白色念珠菌與抑菌效力檢查方法-推薦課件

1、1,白色念珠菌檢查方法,1、增菌培養(yǎng) 取供試液10ml（相當(dāng)于供試品1g、ml、10cm2）直接或處理后接種至適量（不少于100ml）的沙氏葡萄糖肉湯培養(yǎng)基中，培養(yǎng)4872小時(shí)。 2、分離培養(yǎng) 取上述培養(yǎng)物劃線接種于沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上，培養(yǎng)2448小時(shí)（必要時(shí)延長(zhǎng)至72小時(shí)）。,2,結(jié)果判斷,白色念珠菌在沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落呈乳白色偶見淡黃色，表面光滑有濃酵母氣味，培養(yǎng)時(shí)間稍久則菌落增大，顏色變深、質(zhì)地變硬或有皺摺。若平板上無菌落生長(zhǎng)或生長(zhǎng)的菌落與上述菌落形態(tài)特征不符，判供試品未檢出白色念珠菌。,3,2、如平板上生長(zhǎng)的菌落與上述菌落形態(tài)特征相符或疑似，應(yīng)挑選23個(gè)菌落分別接

2、種至念珠菌顯色培養(yǎng)基平板上，培養(yǎng)2448小時(shí)（必要時(shí)延長(zhǎng)至72小時(shí)）。若平板上無綠色或翠綠色的菌落生長(zhǎng)，判供試品未檢出白色念珠菌。 3、若平板上生長(zhǎng)的菌落為綠色或翠綠色，挑取相符或疑似的菌落接種于1%吐溫80玉米瓊脂培養(yǎng)基上，培養(yǎng)2448小時(shí)。取培養(yǎng)物進(jìn)行染色，鏡檢及芽管試驗(yàn)。,4,4、芽管試驗(yàn)挑取1%吐溫80玉米瓊脂培養(yǎng)基上的培養(yǎng)物，接種于加有一滴血清的載玻片上，蓋上蓋玻片，置濕潤的平皿內(nèi)，置3537、13h，置顯微鏡下觀察，可見到由孢子長(zhǎng)出短小芽管。 5、若上述疑似菌為非革蘭陽性菌，顯微鏡未見厚膜孢子、假菌絲、芽管，判供試品未檢出白色念珠菌。,5,抑菌劑效力測(cè)定,概述 1、抑菌劑效力檢查法

3、系用于測(cè)定滅菌、非滅菌制劑中抑菌劑的活性，以評(píng)價(jià)最終產(chǎn)品的抑菌效力，同時(shí)也可用于指導(dǎo)生產(chǎn)企業(yè)在制劑研發(fā)階段抑菌劑的確定。 2、如果藥物本身不含有充分的抗菌活性，那么應(yīng)根據(jù)制劑特性（如水溶液制劑）添加適宜的抑菌劑，以防止制劑在正常儲(chǔ)存和使用過程中可能發(fā)生微生物污染和大量繁殖尤其多劑量包裝的制劑，避免因藥物微生物污染及對(duì)患者造成傷害。,6,3、所有抑菌劑都具有一定的毒性，而且在貯存過程中其有效性有可能因藥物的活性成分提高或降低，為保證藥品的質(zhì)量和用藥安全，添加防腐劑的量應(yīng)根據(jù)制劑本身是否具抗菌活性，保持最低有效量并在藥品包裝上注明添加抑菌劑的名稱和數(shù)量。,7,培養(yǎng)基 1、胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基 2、

4、胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基 3、 沙氏葡萄糖肉湯培養(yǎng)基,8,培養(yǎng)基的適用性檢查,菌種 銅綠假單胞菌pseudomonasaeruginosa） 金黃色葡萄球菌（staphycococcus） 白色念球菌（Candida albicans） 黑曲霉（Aspergillus niger） 大腸埃希菌（Escherichia Coli） 菌液的制備同控制菌培養(yǎng)基適用性檢查,9,適用性檢查,取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌各50100cfu，分別注入無菌平皿中，立即傾注胰酷胨大豆瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿，混勻，凝固，置3035培養(yǎng)48小時(shí)，計(jì)數(shù)；取白色念珠菌、黑曲霉各50100cfu

5、，分別注入無菌平皿中，立即傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿，混勻，凝固，置2025培養(yǎng)72小時(shí)，計(jì)數(shù)；同時(shí)，用對(duì)應(yīng)的對(duì)照培養(yǎng)基替代被檢培養(yǎng)基進(jìn)行上述試驗(yàn)。,10,結(jié)果判定,被檢培養(yǎng)基的菌落數(shù)與對(duì)照培養(yǎng)基菌落數(shù)相比大于70%，菌落形態(tài)大小應(yīng)與對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落一致。判該培養(yǎng)基的適用性檢查符合規(guī)定。,11,抑菌劑效力測(cè)定,供試品分類 為了達(dá)到試驗(yàn)?zāi)康?，根?jù)供試品的給藥途徑和用途將供試品分為四類，以便標(biāo)準(zhǔn)的制定和執(zhí)行，但對(duì)于一些抗酸性制劑和含活生物制劑應(yīng)考慮會(huì)降低有益菌的生物活性。見表,12,表 產(chǎn)品分類 類別 藥 品 1 類 注射劑、其他非腸道制劑，包括乳劑、 耳用 制劑、無菌

6、鼻用制劑及眼用制劑 2 類 局部給藥制劑、非滅菌鼻用制劑及用于 黏膜的乳劑 3 類 口服非固體制劑（非抗酸制劑） 4 類 非固體抗酸制劑,13,菌種和菌液的制備同培養(yǎng)基適用性檢查 供試品接種 1、抑菌劑效力可能受試驗(yàn)用容器特征的影響，如容器的材質(zhì)、形狀、體積及封口的方式等。因此，只要供試品每個(gè)包裝容器的裝量足夠試驗(yàn)用，同時(shí)容器便于按無菌操作的接入試驗(yàn)菌液、混合及取樣等，一般應(yīng)將試驗(yàn)菌直接接種于供試品原包裝容器中進(jìn)行貯存。,14,2、若因供試品的性狀或每個(gè)容器裝量等因素需將供試品轉(zhuǎn)移至無菌容器時(shí)，該容器的材質(zhì)不得影響供試品的特性（如吸附作用），特別應(yīng)注意不得影響供試品的PH，PH對(duì)抑菌劑的活性影

7、響很大，同時(shí)容器的口徑大小應(yīng)便于供試品的進(jìn)出及混勻。,15,3、 取包裝完整的供試品至少5份，直接接種試驗(yàn)菌，或取適量供試品分別轉(zhuǎn)移至5個(gè)適宜的無菌容器中（若試驗(yàn)菌侏數(shù)超過5株，應(yīng)增加相應(yīng)的供試品份數(shù)），每一容器接種一個(gè)試驗(yàn)菌。,16,4、1、2、3類供試品1g或1ml接種菌量為105106cfu，4類供試品中1g或1ml接種菌量為106108cfu，接種菌液的體積不得超過供試品體積的05%1% ，充分混合，使供試品中的試驗(yàn)菌均勻分布。 5、將接種的供試品在試驗(yàn)期間置2025，避光貯存，貯存溫度的變化應(yīng)盡可能控制在最小范圍，并防止被污染。,17,存活菌數(shù)測(cè)定,由于供試品中含有抑菌活性，所以菌數(shù)

8、測(cè)定方法應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證。根據(jù)菌數(shù)測(cè)定結(jié)果，計(jì)算1ml(g)供試品各試驗(yàn)菌所加的菌數(shù)及各間隔時(shí)間的菌數(shù)，并換算成lg值。,18,測(cè)定細(xì)菌用胰酷胨大豆瓊脂培養(yǎng)基，測(cè)定真菌用沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 根據(jù)產(chǎn)品類型，在規(guī)定的接種時(shí)間，分別從上述每個(gè)容器中取供試ml(g)，用pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液稀釋成1：10、1：102、1：103等稀釋級(jí)。,19,結(jié)果判斷,1、抑菌劑效力根據(jù)各間隔時(shí)間測(cè)定的菌數(shù)1.0 lg值相對(duì)于初始值（0時(shí)菌數(shù)1.0 lg值）減少程度進(jìn)行評(píng)價(jià)（見表），試驗(yàn)結(jié)果按有效數(shù)字的修約規(guī)則進(jìn)舍，保留一位小數(shù)點(diǎn)。結(jié)果符合表，要求可判斷該產(chǎn)品抑菌效力符合規(guī)定。,20,表 防腐劑抗菌效力標(biāo)準(zhǔn)

9、,1 類 供 試 品 細(xì) 菌 7天菌數(shù)下降不少于1.0 lg，14天菌數(shù)下降 不少于3.0 lg ，第14天到28天菌數(shù)不增加。 真 菌 與初始值比，到7、14、28天菌數(shù)均不增加。 2 類供 試 品 細(xì) 菌 14天菌數(shù)下降不少于2.0 lg ， 14天到28天菌數(shù) 不增加。 真 菌 與初始值比，到14、28天菌數(shù)均不增加。 3 類 供 試 品 細(xì) 菌 14天菌數(shù)下降不少于1.0 lg ， 14天到28天菌數(shù)均不增加。 真 菌 與初始值比，14、28天菌數(shù)均不增加。 4 類 供 試 品 細(xì)菌，真 菌 與初始值比，14、28天菌數(shù)均不增長(zhǎng)。 注：1、表中“不增加”是指對(duì)前一個(gè)測(cè)定時(shí)間，試驗(yàn)菌增加的數(shù)量不超過0.5 lg。 2、0時(shí)菌數(shù) 供試品加入試驗(yàn)菌，搖勻，立即取樣檢查，培養(yǎng)，計(jì)數(shù)，為0時(shí),21,舉 例,1、 氯化鈉注射液、 碳酸氫鈉注射液不含抑菌劑加入菌從初始到6h就開始無限增加，不具抑菌力，抗病毒口服液從初始到24 h對(duì)數(shù)值無變化，72h后明顯降低，具一定的抑菌力。 2、呋麻滴鼻液、硫糖鋁混懸液、阿昔洛韋滴眼液、鯨脂滴耳液、潔爾陰