藥分自考輔導(dǎo).ppt

1、藥物分析（自考輔導(dǎo)）第6版,主編 劉文英 主講 杜 斌,人民衛(wèi)生出版社,學(xué)習(xí)方法,以結(jié)構(gòu)性質(zhì)鑒別檢查含量測定為主線，掌握我國藥典中常用藥物的分析原理，找出有關(guān)內(nèi)容的聯(lián)系，融匯貫通 。,緒 論,一、藥典正確書寫： 中華人民共和國藥典（2010年版）或 中國藥典（2010年版） Chinese Pharmacopoeia（縮寫Ch.P.） 9版藥典：53、63、77、85、90、95、2000、 2005、2010。,二、常用國外藥典,美國藥典（The United States Pharmacopoeia) 美國國家處方集(The National Formulary) USP（34）-NF（2

2、9）,2010,5,1正式施行 英國藥典（British Pharmacopoeia）BP（2010） 日本藥局方JP（15）,三、藥品質(zhì)量管理規(guī)范,我國對藥品質(zhì)量控制的全過程起指導(dǎo)作用的法令文件有: GLP Good laboratory Practice （藥品非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)定） GMP Good Manufacture Practice （藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范） GSP Good Supply Practice （藥品經(jīng)營質(zhì)量管理規(guī)范） GCP Good Clinical Practice （藥品臨床試驗(yàn)質(zhì)量管理規(guī)范）,第 一 章藥 典 概 況,中國藥典,生物制品（三部）,一、中國

3、藥典Ch.P.(2010),藥典內(nèi)容,凡 例,正 文,索 引,附 錄,藥典正文中所收載藥品或制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的內(nèi)容：,性狀、鑒別、檢查、含量測定、類別、貯藏、制劑。,標(biāo)準(zhǔn)品、對照品,稱取“0.1g”,系指稱取重量可為0.06-0.14g 稱取“2g”,系指稱取重量可為1.5-2.5g 稱取“2.0g”,系指稱取重量可為1.95-2.05g 稱取“2.00g”,指稱取重量可為1.995-2.005g,精密度規(guī)定：,空白試驗(yàn)定義,指在不加供試品或以等量溶劑代替供試液，按同法測得的結(jié)果。,規(guī)定“精密稱定”時(shí)，系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確 至所取重量的千分之一。 規(guī)定“稱定”時(shí)，系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所 取重量的百

4、分之一。,規(guī)定“量取”時(shí)，系指可用量筒或按照量取 體積的有效數(shù)位選用量具。 取用量為“約”若干時(shí)，系指取用量不得超 過規(guī)定量的10。,中國藥品生物制品檢定所,藥品檢驗(yàn)工作的法定機(jī)構(gòu),省、自治區(qū)食品藥品檢驗(yàn)所,市食品藥品檢驗(yàn)所,藥品檢驗(yàn)工作的基本程序：,取樣、鑒別、檢查、含量測定、寫出報(bào)告。,第二章藥物的鑒別試驗(yàn),鑒別：判斷已知藥物及其制劑的真?zhèn)巍?常用的鑒別方法有 ： 化學(xué)法、光譜法、色譜法、生物學(xué)法。 影響鑒別反應(yīng)的因素： 被測物濃度、試劑用量、溶液溫度、pH值、反應(yīng)時(shí)間、干擾物質(zhì)。,化學(xué)鑒別法必須具備的特點(diǎn)： 反應(yīng)迅速、現(xiàn)象明顯、專屬性強(qiáng)、再現(xiàn)性好。,第三章,藥物的雜質(zhì)檢查,一、中國藥典（

5、2010年版）中檢查項(xiàng)下包括四個(gè)方面：,雜質(zhì)檢查 有效性（制酸力、吸著力） 安全性（熱原、異常毒性、降壓物、無菌） 制劑的檢查（重量差異、崩解時(shí)限、含量均勻度等）,二、雜質(zhì)的種類與來源,來源：生產(chǎn)過程中引入 貯藏過程中引入 種類：一般雜質(zhì) 特殊雜質(zhì) 信號雜質(zhì) 毒性雜質(zhì) 有機(jī)雜質(zhì)、無機(jī)雜質(zhì)、殘留溶劑 （按理化性質(zhì)分）,按來源分,按性質(zhì)分,一般雜質(zhì)：自然界中分布較廣泛，在多種藥物的生產(chǎn)或貯藏過程中容易引入的雜質(zhì)。 如：酸、堿、水分、氯化物、硫酸鹽、鐵鹽、重金屬、砷鹽、硫化物、氰化物、澄清度、溶液的顏色、干燥失重、水分、易炭化物和有機(jī)溶劑殘留量等。,原理：,Ag+ Cl- AgCl 與標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液

6、比濁。 靈敏度：標(biāo)準(zhǔn)NaCl（10gCl- /ml ） 50-80gCl-/50ml此范圍內(nèi)AgCl 的混濁度明顯。 HNO3的作用：加速AgCl的生成，產(chǎn)生較好的 乳濁液，避免Ag2O、Ag3(PO4)、 Ag2CO3、Ag2SO4沉淀產(chǎn)生。,HNO3,原理：,SO42+Ba2+ BaSO4 與標(biāo)準(zhǔn)K2SO4（100g/ml）溶液比濁。 靈敏度100-500g/50ml。 稀HCl作用：防止BaCO3、Ba3(PO4)2生成。 酸度過大可使硫酸鋇溶解，減 低靈敏度，50ml供試品中含 2ml稀鹽酸為宜。,HCl,重金屬系指在實(shí)驗(yàn)條件下能與S2-作用顯色的金屬雜質(zhì)。 顯色條件：弱酸性溶液（pH

7、3-3.5) 結(jié)果：重金屬硫化物微粒均勻混懸在溶液中所呈現(xiàn)的顏色。 Ag、Pb、Hg、Cu、Cd、Bi、As、Sb、Sn、 Zn、Co、Ni。,第一法：硫代乙酰胺法,適于溶于水、稀酸和乙醇的藥物。 CH3CSNH2H2O CH3CONH2H2S H2SPb2+(微量） PbS 標(biāo)準(zhǔn)硝酸鉛溶液10g/ml比濁。 靈敏度10-20g/25ml 。 加CH3CSNH2前先用，NH3H2O調(diào)pH值至溶液 對酚酞呈中性，再加pH3.5醋酸鹽緩沖液。,pH3.5,第二法：熾灼后硫代乙酰胺法,用于含芳環(huán)、雜環(huán)及在水、稀酸、乙醇中難溶的有機(jī)藥物。 方法：將供試品熾灼破壞（500-600）后按第一法檢查。,第三

8、法：硫化鈉法 溶于堿而不溶于弱酸或在稀酸中產(chǎn)生沉淀的藥物，如磺胺類、巴比妥類，均在堿性溶液中Na2S試液檢查重金屬。 第四法：微孔濾膜法 適于含重金屬只有2-5g的供試品，即微孔濾膜過濾法，對鉛斑比較，又稱鉛斑法。,古蔡法(Gutzeit),原理：金屬鋅和酸作用生成新生態(tài)的H2，與藥物中微量砷鹽反應(yīng)生成具揮發(fā)性的AsH3 ,遇HgBr2試紙，產(chǎn)生黃色至棕色的砷斑，與定量標(biāo)準(zhǔn)砷溶液所產(chǎn)生的砷斑比較。,As3+ AsO33- AsO43-,新生態(tài)H2,SnCl2,AsH3,HgBr2,Pb(Ac)2棉花,砷 斑,（黃 棕）,AsH(HgBr)2 (黃) As(HgBr)3 (棕),試劑的作用：,S

9、nCl2 KI Pb(Ac)2棉花,SnCl2：,將As5+還原為As3+ 使KI生成的I2還原為I-，I-與Zn2+形成配離子，使AsH3 不斷產(chǎn)生。 與Zn形成鋅錫齊使H2均勻放出。 抑制SbH3生成,將As5+還原為As3+。 AsO43- + I - AsO33- + I2 抑制SbH3生成。 SbH3 + HgBr2 銻斑（干擾）,KI,除去微量硫化物（Pb2+S2- PbS) 與 HgBr2作用生成色斑，干擾結(jié)果。 控制AsH3放出速度。 Pb(Ac)2棉花用量多或塞得過緊，AsH3不易通過，除不盡H2S。,Pb(Ac)2棉花的作用,Ag-DDC法 （二乙基二硫代氨基甲酸銀法）,A

10、g-DDC,紅色膠態(tài)銀 510nm處比色,A 對A供,AsH3,示例1,藥典規(guī)定檢查砷鹽時(shí)，應(yīng)取標(biāo)準(zhǔn)砷溶液2.0ml（每1ml相當(dāng)于1g的As)制備標(biāo)準(zhǔn)砷斑，今依法檢查NaBr中砷鹽，規(guī)定含砷量不得超過0.0004%,問應(yīng)取供試品多少克？ 解：已知L=410-6, V=2.0ml, C=10-3mg/ml, 求S.,熱分析法：在程序控制溫度的情況下，測定物質(zhì)的物理化學(xué)性質(zhì)與溫度關(guān)系的儀器分析法。,差示掃描量熱法：程序控溫下，測量傳輸給待測物和參比物的能量差與溫度關(guān)系。E-T,差示掃描量熱法示例,原料純度的測定： 在DSC曲線圖上，純化合物的熔融峰非常尖銳，混有雜質(zhì)時(shí)則熔融峰隨著雜質(zhì)量的增加而逐

11、漸變寬，熔融起始溫度下降，峰的高度降低，熔程變大。因此，熔融峰的變化可測定物質(zhì)的純度。圖中曲線13表示純度依次下降。,三、雜質(zhì)的檢查與限量計(jì)算,雜質(zhì)限量：藥物中所含雜質(zhì)的最大容許量。 表示方法：百分之幾或百萬分之幾。,對照法：取一定量的被檢雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液和一定量供試品溶液，相同條件下處理，比較結(jié)果（遵循平行原則：供試管與對照管應(yīng)同步操作 ）。 靈敏度法：在供試品溶液加入一定量試劑，在一定反應(yīng)條件下，不得有正反應(yīng)出現(xiàn)。 比較法：取供試品一定量依法檢測，測定特定待檢雜質(zhì)的參數(shù)，與規(guī)定的限量比較，不得更大。,特殊雜質(zhì)檢查,IR：在雜質(zhì)檢查中主要用于無效或低效晶型檢查。 如：甲苯咪唑中，檢A晶型。,A晶型

12、在640cm-1有強(qiáng)吸收，在662cm-1弱吸收。 C晶型弱 有強(qiáng)吸收。,故取供試品；10%A晶型的對照品 640cm-1 662cm-1 校正吸收值 D1 D2 R = D1/D2 對照品 校正吸收值 D1 D2 R= D1/D2 供試品,若R R，則本品中的A晶型在10%以下。,薄層色譜法是藥典中最常用的特殊雜質(zhì)檢查方法 雜質(zhì)對照品法（適合雜質(zhì)已知且有對照品） Eg.枸櫞酸乙胺嗪（驅(qū)蛔靈）檢N-甲基哌嗪 供試品（50mg/ml） 雜質(zhì)對照品（50g/ml）,判斷:供試品如顯與對照品相應(yīng)的雜質(zhì)斑點(diǎn),其顏色與對照品溶液的主斑點(diǎn)比較,不得更深。,供試品溶液自身稀釋對照法 對象：雜質(zhì)結(jié)構(gòu)不明確或無

13、雜質(zhì)對照品。 條件：供試品與雜質(zhì)顯色相同，顯色靈敏 度相近。 判斷：供試品如顯雜質(zhì)斑點(diǎn), 其顏色與對照品溶液 的主斑點(diǎn)比較,不得更深。,雜質(zhì)對照品法與供試品溶液自身稀釋對照法并用,對象：藥物中存在多個(gè)雜質(zhì)。 條件：已知雜質(zhì)有對照品，采用雜質(zhì)對照品法檢 查；共存的未知雜質(zhì)或無雜質(zhì)對照品采用供 試品自身稀釋對照法檢查。,對照藥物法,對象：無雜質(zhì)對照品且雜質(zhì)斑點(diǎn)顏色與主成分斑點(diǎn) 顏色有差異。 條件：選用質(zhì)量符合規(guī)定的與供試品相同的藥物作 為雜質(zhì)對照品。 判斷：供試品如顯雜質(zhì)斑點(diǎn),不得多于對照品藥物中 雜質(zhì)斑點(diǎn)數(shù),顏色不得更深。,系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：,理論塔片數(shù) 分離度 重復(fù)性 對照溶液連續(xù)進(jìn)樣5次，A值

14、 RSD2.0% 拖尾因子0.95-1.05,第四章,藥物定量分析與分析方法驗(yàn)證,濕法破壞凱氏定氮法,凱氏定氮儀 硫酸鉀 過氧化氫 高氯酸,分解破壞有機(jī)物質(zhì)的有效、快速、簡便的方法。 原理：有機(jī)藥物 各種價(jià)態(tài)鹵素化合物 一定價(jià)態(tài)鹵化物 定性、定量、檢查 儀器裝置 錐形瓶：硬質(zhì)玻璃、磨口（500, 1000, 2000ml）。 瓶塞：空心、下端熔封一段呈螺旋狀鉑絲。 樣品：包裹在無灰定量濾紙中心 氧瓶：通O2 1min,燃燒,吸收液,干法破壞氧瓶燃燒法,紫外-可見分光光度法用于含量測定的方法一般有對照品比較法、吸收系數(shù)法、計(jì)算分光光度法。 吸收系數(shù)有百分吸收系數(shù)和摩爾吸收系數(shù)，中國藥典采用百分吸

15、收系數(shù)。 HPLC法測定供試品中主成分含量時(shí)，常用的方法是內(nèi)標(biāo)加校正因子法和外標(biāo)法。,藥品分析方法的驗(yàn)證,準(zhǔn)確度 精密度 專屬性 檢測限 定量限 線性與范圍 耐用性,準(zhǔn)確度：指用該方法測定結(jié)果與真實(shí)值接近的程度，用回收率表示。,精密度（precision):在相同條件下多次測定結(jié)果，現(xiàn)了此法的再現(xiàn)性。 可用相對平均偏差、相對標(biāo)準(zhǔn)差、標(biāo)準(zhǔn)差表示。 重復(fù)性：相同條件下，同一人員測定結(jié)果的精密度。 中間精密度：同一實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)、不同人、不同設(shè)備測定結(jié)果的精密度。 重現(xiàn)性：不同實(shí)驗(yàn)室、不同人員測定結(jié)果的精密度。 數(shù)據(jù)要求：報(bào)告標(biāo)準(zhǔn)偏差、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差、可信限,專屬性：在樣品介質(zhì)中有其他組分共存時(shí)，該法

16、對供試物準(zhǔn)確而專屬的測定能力。,檢出限：分析方法能夠從背景信號中區(qū)分出藥物時(shí)，所需樣品中藥物的最低濃度。 無需定量測定，是一種限度試驗(yàn)的參數(shù)，只需指出高于或低于該規(guī)定濃度即可，即用%、ppm或ppb。 儀器分析：以信噪比（2：1或3：1）時(shí)樣品的最低濃度來確定檢測限。,定量限：在保證具有一定可靠性（準(zhǔn)確度和精密度）的前提下，分析方法能測定出的樣品中藥物的最低濃度。它須符合一定的精密度和準(zhǔn)確度的要求。 定量限和檢測限的區(qū)別：定量限定量測藥物的最低濃度，且最低濃度須符合一定的精密度和準(zhǔn)確度。檢測限是估計(jì)值，無需定量，沒有精密度、準(zhǔn)確度的要求。,線性是指在給定范圍內(nèi)，供試物濃度與結(jié)果成線性關(guān)系。 U

17、V法：標(biāo)準(zhǔn)系列，濃度點(diǎn)n =5; A = 0.3.0.7 建立回歸方程C=aA+b；r0.9999。 HPLC法：標(biāo)準(zhǔn)系列，濃度點(diǎn)n =57; 以C對h或A或與內(nèi)標(biāo)物的峰面積之比， 建立回歸方程r0.9999。,范圍：指達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性、測試方法適用的高低限度或量的區(qū)間。 原料藥和制劑含量測定：范圍應(yīng)為測試濃度的80%120%。 制劑含量均勻度檢查：范圍應(yīng)為測試濃度的70%130%。,耐用性：在測定條件下有小的變動時(shí)，測定結(jié)果不受影響的承受程度。 典型的變動因素有：被溶液的穩(wěn)定性、樣品提取次數(shù)、時(shí)間等。 HPLC法變動因素有：流動相組成與pH，色譜柱，柱溫，流速等。 GC法變動因素

18、有：色譜柱，固定相，擔(dān)體，柱溫，進(jìn)樣口和檢測器溫度等。,生物樣品分析方法,在測定生物樣品中藥物及其代謝物時(shí)，一般要在測定前進(jìn)行樣品的前處理，即進(jìn)行分離、純化、濃集。 一、常用品種的種類、采集和貯藏 生物樣品包括各種體液和組織，常用是血液（血漿、血清、全血）、尿液、唾液。,二、生物樣品分析其前處理技術(shù),（一）除蛋白質(zhì)目的：使結(jié)合型的藥物釋放出來，以便測定藥物的總濃度；去除蛋白質(zhì)也可預(yù)防提取過程中蛋白質(zhì)發(fā)泡，減少乳化的形成，以及可以保護(hù)儀器性能，延長使用期限。,去除蛋白質(zhì)方法：1.加入與水相混溶的有機(jī)溶劑2.加入中性鹽 3.加入強(qiáng)酸 4.加入含鋅鹽及銅鹽的沉淀劑5.酶解法,第五章,巴比妥類藥物的分

19、析,一、巴比妥類藥物的結(jié)構(gòu),鎮(zhèn)靜催眠藥，巴比妥酸的衍生物。,1,巴比妥類藥物的環(huán)狀結(jié)構(gòu)中含有酰亞胺基團(tuán)， 易發(fā)生互變異構(gòu)，在水溶液中發(fā)生二級電離， 因此本類藥物的水溶液顯酸性。,典型藥物,苯巴比妥 (phenobarbital) R2 -C6H5 司可巴比妥鈉 (secobarbital sodium) R1 -CH2CH=CH2 硫噴妥鈉(thiopetal sodium) C2上S取代物的鈉鹽,弱酸性 水解反應(yīng) 與重金屬離子的反應(yīng) 與香草醛的反應(yīng) 紫外吸收光譜特征,二、巴比妥類藥物的理化特性,母核部分 的反應(yīng),與強(qiáng)堿成鹽：,結(jié)構(gòu)中酰亞胺，水解，放出氨氣使 紅色石蕊試紙變藍(lán)。,與銀鹽的反應(yīng),

20、可溶,白色沉淀,1，5，5-三取代的巴比妥類藥物，只能生成可溶性一銀鹽。,棕紅色,與碘試液的反應(yīng) 與高錳酸鉀的反應(yīng) 司可巴比妥+KMnO4 MnO2,棕色,三、鑒別試驗(yàn),丙二酰脲類鑒別反應(yīng)（銀鹽、銅鹽） 取代基的鑒別 不飽和取代基的鑒別 芳環(huán)的鑒別苯巴比妥 （甲醛硫酸反應(yīng)、硝酸，亞硝酸) 硫元素的鑒別,五、含量測定,銀量法 溴量法 司可巴比妥,適于5位取代基中含雙鍵的巴比妥類,司可巴比妥+Br2 產(chǎn)物 （定量過量） Br2（剩余）+ 2KI 2KBr + I2 I2 + 2Na2S2O3 2NaI + Na2S4O6,芳酸及其酯類藥物的分析,第六章,一、水楊酸類藥物,水楊酸 阿司匹林 對氨基水

21、楊酸鈉,典型藥物的結(jié)構(gòu),二、苯甲酸類藥物,典型藥物的結(jié)構(gòu),苯甲酸及其鈉鹽,一、阿司匹林中特殊雜質(zhì)的檢查,阿司匹林在空氣中久放置時(shí)，易發(fā)生顏色變 化，其原因是阿司匹林水解產(chǎn)生水楊酸，其酚羥基被氧化成醌式有色雜質(zhì)。 游離水楊酸（比色法檢查） 水楊酸含酚羥基能與高鐵反應(yīng)呈紫堇色,二、對氨基水楊酸鈉中特殊雜質(zhì)的檢查,間氨基酚的檢查 Ch.p采用雙相滴定法進(jìn)行檢查 間氨基酚溶于乙醚，而對氨基水楊酸鈉不溶。在乙醚-水相中用鹽酸滴定，用消耗鹽酸的量控制其限量。,酸堿滴定法 亞硝酸鈉滴定法（永停法指示終點(diǎn)） 雙相滴定法,直接滴定法,阿司匹林、布洛芬原料藥均可采用此法測定含量，其原理基于游離羧基具有酸性。,溶劑

22、：中性乙醇 滴定劑：NaOH溶液 指示劑：酚酞 討論：為何用中性乙醇為溶劑？ 防止阿司匹林酯結(jié)構(gòu)水解，致使測定結(jié)果 偏高，故不用水為溶劑。 為何選用酚酞？ 強(qiáng)堿滴定弱酸，化學(xué)計(jì)量點(diǎn)偏堿性，故選 用堿性區(qū)變色的酚酞。 滴定時(shí)應(yīng)不斷振搖且稍快地進(jìn)行，防止局 部堿度過大而促使其水解。,兩步滴定法（阿司匹林片、腸溶片）,中和 （目的：除去酒石酸、枸櫞酸、水解產(chǎn)物、水楊酸、醋酸的干擾 ） 水解與測定 中和后的溶液中，加入定量過量的氫氧化鈉液，置水浴上加熱使酯結(jié)構(gòu)水解，迅速放冷至室溫，再用硫酸滴定液(0.05mol/L）滴定剩余的堿，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。 每1ml氫氧化鈉溶液（0.1mol/L）

23、相當(dāng)于阿司匹林（分子量180.16）的量是 18.02mg,雙相滴定原理：,苯甲酸鈉易溶于水，其水溶液呈堿性，可用鹽酸滴定液滴定，但在滴定過程中析出的游離酸不溶于水，并且使滴定終點(diǎn)的pH突躍不明顯，不利于終點(diǎn)的正確判斷。因此，利用苯甲酸能溶于有機(jī)溶劑的性質(zhì)，在水相中加入與水不相混溶的有機(jī)溶劑乙醚，置分液漏斗中滴定，滴定過程中產(chǎn)生的苯甲酸不斷萃取入有機(jī)層中，減少苯甲酸在水中的濃度，使滴定反應(yīng)完全，終點(diǎn)清晰，同時(shí)可降低苯甲酸的離解。 指示劑：甲基橙 終點(diǎn)：水層顯持續(xù)橙紅色,第七章,芳香胺類藥物的分析,HCl,鹽酸普魯卡因,對乙酰氨基酚 (解熱鎮(zhèn)痛),腎上腺素 去氧腎上腺素,二、特殊雜質(zhì)的檢查,酮體

24、檢查（腎上腺素類藥物中均檢查酮體 ） 雜質(zhì)來源:原料殘存 檢查方法:UV法檢測 利用酮體在310nm波長處有最大吸收，而藥物本身在此波長處幾乎沒有吸收，規(guī)定一定濃度溶液在310nm波長處的吸收度限制酮體的量。,三、含量測定,亞硝酸鈉滴定法（鹽酸普魯卡因的含量測定采用該法） 非水溶液滴定法,猩紅色,普魯卡因,測定原理： Ar-NH2+NaNO2+2HCl Ar-N2+Cl- 指示終點(diǎn)的方法： 永停滴定法（ChP、BP） 外指示劑法（KI淀粉糊劑或試紙） 2NaNO2+2KI+4HCl2NO+I2+2KCl+2NaCl+2H2O,反應(yīng)速度 NaNO2+ HCl HNO2+ NaCl HNO2+ H

25、Cl NO+Cl-+ H2O Ar-NH2 Ar-NH-NO Ar-N=N-OH Ar-N=N+Cl-,NO+Cl-,慢,快,快,KBr+HCl HBr NOBr K大 HCl NOCl,HNO2,HNO2,加入適量溴化鉀（目的：加速反應(yīng)， 增加NOBr 濃度） 測定時(shí)加鹽酸的其作用為： 重氮化反應(yīng)速度加快。 酸度增高能增加重氮鹽的穩(wěn)定性。 防止生成偶氮氨基化合物。,測定條件：,提示：有機(jī)堿的鹽酸鹽需加醋酸汞。 有機(jī)堿的硫酸鹽，只滴至HSO4-。 若堿性較弱，終點(diǎn)不明顯，可加醋酐。 如：非水滴定法測定鹽酸丁卡因含量所用的試劑：高氯酸、結(jié)晶紫、冰醋酸、醋酐、醋酸汞。,非水滴定：,鹽酸利多卡因,+

26、,溶劑：冰醋酸（加醋酸汞消除氫鹵酸的干擾，加醋酐以提高弱堿性并滴至HSO4-） 滴定劑：高氯酸（0.1mol/L） 指示劑：結(jié)晶紫或電位法指示終點(diǎn),第八章雜環(huán)類藥物的分析,典型藥物的結(jié)構(gòu),異煙肼 尼可剎米,pKb=8.8,二、鑒別試驗(yàn),吡啶環(huán)的開環(huán)反應(yīng) （戊烯二醛反應(yīng) 、二硝基氯苯反應(yīng) ） 酰肼基團(tuán)的反應(yīng)（還原反應(yīng) 、縮合反應(yīng) ）,異煙肼INH,黃至黃棕,戊烯二醛反應(yīng),尼可剎米,黃色,深紅色,二硝基氯苯反應(yīng),Oxidant: I2、Br2、KBrO3、AgNO3,還原反應(yīng),香草醛,異煙腙（黃色）,縮合反應(yīng),三、有關(guān)物質(zhì)檢查,異煙肼中游離肼的檢查 (來源:原料引入、降解產(chǎn)生) 薄層色譜法 中國藥

27、典對異煙肼原料及注射劑中，游離肼的檢查，均采用TLC(硫酸肼對照),托烷類藥物的分析,一、基本結(jié)構(gòu)與化學(xué)性質(zhì),典型藥物的結(jié)構(gòu),硫酸阿托品 氫溴酸東莨菪堿,*,深紫色,莨菪酸,Vitali反應(yīng)為托烷類生物堿的特征反應(yīng)。本類藥物與發(fā)煙硝酸共熱，水解并得深紫色的三硝基衍生物。,非水滴定法測含量，正確判斷反應(yīng)的摩爾比,硫酸阿托品測定（堿性較強(qiáng)的一元堿 ）1：1 (BH+)2SO42- + HClO4 (BH+)ClO4- +(BH+)HSO4- 硫酸奎寧測定（二元堿 ）1：3 (C20H24N2 H+)2SO4 + 3HClO4 (C20H24N2 2H+)2ClO4- +(C20H24N2 2H+)

28、HSO4-ClO4- 硫酸奎寧片的測定： 硫酸奎寧片劑堿化處理，生成奎寧游離堿，再用高氯 酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定 1：4,吩噻嗪類藥物的分析,鹽酸氯丙嗪、鹽酸異丙嗪,硫氮雜蒽母核,與金屬離子絡(luò)合呈色（原理）,紅色,本類藥物的紫外特征吸收，主要由母核三環(huán)的系統(tǒng)所產(chǎn)生，一般具有三個(gè)峰值。 max:205, 254,300nm min:220nm,280nm 最強(qiáng)峰多在250265nm。,鹽酸氯丙嗪注射液的測定,VC在鹽酸氯丙嗪最大吸收波長254nm處有吸收，干擾注射液的測定。選用306nm波長測定鹽酸異丙嗪注射液的含量時(shí)，VC在此波長處則不產(chǎn)生干擾。,苯并二氮雜卓類藥物,環(huán)庚三烯,卓,一、結(jié)構(gòu)特征與典型藥

29、物,典型藥物的結(jié)構(gòu),地西泮 氯氮卓,含量測定,一、非水溶液滴定法（原料藥）,基本原理,二、比色法,酸性染料比色法 基本原理 影響因素 應(yīng)用示例 鈀離子比色法（選擇性地用于未被氧化的吩噻嗪類藥物的測定）,酸性染料：溴百里酚藍(lán)、溴酚藍(lán)、溴甲酚紫和溴甲酚綠 原理: 酸性染料比色法定義,水相最佳pH值的選擇 pH值過小，酸性染料以分子狀態(tài)存在。 酸性染料 生成的離子對在有機(jī)相中溶解度大，染料在有機(jī)溶劑中不溶或很少溶解；同時(shí)要求生成的離子對，于其最大吸收波長處有較高的吸收度 濃度太高，則易產(chǎn)生嚴(yán)重的乳化層。 有機(jī)溶劑的選擇 （氯仿、二氯甲烷、苯、甲苯） 水分的影響,紅色,癸氟奮乃靜,鈀離子比色法,指示終

30、點(diǎn)方法：自身指示劑法、電位法或永停法,三、提取中和法,在用提取中和法測定生物堿類藥物時(shí)，最常用的堿化試劑為 氨水 ，最常用的提取溶劑為 。,第九章 維生素類藥物的分析,第一節(jié)維生素A的分析,R：-H 維生素A醇VA retinol -COCH3 維生素A醋酸酯Vitamin A acetate -COC15H31 維生素A棕櫚酸酯VA palmitate,共軛多烯側(cè)鏈的環(huán)己烯,8 6 4 2,9 7 5 3 1,含量測定,UV法（三點(diǎn)校正法） 為何要采用三點(diǎn)校正法？ 測定原理 測定方法,三點(diǎn)校正法,雜質(zhì)的吸收在310-340nm波長范圍內(nèi)呈一條直線，且隨波長的增大吸收度減小。 物質(zhì)對光的吸收具

31、有加和性。,波長的選擇： 1 VitA醋酸酯的max（328nm） 2 3 分別在1的兩側(cè)各選一點(diǎn)（316，340nm）,第二節(jié)維生素B1的分析,氨基嘧啶環(huán)CH2噻唑環(huán)(季銨堿),鑒別試驗(yàn),硫色素反應(yīng),硫色素（藍(lán)色熒光）,第三節(jié)維生素C的分析,L抗壞血酸,*,*,含量測定,碘量法 原理、方法、討論 如何消除抗氧劑的干擾?,指示劑 淀粉指示液,H+,取本品約0.2g，精密稱定，加新 沸過的冷水100ml與稀醋酸10ml使溶 解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴 定液（0.1mol/L）滴定，至溶液顯藍(lán) 色，在30秒內(nèi)不褪。每1ml碘滴定液 (0.1mol/L)相當(dāng)于8.806mg的C6H8O6,（

32、1）條件:醋酸，減慢VitC被O2氧化速度,（2）溶劑:新沸過的水 （3）立即滴定 （4）附加劑干擾的排除,趕走水中O2,減少O2的干擾,片劑 滑石粉 過濾,注射劑 抗氧劑 ,丙酮 甲醛,Na2SO3 NaHSO3 Na2S2O3 Na2S2O5,10,甾體激素類藥物的分析,環(huán)戊烷駢多氫菲母核,2,10,6,21,1、腎上腺皮質(zhì)激素（皮質(zhì)酮的衍生物）：代表物為可的松、潑尼松、地塞米松。 結(jié)構(gòu)特點(diǎn)： A環(huán) 具有43酮基 C環(huán) 有OH D環(huán) 有CCH2OH（醇酮基），多數(shù)為-羥基。,主要分析基團(tuán)： 43酮基,皮質(zhì)酮,常用的兩種四氮唑鹽,2，3，5三苯基氯化四氮唑（TTC） max = 480490

33、nm,藍(lán)四氮唑（BT）max = 525nm,TTC,2e,(H),BT,2e,BT單甲 （紅色）,雙甲（藍(lán)色）,三苯甲 （紅色）,四氮唑比色法,2e,藍(lán)四氮唑（BT） BT 單甲 BT-雙甲,堿的種類及加入順序的影響：常用氫氧化四甲基銨，一般先加四氮唑鹽溶液后加堿。 應(yīng)用范圍：本法廣泛適用于皮質(zhì)激素的測定。,（2）雌激素（卵泡激素）,雌二醇,炔雌醇,結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：A環(huán)為苯環(huán)；C3上有酚羥基；D環(huán)C17位有羥基；C10無甲基。,2、雌激素,主要用于雌激素藥物的分析。 Kober反應(yīng)分兩步：,硫酸乙醇,呈黃色,水或稀酸,呈桃紅色,max = 465nm max =515nm,Kober反應(yīng),雌激素,

34、（I）max=372nm,+,（II）max=465nm,（III）max=515nm,（黃）,（桃紅）,雌二醇-3-甲醚,3、孕激素 也稱孕酮或黃體激素。代表物：黃體酮(progesterone) 結(jié)構(gòu)特征：A環(huán)具有43酮基；D環(huán)C17上有 甲基酮COCH3,黃體酮,4 -,2 -,藍(lán)紫色,黃體酮可與亞硝基鐵氰化鈉反應(yīng)生成藍(lán)色,第十一章抗生素類藥物的分析,內(nèi)酰胺類抗生素的分析 氨基糖苷類抗生素的分析 四環(huán)素類抗生素的分析,抗生素：在低微濃度下即可對某些生物的生命活動有特異抑制作用的化學(xué)物質(zhì)的總稱。,一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì),代表物：青霉素類和頭孢菌素類。 青霉素族抗生素在酸、堿、羥胺、青霉素酶、Cu2

35、+等金屬離子條件下易發(fā)生水解和分子重排，導(dǎo)致-內(nèi)酰胺環(huán)的破壞。,* *,*,3個(gè)手性C,-內(nèi)酰胺環(huán) 氫化噻嗪環(huán),* *,母核為7-氨基頭孢菌烷酸（7-ACA）,2個(gè)手性C,第三節(jié),氨基糖苷類抗生素,二、鑒別試驗(yàn),麥芽酚反應(yīng) 坂口反應(yīng),鏈霉素,麥芽酚,此反應(yīng)為鏈霉素所特有,麥芽酚反應(yīng),鏈霉胍,鏈霉胍,坂口反應(yīng),第四節(jié) 四環(huán)素類抗生素,一、結(jié) 構(gòu),1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,四并苯環(huán)母核 代表物：四環(huán)素、土霉素、金霉素。,*,四環(huán)素,差向四環(huán)素,脫水四環(huán)素,差向脫水四環(huán)素,pH26,pH26,pH2,pH2,（黃粉末）,（淡黃）,（橙紅）,（磚紅）,抗生素的效價(jià)測定主要分

36、為微生物檢定法 和HPLC兩大類。,第十二章,藥物制劑分析,片 劑 的 分 析,重量差異檢查 崩解時(shí)限檢查 含量均勻度檢查 溶出度檢查 釋放度檢查,一、常規(guī)檢查,一般,特殊,重量差異檢查： 以稱量法測定每片與平均片重之間的差異程度。凡規(guī)定檢查含量均勻度的片劑，可不進(jìn)行此項(xiàng)檢查。,規(guī)定：20片中超出重量差異的藥片不得多于2片，并不得有1片超出限度的一倍。,崩解時(shí)限：固體制劑在規(guī)定的檢查方法和液體介質(zhì)中，崩解溶散并通過篩網(wǎng)所需時(shí)間的限度。 含量均勻度：小劑量的片劑、膜劑、膠囊劑或注射用的無菌粉末等每片（個(gè)）含量偏離標(biāo)示量的程度。制劑凡檢查含量均勻度，不再檢查重量差異。 溶出度：藥物從片劑（或膠囊劑

37、）等固體制劑在規(guī)定的溶劑中溶出的速度或程度。,附加劑： 淀粉、糊精、蔗糖、乳糖及少量的硬脂酸鎂、滑石粉等。 附加劑的干擾及排除 糖類 硬脂酸鎂,含量測定方法,糖類主要干擾氧化還原類型，尤其對采用強(qiáng)氧化劑（KMnO4,KBrO3）測定含量的主藥有影響。 排除：采用氧化勢稍低的Ce(SO4)2作滴定劑。,Fe2+ + Ce4+ Ce3+ +Fe3+,干擾：（1）Mg2+干擾配位滴定； （2）硬脂酸根干擾非水滴定。 排除：（1）加掩蔽劑（如酒石酸）消除Mg2+的干擾。 （2）當(dāng)硬脂酸根干擾時(shí)，排除的方法有： 以草酸為掩蔽劑；以有機(jī)溶劑提取后再測定。,含量相當(dāng)于標(biāo)示量的百分?jǐn)?shù),三、結(jié)果的表示,注射劑的

38、分析,注射液常見干擾及排除：干擾的反應(yīng)類型？ 抗氧劑的干擾及排除 加入掩蔽劑 加酸分解 加入弱氧化劑 利用主藥與抗氧劑UV差異,二、含量測定,抗氧劑：亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉、維生素C等。 干擾的反應(yīng)類型：碘量法、鈰量法、亞硝酸鈉滴定法。 干擾排除：1、加掩蔽劑：甲醛、丙酮 實(shí)例： 1、Vc注射劑的碘量法測定,2、加酸分解：亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉，可被強(qiáng)酸分解，如磺胺嘧啶鈉注射液采用亞硝酸鈉滴定法，其中亞硫酸氫鈉的排除為： NaHSO3 + HCl NaCl + H2O + SO2,A,243 254 306,3、利用主藥和抗氧劑紫外吸收光譜的差異 例：鹽酸氯丙嗪

39、注射液的測定 鹽酸氯丙嗪 max（254nm，306nm），Vc的 max （243nm） 在306nm處測定，按E=115計(jì)算,Vc,鹽酸氯丙嗪,第十三章 生物制品分析概論,生化藥物：從動物、植物及微生物提取的，也可用生物-化學(xué)半合成或用現(xiàn)代生物技術(shù)制得的生命基本物質(zhì)及其衍生物、降解物及大分子結(jié)構(gòu)修飾物等。 生物合成藥物：由微生物代謝所產(chǎn)生的藥物和必須利用微生物及其酶轉(zhuǎn)化反應(yīng)共同完成的半合成藥物。 酶活力測定：以酶為分析對象，測定樣品中酶的含量或活性。 酶法分析：以酶為分析工具或試劑，測度樣品中酶以外其他物質(zhì)的含量。,一、定 義,生物制品特殊雜質(zhì)的是包括： 外源DNA 突變蛋白 殘余抗生素,

40、生物制品的種類,疫苗類藥物 抗毒素及抗血清類藥物 （如抗狂犬病血清 ） 血液制品 重組DNA制品 診斷制品 氨基酸 等,生物制品具有的特點(diǎn)：,分子量不是定值 結(jié)構(gòu)確證難 需檢查生物活性 能參與、影響和調(diào)控人體代謝和生理功能 需做效價(jià)測定,第十四章中藥及其制劑概論,中藥指紋圖譜:中藥材、提取物或中藥制劑等經(jīng)適當(dāng)處理后，采取一定的分析手段，得到能標(biāo)示該中藥材、提取物或中藥制劑特性的共有峰的圖譜。 顯微鑒別:利用顯微鏡來觀察藥材及含藥材粉末的中成藥的組織構(gòu)造、細(xì)胞形狀及化合物的特征，以鑒別中藥的真?zhèn)巍?中藥指紋圖譜的分類,按測度手段分類：中藥化學(xué)指紋圖譜和中藥生物指紋圖譜。 按應(yīng)用對象分類：中藥材指紋圖譜、中藥原料藥指紋圖譜、生產(chǎn)工藝過程中間產(chǎn)物指紋圖譜和中藥制劑指紋圖譜。,中藥材生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范為GMP。 液體制劑提取分離