一個著名的實驗： 人鼠細胞融合的實驗， 以證明細胞膜上的蛋白 質(zhì)分子是運動的。,人鼠細胞是怎樣實現(xiàn)融合的？動物細胞融合有什么實踐意義呢？,一、動物細胞融合 1.細胞融合： 是指兩個或兩個以上的細胞融合為一個細胞的過程。 自然發(fā)生： 受精卵 人工誘導(dǎo)： 利用誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)動物細胞融合 誘導(dǎo)因素：聚乙二醇、滅活的病毒或電激等。,鼠細胞,人細胞,人工誘導(dǎo),動物細胞融合,雜交細胞,什么是病毒的滅活？,滅活是指用物理

4、或化學(xué)手段使病毒失去感染能力，但是并不破壞病毒的抗原結(jié)構(gòu)。,滅活病毒誘導(dǎo)細胞融合的原理 病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細胞互相凝聚，細胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細胞膜打開，細胞發(fā)生融合。,因為滅活的病毒能使細胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細胞膜打開，細胞發(fā)生融合,滅活的病毒顆粒黏附于細胞表面,細胞膜被病毒顆粒穿通,細胞膜連接,細胞融合，形成雜交細胞 （細胞膜具有一定的流動性）,正在融合的 淋巴細胞與骨髓瘤細胞,正在融合的雞血細胞,動物細胞融合的原理：,細胞膜的流動性,把兩個不同的動物細胞放在一起，用滅活的病毒處理細胞，它們先發(fā)生質(zhì)融合，再出現(xiàn)

5、核融合，進而形成雜交細胞。 融合后的雜交細胞經(jīng)過有絲分裂后仍能形成兩個完整的雜交細胞,細胞膜的流動性,滅活病毒、PEG、電激等,融合后的細胞進行有絲分裂，形成完整的雜交細胞,誘導(dǎo)的手段？,融合后細胞的類型？,AB雜種細胞遺傳物質(zhì) 有什么特點？,三種AA、AB、BB（A、B）,含兩種生物的遺傳物質(zhì),動物細胞融合過程,原理？,物理法的融合效率較高,且對細胞（原生質(zhì)體）的傷害小,易操作、控制和觀察。,太空中處于失重狀態(tài)，不同種細胞（原生質(zhì)體）更容易親近；,為什么在太空中細胞（原生質(zhì)體）融合率會大大上升？為什么選用物理法誘導(dǎo)？,2、動物細胞融合的應(yīng)用,1.突破有性雜交方法的局限,使遠緣雜交成為可能。,

6、2.成為研究細胞遺傳、細胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段。,鼠雞、鼠兔、鼠猴、人鼠、人兔、 人雞、人蛙、酵母菌雞 、人胡蘿卜等,3、重要用途：制備單克隆抗體。,獲得雜種植株,去壁原生質(zhì)體 融合誘導(dǎo)新壁 雜種植株,細胞膜的流動性,細胞膜的流動性,結(jié)果,誘導(dǎo)方法,步驟,融合的原理,動物細胞融合,植物體細胞雜交,比較項目,植物、動物細胞融合的比較,獲得雜交細胞,小結(jié)1,【例1】能使動物細胞融合的特有的誘導(dǎo)因子是 （ ） A.離心 B.滅活的病毒 C.電刺激 D.振動 【例2】融合后的雜交細胞的遺傳物質(zhì)有何特點（ ） 具有原來兩個或多個細胞的遺傳信息 B.能無限增殖 C.可形成新個體 D.培養(yǎng)

7、過程會貼壁 【例3】動物細胞融合的作用中最重要的是（ ） A.克服遠源雜交不親和 B.制備單克隆抗體 C.培育新物種 D.生產(chǎn)雜種細胞,B,B,初試牛刀,A,使用相應(yīng)的抗體檢測乙肝病毒抗原,二、單克隆抗體的制備 醫(yī)院一般怎樣檢測人體內(nèi)是否存在乙肝病毒？,乙肝病毒模式圖,凡能夠引起機體產(chǎn)生特異性 免疫應(yīng)答的物質(zhì)叫做抗原。,1、什么是抗原？,例如花粉、病菌、病毒等。有時自身的組織或細胞也會成為抗原，如癌細胞等。,抗原決定簇： 抗原表面具有的某些特定的化學(xué)基團，能決定抗原特異性，是免疫細胞識別抗原的重要依據(jù)。 各種抗原的決定簇數(shù)目不同，同一抗原的決定簇可能有多種。,2、什么是抗體？由何種細胞產(chǎn)生？主

8、要分布在哪里?起何作用？,當機體受到抗原刺激劑后由效應(yīng)B細胞（漿細胞）產(chǎn)生的，并且能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白抗體。 抗體分布于血清中，也分布于組織液及外分泌液中。,抗體與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合,抗體由何種細胞產(chǎn)生？主要分布在哪里?,3、抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法：,從血清中分離抗體,多種漿細胞,動物體內(nèi),多種抗體,抗原,血清抗體（也稱多克隆抗體） 由血清中提取的抗體是由不同淋巴細胞產(chǎn)生的多種抗體的混合物，可達百萬種以上，稱為多克隆抗體。 特點： 產(chǎn)量低、純度低、特異性差、反應(yīng)不夠靈敏。,抗原不純,抗體不純,每一個B淋巴細胞只分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一，特異性強的抗體。 如果利用單個B淋巴細胞

9、進行無性繁殖（克隆），形成細胞群，這樣的細胞群就有可能產(chǎn)生出化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強的抗體單克隆抗體。,問題： 怎樣獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強的抗體呢？,在體外培養(yǎng)的條件下，一個B淋巴細胞能無限增殖形成細胞群嗎？ 什么樣的細胞能夠在體外無限增殖呢？,腫瘤細胞！,抗體 抗原 應(yīng)答 抗體的不純性,動物細胞受到抗原刺激,引起免疫反應(yīng)產(chǎn)生的球蛋白.,不是自己的而又能引起免疫應(yīng)答反應(yīng)的物質(zhì)就是抗原.,一種抗原有多種不同的決定簇,刺激的是多種B細胞,作用于不同的B細胞后,會產(chǎn)生多種抗體, 這是多克隆的, 故不純!,4.制備單克隆抗體的思路,怎么才能得到純的抗體? 光純還不行,還要大量.怎么辦? 但，有問題:

10、 找，什么細胞能無限繁殖呢? 思路就出來了:,要想獲單一的純抗體,就必須從一個B細胞出發(fā).,讓B細胞大量繁殖(克隆)就可以產(chǎn)生大量抗體了.,B細胞是不能無限繁殖的.怎么辦?,癌! 只有癌細胞. 但它不能產(chǎn)生抗體.,癌細胞能無限繁殖,但不能產(chǎn)生抗體.B細胞能產(chǎn)生抗體,但不能大量繁殖.融合呀!只要將兩個細胞融合即可互補.,5.技術(shù)思路的重點,問題: 在培養(yǎng)體系中, 有5種細胞. B細胞、瘤細胞,和雜交細胞。 我們還是拿不到McAb,怎么辦? 篩選！篩出雜交瘤細胞。怎么篩? 又是一個思路問題。,如何誘導(dǎo)融合？,加入聚乙二醇（PEG）,如何得到B淋巴細胞？,6.制備單克隆抗體的過程,細胞兩兩融合后，有

11、哪些類型？,B-B B-瘤(雜交瘤細胞) 瘤-瘤,如何篩選出雜交瘤細胞？,單克隆抗體制備過程中，總共有兩次篩選，第一次篩選出雜交瘤細胞，第二次篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細胞，兩次篩選的原理和方法是不相同的。 首先用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞,細胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷。 人淋巴細胞中有這兩種DNA的合成途徑，但一般不分裂增殖。 鼠骨髓瘤細胞中只有D途徑，沒有S途徑，可是能不斷分裂增殖。 你想到篩選雜交瘤細胞的方案了么？,小資料：,在培養(yǎng)液中加入氨基蝶呤，收集增殖細胞！ 加入氨基嘌呤后，使 D 合成途徑阻斷，僅有 D 合成途徑的骨髓瘤細胞及其彼此融合的細胞就不

12、能增殖，但人淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合后的雜種細胞因為可以利用淋巴細胞中的 S 途徑合成DNA而增殖。,例：已知細胞增殖時合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基喋呤阻斷。 人淋巴細胞中有這兩種DNA的合成途徑，但一般不分裂增殖。 鼠骨髓瘤細胞中盡管沒有S途徑，但能不斷分裂增殖， 將兩種細胞在培養(yǎng)液中混合，加聚乙二醇促融，在培養(yǎng)液中有 種細胞。,加入氨基喋呤后，使D合成途徑阻斷，僅有D合成途徑的 及其彼此融合的細胞不能增殖。 人淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合后的雜交細胞中可利用淋巴細胞中的S途徑合成DNA而增殖。從培養(yǎng)液中分離出雜交細胞。,如何篩選出培養(yǎng)液中的雜交瘤細胞？,5,骨髓瘤細胞,通常采

13、用有限稀釋克隆細胞的方法，將雜交瘤細胞多倍稀釋，接種在多孔細胞培養(yǎng)板上培養(yǎng)，使每孔細胞不超過一個，再由這些單細胞克隆生長，然后檢測各孔上清液中細胞分泌的抗體，那些上清液可與特定抗原結(jié)合的培養(yǎng)孔為陽性孔。最終選出分泌預(yù)定特異抗體的雜交細胞株進行擴大培養(yǎng)。,再篩選出能分泌所需抗體的雜交瘤細胞,陽性孔,方法抗原-抗體雜交法,在單克隆抗體制備過程中，兩次篩選的原理和方法是不相同的。,如何得到大量的單克隆抗體？,體內(nèi)培養(yǎng) 體外培養(yǎng),單克隆抗體 化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強,注射抗原,效應(yīng)B細胞,骨髓瘤細胞,融合,多種雜交細胞,選擇性培養(yǎng)基 篩選1,抗原-抗體雜交法,克隆化,單克隆抗體,篩選2,4.第一次篩選出

14、的雜交瘤細胞為何需進行克隆化培養(yǎng)和專一抗體檢測？,單克隆抗體,雜交細胞,雜交瘤細胞,骨髓瘤 細胞,特異性雜交瘤細胞,雜交瘤細胞系,提取,經(jīng)過免疫的 B淋巴細胞,動物細胞融合技術(shù),動物細胞培養(yǎng)技術(shù),單克隆抗體的制備過程：,特點：既能產(chǎn)生專一抗體又能大量繁殖,特點：特異性強靈敏度高可大量制備,7、單抗隆抗體的應(yīng)用,作為診斷試劑,定位診斷腫瘤、心血管畸形等疾病,用于體外診斷人類和動植物疾病及病原鑒定，純度高、特異性強，具有準確、高效、簡易、快速的優(yōu)點。,用于治療疾病和運載藥物,利用同位素標記單抗，在特定組織成像,制成生物導(dǎo)彈，將藥物定向帶到癌細胞所在的位置，在原位殺死癌細胞，療效高、副作用小。,單克

15、隆抗體的優(yōu)點： 特異性強，靈敏度高，并可以大量制備。,用于治療疾病和運載藥物 特異性強、靈敏度高 生物導(dǎo)彈單克隆抗體抗癌藥物 療效高、毒副作用小,結(jié)合同位素的單抗,-生物導(dǎo)彈,單抗,放射性同位素,對比,細胞膜的流動性、細胞的全能性,細胞膜的流動性、細胞增殖,酶解法去壁,小鼠要免疫處理,物理法化學(xué)法,物理、化學(xué)、生物法,原生質(zhì)體的制備,融合親本細胞的準備,原生質(zhì)體的融合與篩選,動物細胞融合與兩次篩選,雜種細胞的形成與培養(yǎng),對產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞培養(yǎng),雜種植株的鑒定,單克隆抗體的分離提純,單抗有助于疾病的診斷、治療,獲得具優(yōu)良性狀的雜種植株,動物細胞工程小結(jié),動物細胞培養(yǎng)：原理、營養(yǎng)、條件、過

16、程、細胞生長特點、結(jié)果、應(yīng)用 動物細胞融合：原理、誘導(dǎo)方法、過程、應(yīng)用 單克隆抗體的制備：原理、過程、特點、應(yīng)用 核移植與克隆動物：供體、受體、核移植方法、克隆動物的方法、克隆動物的遺傳特性、應(yīng)用 動、植物細胞工程的比較：植物組培技術(shù)與動物細胞培養(yǎng)技術(shù)、植物體細胞雜交技術(shù)與動物細胞融合技術(shù),圖中B為_過程， 常用_作為誘導(dǎo)劑 ，該細胞繼承_的遺傳特性，既能_,又能_ 。,1.下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的抗體實驗方案,該實驗方案的 目是 ；,A是從小鼠的脾臟中取得_,該細胞能夠產(chǎn)生 ；,制備單克隆抗體,B細胞,專一抗體,細胞融合,滅活病毒,雙親細胞,分泌專一抗體,無限

17、增殖,單克隆抗體的制備,1、怎樣獲得能分泌專一抗體的B淋巴細胞？ 2、從何處獲得較多的B淋巴細胞？ 3、用什么方法可以使B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合？ 4、怎樣篩選出雜交瘤細胞？ 5、篩選出的雜交瘤細胞產(chǎn)生的抗體都一樣嗎？ 6、怎樣獲得只產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細胞？ 7、怎樣獲得大量的單一抗體？,反復(fù)注射特定的抗原，免疫小鼠。,小鼠的脾臟,PEG、滅活的病毒等,利用HAT選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)，篩選,否,用多孔細胞培養(yǎng)板培養(yǎng)，稀釋度要保證每個孔內(nèi)不多于一個細胞。 抗原抗體雜交法檢測呈陽性反應(yīng),體內(nèi)或體外大量培養(yǎng)特異的雜交瘤細胞，從中提取單一抗體。,單克隆抗體,雜交細胞,雜交瘤細胞,骨髓瘤 細胞,特異性雜

18、交瘤細胞,雜交瘤細胞系,提取,經(jīng)過免疫的 B淋巴細胞,動物細胞融合技術(shù),動物細胞培養(yǎng)技術(shù),單克隆抗體的制備過程：,特點：既能產(chǎn)生專一抗體又能大量繁殖,特點：特異性強靈敏度高可大量制備,單克隆抗體,B淋巴細胞 骨髓瘤細胞,誘導(dǎo)融合,選擇 培養(yǎng),雜交瘤 細胞,克隆化 培養(yǎng),抗體 檢測,產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細胞,體外培養(yǎng),小鼠腹腔內(nèi)增殖,單克隆抗體,多種雜 交細胞,1、該過程中用到了兩種技術(shù),小結(jié)2,單克隆抗體的制備過程：,動物細胞培養(yǎng)技術(shù),動物細胞融合技術(shù),2、單克隆抗體的制備過程的三個“一”：,一種誘導(dǎo)細胞融合的新方法，產(chǎn)生了一種新細胞，得到了一種優(yōu)勢抗體。,滅活病毒誘導(dǎo)融合,雜交瘤細胞,單克隆

19、抗體 優(yōu)勢：特異性強、靈敏度高， 可大量制備,兩個過程,動物細胞培養(yǎng)過程,單克隆抗體制備過程,三個“一”,一個誘導(dǎo)細胞融合的新方法 滅活病毒,一個新細胞雜交瘤細胞,一個優(yōu)勢單克隆抗體特異性 強、靈敏度高的優(yōu)勢,本節(jié)小結(jié),重點,1975年Kohler和Milstein的單克隆抗體技術(shù)在生產(chǎn)和使用抗體方面開創(chuàng)了新紀元，圖10示單克隆抗體制備流程階段示意圖。請據(jù)圖回答下列問題：圖10 （1）該技術(shù)是在動物細胞培養(yǎng)技術(shù)和 技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的。 （2）圖10中細胞A體外培養(yǎng)不具有 分裂能力，但能分泌 ， 細胞B體外培養(yǎng)能夠 。 （3）動物細胞融合常用的方 法是 。,圖10,（1）動物細胞融合（2）分

20、泌特異性抗體 、無限增殖（3）PEG（滅活的病毒、電刺激）,（4）細胞融合是隨機的過程，在HAT培養(yǎng)基中培養(yǎng)，要篩選出 細胞。在細胞培養(yǎng)過程中，為了促進細胞攝取葡萄糖，常向培養(yǎng)液中加入 （激素）。 （5）培養(yǎng)2周后，即測定培養(yǎng)細胞 的特征，篩選出 細 胞置于不同孔內(nèi)（如圖所示）培養(yǎng)。 此操作前要將培養(yǎng)細胞稀釋到 710個細胞/ml，每孔滴入 0.1ml細胞稀釋液，其目的是 。 （6）要獲得大量的單克隆抗體， 可對獲得的雜交瘤細胞進行 培養(yǎng)。,（4）雜交瘤、胰島素（5）特異性分泌抗X蛋白抗體的、保證每個孔內(nèi)不多于一個細胞，達到單克隆培養(yǎng)的目的（單一細胞培養(yǎng)以保證抗體的純度）、（6）體外或體內(nèi),單

21、克隆抗體制備過程,8.已知細胞合成DNA有 D 和 S 兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷。人淋巴細胞中有這兩種DNA的合成途徑，但一般DNA不分裂增殖。鼠骨髓瘤細胞中盡管沒有S途徑，但能不斷分裂增殖，將這兩種細胞在試管中混合，加聚乙二醇促融，獲得雜種細胞。請回答：,試管中除融合的雜種細胞外，還有 種融合細胞,2,設(shè)計一方法（不考慮機械方法），從培養(yǎng)液中分離出雜種細胞，并說原理。 培養(yǎng)液中加入氨基嘌呤，收集增殖的細胞。 加入氨基嘌呤后，使 D 合成途徑阻斷，僅有 D 合成途徑的骨髓瘤細胞及其彼此融合的細胞就不能增殖，但人淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合后的雜種細胞因為可以利用淋巴細胞中的 S 途徑合

22、成DNA而增殖。,（1）融合后的雜種細胞容易成活嗎？ （2）制備單克隆抗體的過程應(yīng)用了哪些細胞工程技術(shù)手段？ （3）在整個制備的過程中要經(jīng)過幾次篩選？,思考：,細胞的同源性越近，融合形成的雜種細胞越易成活,細胞融合技術(shù)、細胞培養(yǎng)技術(shù),.篩選得到雜交瘤細胞， .篩選先在多孔培養(yǎng)板上，在每孔只有一個雜交 瘤細胞下培養(yǎng)篩選出特異抗體的細胞群,怎樣篩選出B淋巴細胞和骨髓瘤細胞間融合所形成的能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞？,用抗體檢測和克隆化培養(yǎng)得到能分泌所需抗體的雜種細胞專一抗體檢測。,18.如何利用雜交瘤細胞來大量生產(chǎn)單克隆抗體？,將雜交瘤細胞在體外大規(guī)模培養(yǎng)，從細胞培養(yǎng)液中就能提取大量的單克隆抗體；

23、把雜交瘤細胞注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖，再從小鼠腹腔中提取單克隆抗體。,如何進行雜交瘤細胞的抗體檢測及克隆化培養(yǎng)？ 融合后的細胞經(jīng)選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)后，能存活的細胞就是雜交瘤細胞。但這些雜交瘤細胞并非都是能分泌所需抗體的細胞，通常用“有限稀釋法”來選擇。 將雜交瘤細胞稀釋，用多孔細胞培養(yǎng)板培養(yǎng)，使每孔細胞不超過一個，通過培養(yǎng)讓其增殖。然后檢測各孔上清液中細胞分泌的抗體（常用酶聯(lián)免疫吸附試驗法），那些上清液可與特定抗原結(jié)合的培養(yǎng)孔為陽性孔。 陽性孔中的細胞還不能保證是來自單個細胞，挑選陽性孔的細胞繼續(xù)進行有限稀釋，一般需進行34次，直至確信每個孔中增殖的細胞為單克隆細胞。該過程即為雜交瘤細胞的克隆化培養(yǎng)

24、。,第二次篩選的原理和方法： 在實際免疫過程中，由于采用連續(xù)注射抗原的方法，且一種抗原決定簇刺激機體形成相對應(yīng)的一種效應(yīng)B淋巴細胞，因此，從小鼠脾臟中取出的效應(yīng)B淋巴細胞的特異性是不同的，經(jīng)HAT培養(yǎng)液篩選的雜交瘤細胞特異性也存在差異，所以必須從雜交瘤細胞群中篩選出能產(chǎn)生針對某一預(yù)定抗原快定簇的特異性雜交瘤細胞。 通常采用有限稀釋克隆細胞的方法，將雜交瘤細胞多倍稀釋，接種在多孔的細胞培養(yǎng)板上，使每一孔含一個或幾個雜交瘤細胞（理論上30%的孔中細胞數(shù)為0時，才能保證有些孔中是單個細胞），再由這些單細胞克隆生長，最終選出分泌預(yù)定特異抗體的雜交細胞株進行擴大培養(yǎng)。,思考與探究,1.植物體細胞雜交技術(shù)

25、與動物細胞融合技術(shù)有什么不同？,植物體細胞雜交技術(shù)與動物細胞融合技術(shù)基本相同，不同的是植物體細胞融合前需去掉細胞壁，然后再融合；動物細胞融合是兩個體細胞直接融合。,誘導(dǎo)融合方法不同：動物細胞誘導(dǎo)融合所用的方法比植物體細胞雜交多一類滅活的病毒誘導(dǎo)；結(jié)果不同：植物體細胞雜交培養(yǎng)成了雜種植株，而動物細胞融合只培養(yǎng)出了雜交細胞。,2.制備單克隆抗體時，為什么要選用B淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合形成雜交瘤細胞？,哺乳動物感染抗原后，其體內(nèi)會形成相應(yīng)的B淋巴細胞，B淋巴細胞能分泌相應(yīng)的抗體凝聚或殺死這些抗原。動物在免疫反應(yīng)的過程中，每一種B淋巴細胞能分泌一種特異性抗體，要想獲得大量的特異性抗體，必須使能分泌該

26、單一抗體的B淋巴細胞大量增殖。B淋巴細胞具有產(chǎn)生單一抗體的能力，但不能在體外增殖；骨髓瘤細胞是一種癌細胞，它能在體外培養(yǎng)條件下無限增殖，但不能產(chǎn)生抗體。因此，把一種B淋巴細胞與骨髓瘤細胞進行細胞融合，產(chǎn)生雜交瘤細胞，它會兼有兩個親本細胞的特性在體外培養(yǎng)條件下能不斷增殖，同時能產(chǎn)生出某種特異性的抗體。,知識拓展,3.為什么不只用兩個而要用多個細胞進行動物細胞間的融合？,就目前常用的細胞融合方法來看，不管是用物理的、化學(xué)的方法，還是生物的方法，其融合率都不可能是100%。僅用兩個細胞融合，其效率太低，不一定能得到融合細胞。更重要的是，即使兩個細胞已發(fā)生融合，但并不一定是研究者期望得到的細胞類型。目前動物細胞融合技術(shù)最有價值的應(yīng)用就是單克隆抗體的制備。我們以制備單克隆抗體為例來說明這一問題。我們知道，體內(nèi)產(chǎn)生的特異性抗體種類可多達百萬種以上，但是每一個B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體，如果僅取一個脾細胞（含B淋巴細胞）和一個瘤細胞雜交，我們不能確定該脾細胞分泌的抗體是否正是我們所需要的；若用大量的脾細胞和瘤細胞進行融合，就可以從融合細胞中篩選出能