常見性病實驗室檢測方法的原理、方法和臨床意義PPT參考課件

1、,常見性病實驗室檢測方法的原理、方法和臨床意義,1,病原體 淋球菌 梅毒螺旋體 生殖器皰疹病毒 生殖道沙眼衣原體 乳頭瘤病毒 HIV病毒 杜克雷噬血桿菌 衣原體 念珠菌 滴蟲 疥蟲 陰虱 肝炎病毒 ,病 種 淋病 梅毒: 生殖器皰疹: 生殖道沙眼衣原體感染: 尖銳濕疣: HIV感染/艾滋病: 軟下疳: 性病性淋巴肉芽腫: 念珠菌性陰道炎: 滴蟲性陰道病: 疥瘡: 陰虱病: 肝炎（乙、丙）： ,性傳播疾病(STD)/性傳播感染(STI),2,梅毒 淋病 軟下疳 性病性淋巴肉芽腫 非淋菌性尿道炎 生殖器皰疹 尖銳濕疣 HIV/AIDS,梅毒 淋病 軟下疳 性病性淋巴肉芽腫,50-60年代 經(jīng)典性病

2、,80-90年代 監(jiān)測性病,目 前 傳染法報告病例 監(jiān)測性病,梅毒 淋病 沙眼衣原體感染 生殖器皰疹 尖銳濕疣,我國主要流行的性傳播疾?。ㄐ圆。?沙眼衣原體: 30%50% 生殖支原體: 10%40% 其它: 20%30%,梅毒 淋病 HIV/AIDS,3,性病實驗室檢測方法規(guī)范化,方法、試劑評估 技術規(guī)范 臨床應用：敏感性、特異性 疾病篩查：快速、簡便、敏感 血液篩查：大通量、高敏感 流行病學調(diào)查：取材方便、 人員培訓 管理骨干培訓 技術培訓,4,主要常見性病實驗室檢測介紹,梅毒 淋病 生殖道沙眼衣原體感染 生殖器皰疹 陰道滴蟲病 細菌性陰道病 生殖器念珠菌病,5,一、梅 毒,6,全國梅毒檢

3、測技術規(guī)范,7,梅毒及其病原體 樣品的采集和處理 病原學檢測 血清學檢測 核酸檢測 實驗室生物安全 梅毒血清學檢測實驗室質(zhì)量管理,7,常用梅毒檢測方法,病原學檢測 血清學檢測,8,病原學檢查,原理：一期、二期梅毒時，取硬下疳、扁平濕疣、黏膜斑等皮損部位組織液或淋巴結穿刺術得到的組織液，在暗視野顯微鏡下，光線從聚光器的邊緣斜射到涂片上的梅毒螺旋體而發(fā)出亮光，從而可根據(jù)其特殊形態(tài)和運動方式進行檢測。 方法：病原學檢查的主要方法有暗視顯微鏡檢查、鍍銀染色法和直接熒光法,9,病原學檢查的臨床意義,病原學方法直接鏡檢到梅毒螺旋體，在臨床可確診梅毒，且具有快速、方便、易操作的特點。 螺旋體檢查是診斷早期現(xiàn)

4、癥梅毒的最佳方法，對于患者的早期診斷、及時治療、預后和盡早切斷傳染源都有十分重要的意義。 如未見到梅毒螺旋體，并不能排除患梅毒的可能性，,10,梅毒血清學檢測分類,(1) 非梅毒螺旋體抗體檢測試驗（非特異性梅毒抗體） (2) 梅毒螺旋體抗體檢測試驗（特異性梅毒抗體）兩類方法。,11,非梅毒螺旋體抗體試驗,1、原理： 梅毒螺旋體感染人體后，宿主會產(chǎn)生抗類脂抗原的抗體，可檢測梅毒患者血中的抗類脂抗原的抗體 2、方法： 快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗 (RPR) 甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST） 性病研究實驗室試驗 (VDRL)等。,12,RPR結果,13,非梅毒螺旋體抗體試驗臨床意義,非梅毒螺旋體

5、抗原血清試驗方法簡單、快速、敏感性和特異性較好。適用于大量人群的篩查。 早期梅毒硬下疳出現(xiàn)1周-2周后，血清可呈陽性。 經(jīng)治療后血清滴度可下降并陰性，故可作為療效觀察、判愈、復發(fā)或再感染的指征。,14,梅毒螺旋體抗體試驗,1、原理：用梅毒螺旋體特異蛋為抗原，檢測梅毒患者血中特異性抗梅毒螺旋體抗原的抗體 2、方法： 梅毒螺旋體顆粒凝集試驗 (TPPA) 梅毒螺旋體血球凝集試驗 (TPHA) 梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗（TP-ELISA） 化學發(fā)光試驗 梅毒免疫層析法-梅毒快速檢測 (TP-RT) FTA-ABS 梅毒IgM抗體檢測（TP-IgM） 梅毒螺旋體蛋白印跡試驗（TP-WB）等,15,梅毒螺旋

6、體抗體試驗臨床意義,作為非梅毒螺旋體抗原血清試驗(如RPR等)初篩陽性標本的確證試驗。 梅毒患者經(jīng)過抗梅治療后，TPPA等梅毒螺旋體抗體試驗試驗仍可陽性，故TPPA等試驗陽性不能作為療效觀察的指標。 TPPA等陽性不能區(qū)分既往感染和現(xiàn)癥感染，應結合非梅毒螺旋體抗原血清試驗結果進行診斷。,16,非梅毒螺旋體抗體試驗結果解釋示意圖,早期,晚期,一期,二期,早期潛伏,晚期潛伏,三期,治療前 治療后,陽性,陰性,17,梅毒螺旋體抗體試驗結果解釋示意圖,早期,一期,二期,早期潛伏,晚期,晚期潛伏,三期,治療前 治療后,陽性,陰性,18,梅毒血清學試驗結果的臨床意義總匯,USR TPPA 意義 RPR T

7、P-ELISA VDRL TP-RT _ _ 排除梅毒 一期梅毒的早期 + + 現(xiàn)癥梅毒(梅毒孕婦所生 的嬰兒除外) + - 生物學假陽性 - + 早期梅毒經(jīng)治療后,19,梅毒血清學檢測意義,檢測目的: 臨床診斷、血液篩查、流行病學監(jiān)測 以臨床診斷為目的的檢測是為了確定梅毒感染的狀況。 以血液篩查為目的的檢測是為了防止梅毒的經(jīng)血傳播。 以流行病學監(jiān)測為目的的檢測是為了調(diào)查梅毒血清學感染率和發(fā)病率。,20,梅毒血清學檢測檢測策略及要求,檢測策略 以臨床診斷為目的兩種策略 以血液篩查為目的的檢測策略 以流行病學監(jiān)測為目的的三種檢測策略 檢測要點 根據(jù)目的選擇檢測方法及檢測策略。 可采用任何一類梅毒

8、血清學檢測方法作為篩查試驗。 檢測試劑要求 所有應用于臨床的檢測試劑均必須是經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準、在有效期內(nèi)的試劑，有批批檢合格證的試劑。推薦使用臨床質(zhì)量評估敏感性和特異性高的試劑。,21,二、淋 病,22,常用淋病檢測方法,直接顯微鏡檢查 分離培養(yǎng)淋球菌,23,直接顯微鏡檢查,原理：男性淋菌性尿道炎患者常有大量黃白色膿性分泌物，其多形核白細胞內(nèi)可找到革蘭染色陰性的雙球菌。 方法：革蘭染色為一傳統(tǒng)方法，革蘭染色將菌分為二大類，即染成紫色的革蘭陽性菌及染成紅色的革蘭陰性菌。,24,直接顯微鏡檢查的臨床意義,男性淋菌性尿道炎的尿道標本 敏感性及特異性可高達95%99%，具診斷價值。 宮

9、頸標本、無癥狀男性尿拭子及取自直腸的涂片時 敏感性僅4070%。 不推薦直接顯微鏡檢查診斷直腸和咽部淋球菌感染。 亦不能用于療后判愈。如果在多形核細胞外見到形態(tài)典型的革蘭陰性雙球菌，需做培養(yǎng)進行確證。,25,淋球菌培養(yǎng),1原理：淋球菌在適宜的培養(yǎng)基上可生長出特征性的菌落，根據(jù)菌落大小、形態(tài)、光澤、邊緣、顏色等情況，可以作為淋球菌的鑒定依據(jù)之一。 2、方法特點： 敏感性 81100%。 特異性 100% ,26,淋球菌培養(yǎng),培養(yǎng)條件 ： 35 36，含5%10% CO2，濕潤（70%濕度）的環(huán)境。 CO2環(huán)境可由CO2培養(yǎng)箱、CO2產(chǎn)氣袋及燭缸提供。使用燭缸時，應使用白色、無芳香味的無毒性蠟燭。

10、在燭缸底部放些浸水棉球以保持一定的濕度。 培養(yǎng)時間：2448小時,27,淋球菌的初步鑒定,初步鑒定淋球菌的依據(jù) 菌落特征 氧化酶試驗 革蘭染色,28,淋球菌培養(yǎng)的臨床意義,培養(yǎng)法為診斷淋病的金標準. 用于女性感染者、亞臨床感染者、以及來自直腸和咽部的感染的確診試驗。,29,生殖道沙眼衣原體感染,30,生殖道沙眼衣原體感染簡介,50年代,80年代,梅毒 淋病 軟下疳 性病性淋巴肉芽腫,梅毒 淋病 軟下疳 性病性淋巴肉芽腫 非淋菌性尿道炎 生殖器皰疹 尖銳濕疣 HIV/AIDS,2007年后,梅毒 淋病 生殖道沙眼衣原體感染 生殖器皰疹 尖銳濕疣 HIV/AIDS,31,常用生殖道衣原體感染檢測方

11、法,抗原檢測 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA） 免疫層析快速檢測 核酸檢測,32,酶聯(lián)免疫吸附試驗,1、原理：于衣原體特異性單克隆抗體形成抗原抗體復合物，通過酶聯(lián)顯色反應檢測衣原體抗原。 2、方法特點 敏感性：7997 特異性: 9799 試驗結果陰性時，不能完全排除沙眼衣原體感染，有可能是沙眼衣原體數(shù)量不足或標本采集不當?shù)木壒?33,結果判讀客觀性強，適宜于大樣本沙眼衣原體感染的檢測。 在沙眼衣原體高流行率的人群臨床和健康體檢；低流行率（小于5%）的人群中應用時，結果解釋應慎重。,酶聯(lián)免疫吸附試驗臨床意義,34,抗原快速檢測,1、 原理：利用免疫層析法原理，采用膠體金標記的沙眼衣原體抗體濾紙條

12、或卡，快速檢測標本中的沙眼衣原體抗原。 2、方法特點 簡易，方便，快速，尤其適用于基層單位 標本中需要足夠數(shù)量的沙眼衣原體抗原，否則有假陰性結果,35,抗原快速檢測臨床意義,該方法主要適用于女性患者宮頸標本的檢測，敏感性較低。 該法快速、簡便，無需特殊儀器，因此，較適合基層實驗室開展。,36,核酸擴增檢測,1、原理：核酸擴增技術是通過擴增沙眼衣原體的多拷貝基因（如隱蔽性質(zhì)粒、染色體和RNA）檢測病原體。 2、方法包括聚合酶鏈反應（PCR）、連接酶鏈反應（LCR）、等溫鏈置換擴增技術（SDA）、轉(zhuǎn)錄介導擴增技術（TMA）等。目前國內(nèi)廣泛使用的有實時熒光PCR。,37,核酸擴增檢測臨床意義,核酸擴

13、增檢測具有很高的敏感性和特異性，世界衛(wèi)生組織已推薦為擴大的生殖道沙眼衣原體感染實驗室診斷的“金標準”。 核酸擴增檢測不僅可用于宮頸、尿道標本中沙眼衣原體的檢測，也可用于男女性尿液標本的檢測。 開展核酸檢測的實驗室應通過有關部門考核取得開展臨床核酸檢測技術資格證。,38,方法評價,核酸檢測 是目前為止最好的檢測方法但存在檢測敏感性 上的局限性 ELISA抗原檢測 嚴格按操作說明進行操作是非常好的檢測方法 高通量，自動化 快速抗原檢測 操作時間短，單人份操作，但敏感性極低,39,生殖器皰疹,40,常用生殖器皰疹檢測方法,抗原檢測 抗體檢測,41,抗原檢測,1、原理：將HSV特異性單克隆抗體包被在酶

14、標板微孔壁上，捕獲標本中的HSV抗原，形成抗原抗體復合物，繼而與酶標記的二抗結合，通過酶聯(lián)顯色反應檢測HSV。 2、方法：ELISA為目前臨床上HSV抗原檢測的常用方法之一,42,抗原檢測臨床意義,生殖器皰疹感染的臨床表現(xiàn)變化多樣，臨床診斷的準確性不足50%70%，通過實驗室檢測手段可確證HSV感染,43,抗體檢測,原理：將HSV特異性抗原包被在酶標板微孔底上，捕獲標本中的HSV抗體，形成抗原抗體復合物，通過酶聯(lián)顯色反應檢測HSV抗體。 方法：有檢測IgG 和IgM 兩種ELISA方法,44,抗體檢測臨床意義,檢測抗HSV抗體的血清學試驗可用于證實既往HSV感染、回顧性診斷原發(fā)性感染，對恢復期或復發(fā)性生殖器皰疹的診斷意義不大。 HSV型特異性血清學抗體檢測是發(fā)現(xiàn)亞臨床無癥狀生殖器HSV感染者的手段之一。,45,顯微鏡檢查： 生理鹽水濕片法（幻燈） 染色法 特點:簡便、快速、價廉 敏感性只