抗癌藥物發(fā)展策略-XXXX.ppt

1、新型抗腫瘤藥物,一、 概述 二、新型抗腫瘤藥物（實(shí)例） 三、靶向藥物的現(xiàn)實(shí)和展望,一、 概述,惡性腫瘤是嚴(yán)重危害人類生命的疾病。 抗腫瘤藥物占全球藥品市場(chǎng)總銷售額的4.6, 年 增速15%以上，2004年，全球抗腫瘤藥品市場(chǎng)規(guī) 模已突破238億美元，2010年將突破500億美元。 目前世界上抗腫瘤藥物最暢銷的主要品種除紫杉 醇（銷售額為億美元左右）外，還有吉西他 賓、拓樸替康和多西紫杉。新技術(shù)推動(dòng)抗腫瘤新 藥不斷問世，對(duì)原有品種逐步產(chǎn)生替代。,抗腫瘤藥品市場(chǎng)結(jié)構(gòu)及其變化趨勢(shì),到2010年，分子靶向藥物的市場(chǎng)份額將突破40%! 美羅華（Rituxan），該藥物主要是用來治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和非霍奇

2、金淋巴瘤，2007年銷售額為22億美元。其他的“重磅炸彈”還包括：銷售額為12億美元的赫賽?。℉erceptin）、24億美元的阿瓦斯?。ˋvastin）,傳統(tǒng)化療的缺點(diǎn),對(duì)腫瘤細(xì)胞的非特異性殺傷 腫瘤細(xì)胞的耐藥 療效提高不明顯 對(duì)某些類型腫瘤的治療力不從心 毒副反應(yīng)明顯,腫瘤治療新手段分子靶向藥物,腫瘤分子靶向治療：在腫瘤分子細(xì)胞生物學(xué)的基礎(chǔ)上，利用腫瘤組織或細(xì)胞所具有的特異性(或相對(duì)特異的)結(jié)構(gòu)分子作為靶點(diǎn)，使用某些能與這些靶分子特異結(jié)合的抗體、配體等達(dá)到直接治療或?qū)蛑委熌康牡囊活惎煼ā?Six Essential Alterationsin Cell Physiology in Mal

3、ignancy,Targets for classical drugs?,Targets for novel drugs?,Hanahan (2)法尼基焦磷酸醋(farnesylp yrophosphate,FPP)類似物，如R115777和手霉素(manumycin )等，通過與FPP競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合FTase，而抑制FTase的活性; (3) CAAX肽,FPP雙底物抑制劑，如BMS185878和BMS186511等，可與CAAX膚及FPP競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合FTase，抑制FTase的活性,臨床實(shí)驗(yàn) 目前有三種FTIs 在進(jìn)行臨床試驗(yàn), 包括SCH66336 (Sarasar Lonafarnib )、

4、R115777 (Zarnestra Tipifarnib)和BMS214662 期臨床研究顯示FTI-R115777對(duì)進(jìn)展期乳腺癌的治療有效。 FTIs的I,II, 期臨床資料來看，單藥治療進(jìn)展期實(shí)體瘤的效果并不理想， 需與其他藥物聯(lián)合使用，而不能單獨(dú)做一線抗腫瘤藥。FTI可作為放射增敏劑、血管生成抑制劑，并與其他抗癌藥物有協(xié)同作用 對(duì)于Ras突變率很低的乳腺腫瘤，F(xiàn)TIs不論單藥還是聯(lián)合化療藥物或TAM對(duì)乳腺癌治療都有效。,優(yōu)缺點(diǎn)： 優(yōu)點(diǎn)：毒副作用低。 缺點(diǎn)：腫瘤細(xì)胞對(duì)FTIs可產(chǎn)生耐藥性。但這種現(xiàn)象不是由于法尼基轉(zhuǎn)移酶亞基的突變或細(xì)胞內(nèi)藥物積蓄濃度的變化以及多藥耐藥基因的擴(kuò)增等原因?qū)е碌?/p>

5、，迄今為止對(duì)FTIs耐藥的發(fā)生率及機(jī)制還不十分清楚。,2、 c-kit受體酪氨酸激酶特異性抑制劑 Glivec, 格列衛(wèi) 【藥物種類】小分子化合物 ，結(jié)構(gòu)為C30H35N7SO4。 【靶點(diǎn)】c-kit受體酪氨酸激酶特異性抑制劑。 【作用機(jī)制】與ATP競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合酪氨酸激酶催化部位的結(jié)合位點(diǎn)，使得激酶不能發(fā)揮催化活性，底物的酪氨酸殘基不能被磷酸化，不能與下游的效應(yīng)分子進(jìn)一步作用，從而導(dǎo)致細(xì)胞增殖受抑，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。 【適應(yīng)癥】 2002年美國(guó)FDA和歐盟批準(zhǔn)上市治療CML。 【開發(fā)公司】Novatis,c-kit受體屬型酪氨酸激酶受體家族， 在人體許多正常細(xì)胞表面都有表達(dá)，與其配體干細(xì)胞因子結(jié)合后

6、受體酪氨酸激酶功能區(qū)被激活，產(chǎn)生自身磷酸化，完成細(xì)胞內(nèi)外的信呼傳導(dǎo)，對(duì)這些細(xì)胞的分化發(fā)育以及功能維持起重要作用。 近年來研究發(fā)現(xiàn)很多腫瘤細(xì)胞表面有c-kit受體的異常高表達(dá)，并發(fā)現(xiàn)了其編碼基因的活化突變，推測(cè)突變與腫瘤的發(fā)生存在著一定的聯(lián)系。,約有95% 的慢性髓細(xì)胞性白血病(CML) 病人體內(nèi)有一種異常的“費(fèi)城染色體”, 它是9 號(hào)和22 號(hào)染色體長(zhǎng)臂末端易位形成, 從而有BCR/ABL 融合蛋白的表達(dá), 其翻譯產(chǎn)物酪氨酸激酶P210, 活性異常高。 本品能特異性抑制該酶活性, 而治療各期CML, 亦可抑制c-kit(為干細(xì)胞因子受體) ,ARG (AB l 相關(guān)基因) 和血小板生長(zhǎng)因子受體

7、(PDGFR ) 酪氨酸激酶活性而治療胃腸間質(zhì)瘤(GIST )。,STI-571 格列衛(wèi)作用機(jī)制,配體結(jié)合部位,與ATP結(jié)合部位,酪氨酸激酶 接觸反應(yīng)區(qū),格列衛(wèi)的臨床應(yīng)用慢性粒細(xì)胞白血病,N1027,慢性期532例 (干擾素治療失敗),400mg/天,加速期235例,400600mg/天,急變期260例,400600mg/天,結(jié) 果,慢性期 加速期 急變期,血液學(xué)緩解率 完全血液學(xué)緩解率 退回慢性期 細(xì)胞遺傳學(xué)緩解率 完全緩解 部分緩解,88%(84.9-90.6) 88 - 49(45.1-53.8) 30 19,63%(56.5-69.2) 28 24 21%(16.2-27.1) 14

8、7,26%(20.9-31.9) 4 19 13.5(9.6-18.2) 5 8.5%,胃腸間質(zhì)腫瘤的治療,占胃腸原發(fā)腫瘤1 超過30是惡性的（即轉(zhuǎn)移性或浸潤(rùn)性） 對(duì)常規(guī)化療和放療抗拒 能進(jìn)行手術(shù)切除的病人占很小一部分 特異的表達(dá)c-kit,Imatinib Mesylate is the “Proof of Principle” for these Drugs,Imatinib Mesylate targets the bcr-abl TK very specifically. Bcr-abl is the root cause of CML, essentially a “monogene

9、tic disease”,3、 EGFR酪氨酸激酶的抑制劑 Iressa gefitibin-吉非替尼 【藥物種類】高特異性的表皮生長(zhǎng)因子受體（Epidermal Growth Factor Receptor，EGFR）酪氨酸激酶的抑制劑。分子量為447, 屬苯胺喹唑啉類。 【靶點(diǎn)】ZD-1839 【作用機(jī)制】它明顯抑制EGFR 跨膜細(xì)胞表面受體上酪氨酸激酶的自身磷酸化, 從而阻止細(xì)胞增殖, 促進(jìn)凋亡。本品亦能抑制腫瘤新生血管生成。 【適應(yīng)癥】2003 年被美國(guó)FDA批準(zhǔn)治療對(duì)標(biāo)準(zhǔn)含鉑類和紫杉醇方案耐藥的NSCLC。 晚期晚期非小細(xì)胞肺癌（Non-Small Cell Lung Cancer，

10、NSCLC）三線藥物治療。 【開發(fā)公司】阿斯利康,4、抗-HER2的單克隆抗體 赫賽汀(herceptin,trastuzumab) 【藥物種類】人源化的抗-P185HER2的單克隆抗體 【靶 點(diǎn)】HER2 抗原 【作用機(jī)制】與HER2 結(jié)合，阻斷腫瘤細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。 HER-2 是一種跨膜的人類表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體，在相當(dāng)一部分惡性腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)化上起了關(guān)鍵性的作用。HER-2過度表達(dá)導(dǎo)致腫瘤的形成并使癌細(xì)胞更具有侵襲性和耐藥性。 HER-2受體作為靶向治療已引起廣泛注意. 通過腫塊免疫組化的測(cè)定, 在 2530的原發(fā)性乳腺癌患者發(fā)現(xiàn)有 HER-2 基因的表達(dá), 目前國(guó)外多用于轉(zhuǎn)移性乳腺癌的治療,

11、其最主要付反應(yīng)是心臟毒性. 【適 應(yīng) 癥】乳癌 【開發(fā)公司】基因泰克(Genentech),Production of anti-HER2 monoclonal antibodies,Production of monoclonal antibodies,Myeloma cells,Immortal hybridoma,Assay for antibody production, selection of a single cell, multiplication,Spleen,Cell fusion,B cells,Herceptin: Humanised anti-HER2 monoclo

12、nal antibody,High affinity (Kd=0.1nM) and specificity 95% human, 5% murine decreased potential for immunogenicity,Dr. Herbert Boyer,1976 Robert Swanson and Dr. Herbert Boyer founded Genentech on April 7. 生長(zhǎng)激素抑制素(Somatostatin) 胰島素,Dr. Herbert Boyer加州大學(xué)的生化學(xué)家、DNA重組領(lǐng)域的奠基人,5、CD20單克隆抗體 利妥西單抗(Rituxan)ritux

13、imab，美羅華 【藥物種類】是一個(gè)由小鼠可變區(qū)與人恒定區(qū)結(jié)合的對(duì)CD20 抗原特異嵌合性單抗。 【靶 點(diǎn)】 CD20 【作用機(jī)制】 CD20是B細(xì)胞的特異表面分子, 與細(xì)胞生長(zhǎng)和分化有關(guān)。此抗原抗體復(fù)合物使已耐藥的惡性淋巴瘤細(xì)胞復(fù)敏,也能抑制細(xì)胞增殖,促進(jìn)細(xì)胞凋亡。 【適 應(yīng) 癥】1997年第一個(gè)獲FDA批準(zhǔn)上市的抗腫瘤抗體藥物，用于治療B細(xì)胞性非何杰金淋巴瘤。 【開發(fā)公司】IDEC 400mg支的價(jià)格大約為21000元人民幣。 2003年Rituxan的銷售額達(dá)16.1億美元,Rituximab抗CD20單克隆抗體,可與CD20特異結(jié) 合的鼠源可變區(qū),人源恒定區(qū),人源IgG1的Fc片斷,6

14、、 艾比特思 （Erbitux） 【通 用 名】Cetuximab 【藥物種類】嵌合單克隆抗體。 【靶點(diǎn)】EGRFR HER1 【作用機(jī)制】Cetuximab與EGRFR競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合，阻斷腫瘤細(xì)胞的信傳導(dǎo)，抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，誘導(dǎo)細(xì)胞調(diào)亡。 【適 應(yīng) 癥】FDA2004年2月批準(zhǔn)為晚期直、結(jié)腸癌三線用藥。 【開發(fā)公司】Imclone 、Bristol-Myerssguibb,7、Mylotarg（Gemtuzumab ozogamicin） 【藥物種類】 【藥物種類】抗CD33單抗和抗腫瘤抗生素calicheamicin的偶聯(lián)物 【靶點(diǎn)】 CD33 【作用機(jī)制】90 %的幼稚白血病粒細(xì)胞表達(dá)CD33

15、 (骨髓干細(xì)胞不表達(dá)) ?？笴D33單抗和抗腫瘤抗生素calicheamicin偶聯(lián)結(jié)合,作為“彈頭”藥物，calicheamicin對(duì)腫瘤細(xì)胞有強(qiáng)烈的殺傷作用。 【適 應(yīng) 癥】2000 年,美國(guó)FDA 批準(zhǔn)使用于60 歲以上的急性粒細(xì)胞性白血病患者,在治療前患者的白血病原始細(xì)胞計(jì)數(shù)少于30000/ mL 。 據(jù)報(bào)道，以calicheamicin為“彈頭”，可分別與靶抗原各不相同的抗體進(jìn)行連接，制備用于治療不同腫瘤的抗體藥物。這表明，特定的化療藥物與不同的抗體偶聯(lián)，可以作為一種技術(shù)平臺(tái)，制備系列化的抗體藥物。,8、ZEVALIN 【藥物種類】放射免疫制劑 【靶點(diǎn)】 CD20 【作用機(jī)制】使用了

16、專門攻擊B細(xì)胞表面的CD20蛋白質(zhì)分子的單克隆抗體，同時(shí)攜帶有放射性元素釔-90。由于淋巴瘤細(xì)胞對(duì)放射線較為敏感，釔-90所釋放的射線可以與單克隆抗體聯(lián)合，形成“交叉火力”，深入腫瘤內(nèi)部殺死細(xì)胞，比僅僅使用單克隆抗體殺死腫瘤更加有效。單獨(dú)使用的抗體，藥力難以到達(dá)腫瘤深部。 【適 應(yīng) 癥】 2002年被FDA批準(zhǔn)治療NHL 。 【開發(fā)公司】先靈公司 歷史意義：它是用于治療NHL的FDA批準(zhǔn)的第一個(gè)放射性免疫治療的單抗藥物，放射免疫療法是一個(gè)很有前景的治療癌癥的方法，利用單抗的專一性和同位素放射的殺傷性可快速有效的殺傷癌細(xì)胞。,Zevalin的作用機(jī)制,ADCC CDC 巨噬細(xì)胞吞噬 射線的短距離

17、 殺傷,Y-90具有放射作用 釋放 射線 作用距離5mm 半衰期64.1小時(shí),（二）、血管生長(zhǎng)抑制劑 20 世紀(jì)70年代初，F(xiàn)olkman 首先提出“腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移都依賴于新生血管形成”的概念。這為靶向血管的抗腫瘤研究奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ) 。 實(shí)體腫瘤生長(zhǎng)必須依賴持續(xù)和廣泛的血管生成。血管生成為腫瘤組織提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和氧氣，血管又是發(fā)生轉(zhuǎn)移的主要途徑。針對(duì)血管形成的某些因子及其關(guān)鍵步驟進(jìn)行干預(yù)，可切斷腫瘤血供及其轉(zhuǎn)移途徑，對(duì)腫瘤的治療和防止腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有重要意義。,血管生成的調(diào)節(jié) Hanahan等于1996年提出了血管生成的開關(guān)平衡假說，認(rèn)為血管生成受血管生成促進(jìn)因子和血管生成抑制因子的共同調(diào)控。腫

18、瘤細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和巨噬細(xì)胞受缺氧、系統(tǒng)刺激、基底膜通道的信息傳遞等使局部微環(huán)境發(fā)生變化之因素的作用而合成和釋放上述因子。當(dāng)二者之間的平衡被打破,血管生成因子濃度上升或血管生成抑制因子濃度下降時(shí)，即發(fā)生血管生成。 1. 血管生成因子 現(xiàn)在研究最多的是bFGF和VEGF，二者具有協(xié)同作用。2. 血管生成抑制因子 現(xiàn)已識(shí)別的血管生長(zhǎng)抑制因子有：血管抑素、內(nèi)皮抑素、血小板因子4、金屬蛋白酶組織抑制劑等。,1、以VEGF或VEGFR為靶點(diǎn) 阿瓦斯汀 Avastin 【通 用 名】Bevacizumab 【藥物種類】人源性的抗VEGF單抗 【靶點(diǎn)】VEGF（抗原） 【作用機(jī)制】Bevacizumab與VE

19、GF結(jié)合，阻斷腫瘤血管為細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)，抑制腫瘤血管生長(zhǎng)，抑制腫瘤細(xì)胞。 【適 應(yīng) 癥】2004年2月上市FDA批準(zhǔn)用于治療晚期結(jié)、直腸癌的一線用藥。 【開發(fā)公司】基因泰克（Genentech） 2005銷售額4-5億美金,AVASTIN抗VEGF單克隆抗體,可與VEGF特異結(jié) 合的鼠源可變區(qū),人源IgG1的Fc片斷,2、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑(metalloproteinaseinhibitiorsMMPI) Marimastat(BB2516)：Marimastat是新一代人工合成的MMPI，也是最早進(jìn)入期臨床試驗(yàn)的口服MMPI。 Marimastat是一類異羥酸衍生物，其結(jié)構(gòu)類似于間質(zhì)組織膠

20、原酶降解的膠原分子起始段，能可逆的結(jié)合MMP含鋅離子的活性區(qū)，從而抑制其活性。 能促使纖維組織包繞腫瘤，進(jìn)而顯著減少腫瘤生長(zhǎng)和局部浸潤(rùn)；具有抗腫瘤血管生成作用；可以與多種藥物如紫杉醇等聯(lián)合應(yīng)用，并有協(xié)同作用。 目前已經(jīng)完成了該藥的、期臨床試驗(yàn)，正在美國(guó)及歐洲多中心進(jìn)行期臨床試驗(yàn)，治療非小細(xì)胞肺癌、小細(xì)胞肺癌、胰腺癌、結(jié)腸癌和乳腺癌患者。,AG3340是一種新的MMP合成抑制劑。AG3340的作用機(jī)制可能與其抑制腫瘤新生血管生成、細(xì)胞增殖、腫瘤轉(zhuǎn)移和誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡有關(guān)。 AG3340、臨床試驗(yàn)已取得可喜的成果，期臨床試驗(yàn)用于治療非小細(xì)胞肺癌復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移、前列腺癌轉(zhuǎn)移和多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤。,3、直

21、接抑制內(nèi)皮細(xì)胞和（或）促進(jìn)其凋亡的藥物 主要包括TNP-470，內(nèi)皮抑素(Endostatin)、血管抑素(Angiostatin)等 。 TNP-470是人工合成的煙曲霉素的代謝衍生物，可抑制內(nèi)皮細(xì)胞的增生、移動(dòng)和管腔形成，抗血管生成能力是煙曲霉素的50倍以上，且毒副作用大大減少。TNP-470是細(xì)胞抑制效應(yīng)，而非細(xì)胞毒效應(yīng)；并可抑制細(xì)胞周期調(diào)控因子依賴激酶，抑制DNA合成及細(xì)胞進(jìn)入G1期。目前該藥已經(jīng)進(jìn)入臨床期試驗(yàn)治療包括老年晚期實(shí)體瘤、淋巴瘤和急性白血病等。,a.血管抑素angiostatin源于纖溶酶原,能抑制血管形成,可用腺病毒局部轉(zhuǎn)染. 血管抑素對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制, 起增效作用. b

22、.內(nèi)皮抑素- endostatin 與化療+免疫聯(lián)用起增效, 且能延長(zhǎng)病情穩(wěn)定時(shí)間. 迄今為止動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中抗腫瘤血管生成最有效的藥物。 但令人遺憾的是這兩種抑制因子的期臨床研究都只取得了很有限的療效，這也說明臨床前研究和臨床研究之間還是有較大差異的。,（三）抑制 COX-2酶 類藥物 與結(jié)腸癌關(guān)系比較密切。環(huán)氧合酶分1型和2型，COX-1為人體內(nèi)固有酶，機(jī)體各組織均能表達(dá)，在許多正常生理過程中發(fā)揮作用；COX-2為誘導(dǎo)型，只在炎癥和腫瘤時(shí)高表達(dá)。,COX-II,COX-2 晶體結(jié)構(gòu) 美麗的蝴蝶型蛋白,COX-2抑制劑 作用機(jī)理的誕生,1971 年 John Vane 報(bào)道了研究的結(jié)論 Aspir

23、in-like drugs 的 作用機(jī)制 是抑制 前列腺素的合成,NSAID 的治療作用及其 主要的副作用都是阻礙PGE形成的結(jié)果. 因?yàn)樗@個(gè)偉大的發(fā)現(xiàn) Sir John Vane 獲得 1982年 諾貝爾醫(yī)學(xué)獎(jiǎng),COX-2 引發(fā)腫瘤的機(jī)制,COX-2 與 腫瘤血管 生成 刺激 VEGF、bFGF表達(dá)上調(diào)、腫瘤體積增大. COX-2 與 腫瘤的浸潤(rùn) 和 轉(zhuǎn)移 COX-2 與 免疫抑制,惡性腫瘤,轉(zhuǎn)染COX-2,MMP-1、MMP-2,COX-2 ,PGE2 組胺,COX-2,抑制 NK、LAK、TCL 細(xì)胞的活性 抑制 IL-2、IFN- 受體的表達(dá),免疫監(jiān)視功能 細(xì)胞殺傷能力,浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移,美

24、國(guó) Montana 大學(xué)的研究者根據(jù)檢索1995-2000年 關(guān)于 cox-2 抑制劑的文獻(xiàn) 進(jìn)行分析研究結(jié)果顯示: 規(guī)律服用 NSAID 可減少一般人群 結(jié)、直腸癌 的發(fā)生率 非阿司匹林類NSAID (如塞來昔布) 可減少 FAP 患者的腺瘤 推 測(cè):在常規(guī)內(nèi)鏡監(jiān)測(cè)下除外科手術(shù)治療外 塞來昔布 可能成為有效的輔助治療藥物 之一 有望預(yù)防癌變和復(fù)發(fā). NSAID可作為結(jié)直腸癌的輔助治療藥物,North GL - Ann Pharmacother 35 (12) 1638-43 Dec 2001,COX-2抑制劑(Celecoxib)對(duì)胰腺癌的影響,0.438,0.212,抑瘤率51.6%,對(duì)照

25、組,治療組,移植瘤近似體積(cm3),0.2,0.4,P0.05,結(jié) 果,謝傳高等，世界華人消化雜志2003年7月;11(7):979-981 Crane CH,et al. Am J Clin Oncol. 2003 Aug;26(4):S81-4,結(jié)論: COX-2 可能參與了腫瘤新生血管生成1 而 PGE2可能在該過程中起著重要的 介導(dǎo)作用1 COX-2 抑制劑塞來昔布具有抑制腫瘤 生長(zhǎng)和對(duì)抗腫瘤新生血管生成的作用1 塞來昔布 可以增加胰腺癌對(duì)放化療的 敏感性, 即具有協(xié)同治療的作用2,COX-2 抑 制 劑在腫瘤其它方面的應(yīng)用,逆轉(zhuǎn)耐藥： COX-2可上調(diào) MDR-1 (P-gp) 的

26、表達(dá)并激 活其活性, 而且這一作用與劑量有依賴性. COX-2 抑制劑 NS-398 可阻止 COX-2 介導(dǎo)抑制 MDR-1 的 表達(dá)上調(diào) 及 活性. 預(yù)防胃癌,J. Bio - Chem 77 (41): 38915-38920 2002,（四）腫瘤耐藥逆轉(zhuǎn)劑 (resistance reversal agents, RRA) 臨床化療失敗的重要原因是腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥性。 腫瘤耐藥多為多藥耐藥（MDR），也有單藥耐藥，產(chǎn)生的可能原因是藥物代謝障礙、DNA修復(fù)機(jī)制障礙、DNA多聚酶活性改變等。另外，耐藥是凋亡抑制的表現(xiàn)。一些與凋亡抑制相關(guān)的癌基因（如bcl-2, bcr/abl,

27、NF-B等）的表達(dá)產(chǎn)物可阻斷或阻礙多種因素（如化療藥物、輻射、激素等）誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞凋亡，產(chǎn)生耐藥性。 谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移(glutathioneStranserases,GST) 同工酶異常的表達(dá)與腫瘤對(duì)抗癌藥物的耐受性的發(fā)生有一定聯(lián)系。 多藥耐藥逆轉(zhuǎn)戰(zhàn)略為：以P糖蛋白(Pglycoproein,Pgp) GST及上述耐藥相關(guān)蛋白為作用靶點(diǎn)，篩選、設(shè)計(jì)合成耐藥相關(guān)蛋白逆轉(zhuǎn)劑；尋找對(duì)耐藥腫瘤有效的凋亡誘導(dǎo)劑。,以P-gp為靶點(diǎn)： 第一 代逆轉(zhuǎn)劑維拉帕米和環(huán)抱素A雖然有一定效力，但它們是P-gp的底物，是P-gp較弱的抑制劑. 第二代逆轉(zhuǎn)劑主要有dex一維拉帕米、valsodar (PSC833),

28、 bricoda(VX-710)等。缺點(diǎn)在于逆轉(zhuǎn)劑在MDR1/P-gp和CYP3A4的底物特異性方面有顯著的重疊，抑制了抗癌藥物的肝代謝和腸代謝，能明顯地改變同時(shí)應(yīng)用的抗癌藥物的藥物動(dòng)力學(xué)。 第三代逆轉(zhuǎn)劑，目前處于臨床試驗(yàn)階段的有，Tariquidar(XR9576),Zosuquidar(LY335979),Laniquidar(R101933),ONT-093,Elacridar(GF1210918)等。研究表明，這些逆轉(zhuǎn)劑通過直接與P-gp結(jié)合，使P-gp喪失外排藥物功能，從而抑制抗癌藥物自胞內(nèi)泵出細(xì)胞外，增加細(xì)胞內(nèi)抗癌藥物的積聚，逆轉(zhuǎn)MDR。它們不是P4503A4的底物，也就不改變合用

29、的抗癌藥物的藥代動(dòng)力學(xué)。,以GST為靶點(diǎn) 依他 尼 酸 EA是第一個(gè)用于臨床的GST抑制劑，它通過與GSH的結(jié)合來抑制GST。EA作為化療增敏劑與塞替派合用治療晚期腫瘤曾進(jìn)人工期臨床，但其利尿作用和缺乏對(duì)GST同工酶的專屬性限制了其在臨床上的應(yīng)用。 TLK 199是一個(gè)多肽類小分子GSH類似物，與EA不同的是,TLK199可以專屬性抑制GST。目前，美國(guó)FDA已經(jīng)批準(zhǔn)其用于治療骨髓增生異常綜合征(MDS)的I/期臨床試驗(yàn)。 TLK 286是目前研究最成熟的由腫瘤細(xì)胞內(nèi)GSDr激活的前藥，該藥由Telik公司開發(fā)。其作用機(jī)制是藥物進(jìn)人體內(nèi)后由GST活性部位酪氨酸-7殘基催化TLK286的消除反應(yīng)

30、，生成GSH類似物和活性藥物氮芥類烷化劑。，單獨(dú)使用TLK286治療晚期鉑耐藥的非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)、鉑耐藥的卵巢癌、轉(zhuǎn)移性乳腺癌的期臨床正在進(jìn)行中，美國(guó)FDA已經(jīng)批準(zhǔn)Telik公司進(jìn)行治療鉑耐藥的卵巢癌、晚期非小細(xì)胞肺癌的期臨床試驗(yàn)。,反義藥物,反義技術(shù)(antisense technology) 是近20 年 來發(fā)展的一種全新的藥物設(shè)計(jì)方法,主要是根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則和核酸雜交原理,利用人工合成、天然存在的互補(bǔ)寡核苷酸片段,與目的基因(單鏈、雙鏈DNA) 或信使核糖核酸(mRNA) 的特定序列相結(jié)合,從基因復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、剪接、轉(zhuǎn)運(yùn)翻譯等水平上調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá),干擾遺傳信息從核酸向蛋白質(zhì)

31、的傳遞,從而達(dá)到抑制、封閉或破壞靶基因的目的。 利用這一技術(shù)研制的藥物稱為反義藥物( antisense drugs) , 通常指反義寡核苷酸( antisense oligonucleotides) , 主要包括反義DNA (ASODN) , 反義RNA(ASORN) ,多肽核酸(PNA) ,核酶(ribozyme) 等。,反義藥物 選擇的反義靶點(diǎn)主要包括：癌基因類：c-myc,c-myb,bcl-2,N-Ras,K-Ras,H-Ras,c-jun,c-fos,cdc-2和c-mos等；宿主基因類：多藥耐藥基因、周期素(cyclin)、前胸腺素、T細(xì)胞受體、表皮生長(zhǎng)因子受體、蛋白激酶C等；細(xì)

32、胞因子類：IL-2,IL-1,IL-1等；病毒類：人T淋巴細(xì)胞病毒、Rous肉瘤病毒等；抑癌基因類：p53等。,福米韋生(fomivirsen) 是FDA 批準(zhǔn)上市的 第一個(gè)反義藥物,由21 個(gè)硫代脫氧核苷酸組成。通 過對(duì)人類巨細(xì)胞病毒(CMV) mRNA 的反義抑制發(fā) 揮特異而強(qiáng)大的抗病毒作用,用于局部治療艾滋病 (AIDS) 病人并發(fā)的CMV 視網(wǎng)膜炎。,AS-ODN未來問題 提高AS-ODN在體內(nèi)和細(xì)胞內(nèi)的穩(wěn)定性； 增強(qiáng)AS-ODN導(dǎo)入靶細(xì)胞的能力和效率； 作為藥物必須合成足夠量，并要降低成本； 研究AS-ODN體內(nèi)代謝專一性分布情況； AS-ODN的專一性效能和非專一性作用的意義； A

33、S-ODN的作用機(jī)制； AS-ODN及其代謝物的安全性、不良反應(yīng)，尤其是長(zhǎng)期毒性； AS-ODN作為藥物在管理中的特殊問題。,端粒酶抑制劑 端粒（Telomere）是真核細(xì)胞染色體末端的特殊結(jié)構(gòu)。人端粒是由6個(gè)堿基重復(fù)序列(TTAGGG)和結(jié)合蛋白組成。端粒有重要的生物學(xué)功能，可穩(wěn)定染色體的功能,防止染色體DNA降解、末端融合,保護(hù)染色體結(jié)構(gòu)基因DNA，調(diào)節(jié)正常細(xì)胞生長(zhǎng)。 正常細(xì)胞由于線性DNA復(fù)制5末端消失，隨體細(xì)胞不斷增殖，端粒逐漸縮短，當(dāng)細(xì)胞端?？s至一定程度，細(xì)胞停止分裂，處于靜止?fàn)顟B(tài)。 故有人稱端粒為正常細(xì)胞的“分裂鐘” (Mistosis clock) ，端粒長(zhǎng)短和穩(wěn)定性決定了細(xì)胞壽

34、命，并與細(xì)胞衰老和癌變密切相關(guān)。,Centromere,Telomere,Telomere,Ends of linear chromosomes,端粒酶(telomerease)是一種RNA依賴的DNA聚合酶，具有逆轉(zhuǎn)錄酶活性，能以本身RNA為模板，在染色體末端合成六聚脫氧核苷酸TTAGGG的重復(fù)序列，以補(bǔ)償細(xì)胞分裂時(shí)的染色體末端縮短，解決“末端復(fù)制問題”. 由人類端粒酶RNA(human telomerase RNA,hTER)、端粒酶相關(guān)蛋白1(human telomeraseassociated protein 1;hTEP1)和端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶（human telomerase reve

35、rse transcriptase, hTERT）三組分構(gòu)成.,在正常人體細(xì)胞中，端粒酶的活性受到相當(dāng)嚴(yán)密的調(diào)控，只有在造血細(xì)胞、干細(xì)胞和生殖細(xì)胞，這些必須不斷分裂克隆的細(xì)胞之中，才可以偵測(cè)到具有活性的端粒酶。當(dāng)細(xì)胞分化成熟后，必須負(fù)責(zé)身體中各種不同組織的需求，各司其職，于是，端粒酶的活性就會(huì)漸漸的消失。 對(duì)細(xì)胞來說，本身是否能持續(xù)分裂克隆下去并不重要，而是分化成熟的細(xì)胞將背負(fù)更重大的使命，就是讓組織器官運(yùn)作，使生命延續(xù)，但不是永續(xù)，這種世代交替的輪回即是造物者對(duì)于生命設(shè)計(jì)的巧思。,端粒酶存在于絕大部分正常人體細(xì)胞，但在腫瘤細(xì)胞中廣泛表達(dá)，提示它可能為惡性腫瘤細(xì)胞無限增殖所必需。抑制端粒酶的活

36、力，將有可能阻止腫瘤細(xì)胞惡性增殖；因此，端粒酶抑制劑有望成為一種高效低毒的新型抗腫瘤藥.,端粒酶抑制劑研究策略： 針對(duì)端粒酶RNA組分hTER或催化亞基hTERT的mRNA設(shè)計(jì)反義核苷酸； 用小分子化合物抑制hTERT的活性中心； 破壞底物-端粒的結(jié)構(gòu)，如破壞端粒的鳥嘌呤四聚體； 針對(duì)其他一些未知相關(guān)蛋白干擾酶和底物的結(jié)合； 利用端粒酶間接抑制劑調(diào)控端粒酶的活力，如蛋白激酶C抑制劑、腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)分化劑等。,最近幾年來端粒酶抑制劑 1 )反義核苷酸、反義肽苷酸、硫代反義核苷酸對(duì)端粒酶活性的抑制 11反義核苷酸 反義核苷酸是能抑制基因表達(dá)的RNA，它能與靶細(xì)胞的DNA互補(bǔ)形成雙鏈而抑制靶基因的表達(dá)

37、 12 反義肽苷酸 反義肽苷酸(peptide nucleic aids,PNAs) 是一種多肽骨架的核酸模擬物，具有與天然DNA相似結(jié)構(gòu)特征。PNAs通過WatsonCrick原則與DNA/RNA結(jié)合，且不易被核酶和蛋白酶降解，有望成為良好的抗癌藥物。 13 硫代反義核苷酸 硫代反義核苷酸(phosphorothioate oligonucleotid, PsOND)是具有與哺乳動(dòng)物端粒序列相同的5d(TTAGGG)3序列。它可以抑制端粒酶的活性，用于腫瘤的治療。,2) 核苷類似物對(duì)端粒酶活性的抑制 逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，如AZT(3Azido2,3dideoxythymidine)、AZTTP(

38、AZT5triphosphate)、5AZACR(5azacytidine)、ddl(dideoxyinosine)、ddT1,1,1trichloro2,2bis(4chlorophenyl)ethane等來抑制端粒酶活性，使其不能保護(hù)染色體末端而使細(xì)胞凋亡來達(dá)到治療腫瘤的目的。 3) 細(xì)胞分化誘導(dǎo)劑對(duì)端粒酶活性的抑制 正常人類細(xì)胞經(jīng)過分化，端粒酶活性受到抑制。是否永生化的腫瘤細(xì)胞也可以通過誘導(dǎo)分化抑制端粒酶活性來達(dá)到治療的目的呢？ hTERT是端粒酶活性的重要決定因素。從而證明細(xì)胞分化誘導(dǎo)劑通過抑制hTERT轉(zhuǎn)錄而降低端粒酶活性。目前已用到的誘導(dǎo)分化劑主要有：全反式維甲酸、，25二羥維生素

39、D3、二甲亞砜、丁酸等。,(4) （ribozyme）是一類具有酶活性的反義RNA，除特意封閉靶基因RNA外，同時(shí)具有切割靶RNA的作用，使其降解而失去生物學(xué)功能。由于端粒酶的催化亞單位hTERT決定端粒酶的活性，而hTERTmRNA是拳頭型核酶極好的作用靶點(diǎn)。 (5) 其他藥物對(duì)端粒酶活性的抑制 某些兒茶酸EGCG(epigallocatechin gallate)具有強(qiáng)而直接抑制人成單核細(xì)胞白血病U937細(xì)胞和人直腸癌UT29細(xì)胞的端粒酶活性。細(xì)胞外多糖GA3(Gymnodinium sp A3)在10.0mg/ml就對(duì)人類白血病細(xì)胞系K562顯示細(xì)胞毒性，使其端粒酶活性降低。,進(jìn)一步研究

40、: (1)阻斷端粒酶復(fù)合物的組裝和轉(zhuǎn)運(yùn)過程，包括阻斷SnRNA在細(xì)胞核內(nèi)的轉(zhuǎn)錄，RNA的修飾、加工、轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞質(zhì)并與蛋白質(zhì)組裝，再返回細(xì)胞核的各步驟。(2)阻斷端粒DNA與端粒酶活性位點(diǎn)的結(jié)合。(3)通過對(duì)端粒酶活性細(xì)胞內(nèi)調(diào)節(jié)機(jī)制的調(diào)空阻斷端粒酶活性，如p53、p21、c-myc、sp1基因等。(4)阻斷端粒酶蛋白催化亞基的功能。(5)制備突變端粒酶RNA與內(nèi)原性RNA競(jìng)爭(zhēng)端粒酶蛋白。(6)端粒酶蛋白組分抑制劑。(7)端粒酶細(xì)胞周期依賴性調(diào)節(jié)。,存在一些問題：(1)正常人類生殖細(xì)胞、表皮細(xì)胞、腸黏膜基底干細(xì)胞等具有再生能力的細(xì)胞中，均可檢測(cè)到不同水平端粒酶活性的表達(dá)，端粒酶活性抑制劑能否對(duì)這些

41、細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用還需考慮。(2)部分腫瘤細(xì)胞具有較長(zhǎng)端粒(10kb)，隨著有絲分裂進(jìn)行，端?？s短是個(gè)緩慢過程，在此情況下，端粒酶抑制劑是否有效？ (3)人類細(xì)胞中可能還存在不依賴端粒酶的端粒替代途徑，端粒酶抑制劑能否導(dǎo)致所有腫瘤細(xì)胞死亡還有待證實(shí)？ (4)人類腫瘤細(xì)胞中亦有端粒酶陰性的細(xì)胞，可能導(dǎo)致對(duì)端粒酶活性的耐藥。(5)正常細(xì)胞的端粒較多數(shù)腫瘤細(xì)胞長(zhǎng)，且原始干細(xì)胞較少進(jìn)行有絲分裂，其端粒縮短速度低于腫瘤細(xì)胞，故端粒酶抑制劑的療程在正常細(xì)胞端粒耗盡前會(huì)停止。這樣，當(dāng)抑制端粒酶活性的治療結(jié)束后，正常細(xì)胞端粒酶活性是否得到修復(fù)還有待研究。,當(dāng)前對(duì)端粒動(dòng)力學(xué)及端粒酶的作用、調(diào)控機(jī)制認(rèn)識(shí)尚不深入，所以，要將端粒酶抑制劑最終應(yīng)用于治療惡性腫瘤尚需更深入的研究和探索。,2009年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)授予美國(guó)科學(xué)家伊麗莎白布萊克本(Elizabeth H.Blackburn) 、卡羅爾格雷德(Carol W.Greider)、和杰克紹斯塔克(Jack W.Szostak)。 以表彰他們“發(fā)現(xiàn)端粒和端粒酶是如何保護(hù)染色體的”。,三、靶向藥物的現(xiàn)實(shí)和展望,Targeted Therapy in the Common Solid Tumors: The Reality,Why the Difference?,Most solid