丙二醛(MDA)含量的測定.ppt

1、丙二醛（MDA）含量的測定,丙二醛是膜脂過氧化最重要的產(chǎn)物之一。植物在逆境下遭受傷害與活性氧積累誘發(fā)的膜質過氧化作用密切相關。,植物生理學實驗課件,植物在逆境下遭受傷害（或衰老）與活性氧積累誘發(fā)的膜脂過氧化作用密切相關，膜脂過氧化的產(chǎn)物有二烯軛合物、脂類過氧化物、丙二醛、乙烷等。其中丙二醛（MDA：Malondialdehyde）是膜脂過氧化最重要的產(chǎn)物之一，因此可通過測定MDA了解膜脂過氧化的程度，以間接測定膜系統(tǒng)受損程度以及植物的抗逆性。,原理,丙二醛在高溫及酸性環(huán)境下可與2-硫代巴比妥酸（TBA）反應產(chǎn)生紅棕色的產(chǎn)物3,5,5-三甲基惡唑2,4-二酮（三甲川），該物質在532 nm處有一

2、吸收高峰，并且在660nm處有較小光吸收。根據(jù)其532 nm的消光值可計算出溶液中丙二醛的含量。醛、可溶性糖對此反應有干擾，在450 nm處有一吸收峰，可用雙組分分光光度法加以排除。,原理,硫代巴比妥酸,丙二醛,3,5,5-三甲基惡唑2,4-二酮 （三甲川）,儀器設備,分光光度計； 研缽； 剪刀； 恒溫水?。?試管：20 mL4 離心機。,試劑,1. 5 %三氯醋酸； 2. 0.5 %硫代巴比妥酸（用5 %三氯醋酸溶解定容）； 3. 0.05 mol L1磷酸緩沖液， pH 7.8。,材料,正常生長的以及經(jīng)逆境處理的小麥、玉米或其他植物的葉片。,方法與步驟,1取小麥植株上不同葉位的葉片35片，

3、洗凈擦干，剪成0.5 cm長的小段，混勻。 2稱取葉片切段0.3 g，放入冰浴的研缽中，加入少許石英砂和2 mL 0.05 mol L-1磷酸緩沖液，研磨成勻漿。將勻漿轉移到試管中，再用3 mL 0.05 mol L-1磷酸緩沖液，分三次沖洗研缽，合并提取液。 3在提取液中加入5 mL 0.5 %硫代巴比妥酸溶液，搖勻。 4將試管放入沸水浴中煮沸10 min，（自試管內(nèi)溶液中出現(xiàn)小氣泡開始計時）。到時間后，立即將試管取出并放入冷水浴中。 5待試管內(nèi)溶液冷卻后，3000g離心15 min，取上清液并量其體積。以0.5 %硫代巴比妥酸溶液為空白測532 nm、600 nm和450 nm處的消光值。,計算結果,式中，Vt：提取液總體積（mL）； Vs：測定用提取液體積（ml）； FW：樣品鮮重（g）。,注意事項,1可溶性糖與TBA顯色反應的產(chǎn)物在532 nm也有吸收（最大吸收在450 nm），當植物處于干旱、高溫、低溫等逆境時可溶性糖含量會增高，必要時要排除可溶性糖的干擾。 2低濃度的鐵離子能增強MDA與TBA的顯色反應，當植物組織中鐵離子濃度過低時應補充Fe3+（最終濃度為0.5 nmol L-1） 3如待測液渾濁