中國藥大－國家新藥篩選實驗室制作臨床前研究.ppt

1、國家新藥篩選實驗室,中藥新藥臨床前安全性評價,目 錄,一、概述 二、臨床前安全性評價在中藥新藥創(chuàng)制 中的地位和作用 三、臨床前安全性研究所涉及的內(nèi)容 四、急性毒性試驗在新藥評價中的作用 五、長期毒性試驗在新藥評價中的作用 六、毒理學(xué)試驗結(jié)果的綜合分析 七、新藥申報資料中的常見問題分析,概 述,藥品的概念和基本要求,治療、預(yù)防和診斷疾病 安全、有效、質(zhì)量可控 安全第一,藥品非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范,Good Laboratory Practice (GLP) 美國 日本 歐盟 中國于1994年由國家科委頒布GLP，1999年由SDA簽署局長令實施GLP。,有毒與無毒的界限,如何區(qū)分藥物和毒物: 不

2、同劑量; 不同臨床主治; 不同給藥途徑; 生理鹽水(小鼠iv,LD50= 68ml/kg)； 蒸餾水(小鼠iv,LD50=4ml/kg),新藥發(fā)展的歷史,20世紀(jì)前50年：新藥發(fā)展空前迅速 1930-1950年 磺胺類藥物、抗生素、抗微生物藥物、 抗精神失常藥、抗高血壓藥、抗腫瘤藥、 抗心絞痛藥、抗心律失常藥、調(diào)血脂藥、 利尿藥、螯合劑等。,但 是,氯丙嗪： 臨床使用前沒做過幾項指標(biāo) 酶抑寧： 幾乎沒做過毒性試驗就上臨床應(yīng)用 （治療重癥肌無力）。 甲磺丁脲：人體應(yīng)用的報道和小鼠LD50測 定的報道發(fā)表在同一期的雜志上。 事實上甲磺丁脲在人體應(yīng)用前也 僅僅做了小鼠的急性毒性試驗。,有利方面,臨床

3、試用方便 發(fā)現(xiàn)新藥機會多 研究周期短 成功率高 研究新藥的積極性高,不利方面,毒理研究少; 臨床事故出現(xiàn)較多; 有些毒性在臨床使用幾年后才出現(xiàn); 不斷出現(xiàn)藥害“事件”,二硝基酚減肥引起白內(nèi)障、骨髓抑制死亡177人 乙二醇磺胺酏劑造成107人死亡 有機錫（Stalinon）膠囊引起207人視力障礙 沙利度胺（Thalidomide, 反應(yīng)停）使萬余名新生兒先天畸形 氯碘喹啉造成千人失明或下肢癱瘓,關(guān)于中藥 在中國，傳統(tǒng)上認(rèn)為絕大多數(shù)中藥無毒。 中藥在臨床上出現(xiàn)的毒性有關(guān)報道增多: 馬兜鈴酸,雷公藤，大黃蒽醌等。 新藥中的未知毒性成份越來越多。 中藥類、 部分類新藥，已經(jīng)很難用傳統(tǒng)的中醫(yī)理論闡述其

4、功能主治，從化學(xué)本質(zhì)、毒性潛力上有別于傳統(tǒng)的中藥。尤其是中藥注射劑。,開發(fā)中藥新藥必須認(rèn)識,對類、 部分類新藥毒性的了解已經(jīng)沒有傳統(tǒng)的參考背景，對其用藥的安全性就更應(yīng)加以重視。 只有通過動物的毒理學(xué)試驗才能為臨床人體試驗研究提供毒理方面的參考依據(jù)。,臨床前安全性評價在中藥新藥創(chuàng)制中的地位和作用,-,毒理學(xué)技術(shù)審評的審評依據(jù),1法律：藥品管理法 2法規(guī)：藥品注冊管理辦法 3技術(shù)指導(dǎo)原則：毒理學(xué) 4毒理學(xué)專業(yè)知識,臨床前安全評價的目的, 提供新藥危害程度的科學(xué)依據(jù) 預(yù)測上市后對人體的有害程度 淘汰危害大的 權(quán)衡有危害的 通過危害小的 理想的是沒有危害的新藥,臨床前安全評價的措施,綜合分析 權(quán)衡利弊

5、 客觀評價 為臨床安全、有效用藥，提供毒理學(xué)參考依據(jù),臨床前安全評價的作用,1. 預(yù)測臨床用藥時可能出現(xiàn)的毒性反應(yīng)； 2. 制定臨床檢測、預(yù)防措施； 3. 推算臨床研究時，人用藥的安全參考劑 量和安全范圍； 4. 確立禁忌證，限制用藥人群。,毒理學(xué)與藥學(xué)、臨床間的關(guān)系,毒理學(xué)與藥學(xué)的關(guān)系 1. 毒理評價是以藥學(xué)為基礎(chǔ)和前提的（物質(zhì)基礎(chǔ)）： 2. 藥物結(jié)構(gòu)，組分、雜質(zhì)（相關(guān)物質(zhì)）含量、理化性質(zhì)、劑型（輔料）、穩(wěn)定性等，與其毒理作用密切相關(guān)。 毒理學(xué)與臨床的關(guān)系 1. 毒理研究是為臨床服務(wù); 2. 毒理研究的思路和目的與臨床基本一致，只是主體不同，臨床前新藥的評價要密切結(jié)合臨床試驗; 3. 大多數(shù)

6、毒理學(xué)的結(jié)果最終要通過臨床來證實; 4. 臨床研究結(jié)果可能對毒理提出新的要求(彌補不足)。,綜合審評和聯(lián)系人制度,1. 促使新藥研發(fā)和創(chuàng)新思路逐步與國際接軌 2. 從審評角度引導(dǎo)新藥開發(fā)向研究行為過渡 3. 取代以往固守、套用技術(shù)指導(dǎo)原則的模式 4. 以科學(xué)方法完善藥品研制過程和審評機制,中藥的特點,化學(xué)實體（chemical entity）： 1. 多種成分（組分）的集合體； 2. 多種中藥有效成分或有效分子群并不明確； 3. 中藥中各成分之間的相互作用知之甚少；,中藥的特點,臨床治療方面的特點： 1. 中醫(yī)是復(fù)方用藥； 2. 辯證施治，病證結(jié)合； 3. 廣泛和長期的臨床應(yīng)用基礎(chǔ)；,中藥的特

7、點,藥理作用的特點： 1. 多種成分、多靶點、綜合作用； 2. 生物活性緩和； 3. 一般來說，毒副作用較低；,中藥的特點,中藥和化藥在研制程序上的差異 1. 化學(xué)藥品研制的程序： 實驗室篩選 leading compounds(先導(dǎo)化合物) 新藥開發(fā)軌道 臨床研究 生產(chǎn)與銷售 2. 中藥開發(fā)研制的程序： 臨床實踐篩選 candidate(候選化合物) 臨床驗證 新藥開發(fā)軌道 臨床研究 生產(chǎn)與銷售,中藥復(fù)方制劑,來源于長期臨床實踐，有人用歷史。 安全性評價有別于植物藥和以有效成分或有效部位制成的新制劑，更有別于化藥。,中藥臨床前安全性評價的特點,考慮： 1. 毒理學(xué)上的要求不同； 2. 動物與

8、人在毒性反應(yīng)上的差別。,毒理學(xué)上的不同,一、 急性毒性試驗 1. 給藥途徑 中藥： 1、2類藥：二種給藥途徑或動物測定LD50； 其它類別：一種臨床給藥途徑即可。 化學(xué)藥： 采用二種動物和/或給藥途徑分別測定LD50。,毒理學(xué)上的不同,一、 急性毒性試驗 2. 最大給藥量的測定 中藥： 以動物能耐受的最大濃度、最大體積的藥量單次或一日內(nèi)23次給藥。（體重、死亡分布表） 化學(xué)藥： 在測定最大給藥量時，一般采用單次給藥，而不采用一日多次給藥的方式。,毒理學(xué)上的不同,二、 長期毒性試驗 1. 三、四類中藥可免做長期毒性試驗的條件 (1) 給藥周期在一周之內(nèi)； (2) 藥材符合法定標(biāo)準(zhǔn)； (3) 無毒

9、性藥材； (4) 無18反、19畏等配伍禁忌； (5) 未經(jīng)化學(xué)處理（水、乙醇粗提除外）； (6) 難以測出LD50，或給藥劑量大于20g生藥/kg；,毒理學(xué)上的不同,此處所稱毒性藥材，系指入國務(wù)院醫(yī)療用毒性藥品管理辦法的中藥品種。即：砒石、砒霜、水銀、生馬錢子、生川烏、生草烏、生白附子、生附子、生半夏、生南星、生巴豆、斑蝥、青娘蟲、紅娘蟲、生甘遂、生狼毒、生藤黃、生千金子、生天仙子、鬧羊花、雪上一枝蒿、紅升丹、白降丹、蟾酥、洋金花、紅粉、輕粉、雄黃。 凡在近年來發(fā)現(xiàn)所研制的藥材（原料）有毒性作用或在復(fù)方中含有有毒組份的均按毒性藥材處理。,毒理學(xué)上的不同,二、 長期毒性試驗 2. 外用三、四類

10、中藥制劑，如不含毒性藥材或有毒成分，可免做長期毒性試驗。,毒理學(xué)上的不同,二、 長期毒性試驗 3. 在下述情況下，三、四類中藥可用大鼠進(jìn)行長期毒性試驗。 (1) 處方中各味中藥材符合法定標(biāo)準(zhǔn)； (2) 無毒性藥材； (3) 無18反、19畏等配伍禁忌；,毒理學(xué)上的不同,二、 長期毒性試驗 4. 在下述情況下，給藥周期可為臨床用藥期的2倍 (1) 三、四類中藥； (2) 處方中各味中藥材符合法定標(biāo)準(zhǔn)； (3) 無毒性藥材； (4) 無18反、19畏等配伍禁忌； (5) 未經(jīng)化學(xué)處理（水、乙醇粗提除外）； (6) 難以測出LD50，或給藥劑量大于20g生藥/kg；,毒理學(xué)上的不同,二、 長期毒性試

11、驗 5. 其它中藥一般要求長期毒性試驗給藥周期應(yīng)為臨床用藥期的34倍。 化學(xué)藥：一般要求長期毒性試驗給藥期應(yīng)為臨床用藥期的34倍。,毒理學(xué)上的不同,三、 特殊毒性試驗（“三致”試驗） 中藥： 1. 只有一類新藥才要求做“三致”試驗； 2.強調(diào)以體內(nèi)試驗為主。 化學(xué)藥： 1. 均做“三致”試驗； 2. 體外、體內(nèi)試驗同等重要。,毒理學(xué)上的不同,1. 致突變試驗： 一般可參照化藥的相關(guān)要求來進(jìn)行，但中藥制劑若有其特殊性時，如溶解度、pH值等問題，難以進(jìn)行體外試驗者(Ames，染色體畸變試驗)，可只進(jìn)行體內(nèi)試驗(小鼠微核試驗)。,毒理學(xué)上的不同,2 . 生殖毒性試驗： 一般生殖毒性試驗、致畸敏感期毒

12、性試驗和圍產(chǎn)期毒性試驗。 動物應(yīng)選用大鼠，其中致畸敏感期試驗需用兩種動物（大鼠和兔）進(jìn)行試驗。從節(jié)省研發(fā)單位的時間出發(fā)，致畸敏感期兔試驗和圍產(chǎn)期毒性試驗可在批準(zhǔn)進(jìn)行臨床研究后，在臨床試驗期間進(jìn)行。 以上原則要求適用于一般的一類新藥。對部分具有特殊性的新藥，可免做部分或全部試驗者，可由申報單位提出申請，充分說明理由，經(jīng)SDA藥品審評中心批準(zhǔn)后可免做。如部分抗腫瘤藥、老年性用藥、搶救藥物（用藥次數(shù)極少、用藥時間短）等。,毒理學(xué)上的不同,3. 致癌試驗： 臨床上連續(xù)用藥6個月以上的藥物及慢性或復(fù)發(fā)性疾病需間斷性長期反復(fù)治療的藥物，需進(jìn)行致癌試驗； 具有遺傳毒性的藥物往往具有致癌性，若這類藥物預(yù)期長期

13、應(yīng)用于臨床時，應(yīng)進(jìn)行致癌試驗； 若在長期毒性試驗中發(fā)現(xiàn)有癌前病變的藥物或?qū)儆谂c人相關(guān)的具有潛在致癌性的同類化合物，也需進(jìn)行致癌試驗?？紤]到致癌試驗的周期很長，故致癌試驗可在臨床研究期間進(jìn)行，在申報生產(chǎn)時報送致癌試驗有關(guān)資料。,毒理學(xué)上的不同,可考慮免做致癌試驗的條件： 腫瘤治療劑或應(yīng)用于預(yù)期壽命短暫人群的藥物，不要求進(jìn)行致癌試驗； 原藥材有國家標(biāo)準(zhǔn)，且文獻(xiàn)報道無“三致”作用，提取的同結(jié)構(gòu)類型化合物無致癌作用且該受試物致突變試驗陰性； 無生殖毒性和長期毒性試驗未發(fā)現(xiàn)有增生作用者。,動物與人在毒性反應(yīng)上的差別,以動物試驗來預(yù)測藥物臨床毒性的局限性： 中藥注射劑的一些不良反應(yīng)報道 國際生命科學(xué)研究院

14、的研究 Litchfield臨床前毒性研究實驗,藥品動物試驗毒性與臨床毒性一致性的國際研究,動物毒性試驗與人臨床毒性反應(yīng)的陽性一致率為70% 非嚙齒類動物單獨預(yù)測的陽性一致率為63% 嚙齒類動物為43%,60年代臨床前毒性研究資料,500名病人53種藥物反應(yīng) Rat預(yù)測18種占 34% Dog預(yù)測占55% Rat&Dog占57%,94%的臨床毒性是在一個月或更短時間的動物試驗中被預(yù)測到的。結(jié)果提示：動物毒性試驗預(yù)測主要臨床毒性的重要，但同時又存在明顯的不足之處，即對某些系統(tǒng)毒性的預(yù)見性較差。,這就提醒人們：不能期望僅用從動物實驗中得到全 面的信息來指導(dǎo)臨床應(yīng)用。動物毒理試驗的局限性：臨床仍有

15、風(fēng)險。動物與人的敏感性不同，假陰性和 假陽性。一致率僅70%左右。,毒理學(xué)研究的對策,1.設(shè)法減少動物試驗設(shè)計上的不足 參考PP、AT、GP、PK、TK的信息,選擇合理的采樣和檢測時機。,2應(yīng)重視一般藥理學(xué)（GP安全藥 理）的研究。,3更仔細(xì)并合理地選擇動物種屬 （敏感動物)。,4重視生化指標(biāo)和全身（免疫/ 淋巴）器官臟器重量檢測，采 用新技術(shù)檢測血液學(xué)指標(biāo)。,5加強GLP實驗室中對動物各項 正常生理指標(biāo)的數(shù)據(jù)背景資料 （data background）的研究。,6必要時采用其他非常規(guī)的試 驗方法和模型，以加強毒性 機理研究（肝藥酶P450的研究）,7可直接用人體組織及分子生物 學(xué)技術(shù)等進(jìn)行毒

16、理實驗。,藥品臨床前安全性研究 所涉及的內(nèi)容,全身毒性和局部毒性研究,全身毒性研究： 急性毒性試驗； 長期毒性試驗； 特殊毒性試驗； 藥物依賴性試驗； 一般藥理（安全藥理）試驗； 全身過敏性試驗；,局部毒性研究,皮膚、粘膜毒性試驗： 1）局部刺激性試驗 2）局部過敏試驗（光敏試驗，被動皮膚過敏試驗等） 靜脈（肌肉）用藥毒性試驗： 1）血管（肌肉）刺激性試驗 2）溶血試驗,基本目的 1. 找出毒性劑量： 單次、重復(fù)給藥的毒性劑量； 2. 確定安全范圍： 起效而不中毒，范圍越大越好； 3. 發(fā)現(xiàn)毒性反應(yīng)： 為臨床安全監(jiān)護(hù)提供依據(jù)， 預(yù)防毒副反應(yīng)發(fā)生 4. 尋找毒性靶器官：為藥物毒性防治提供依據(jù)，

17、為開發(fā)新藥提供線索； 5. 毒性可逆與否： 可逆性毒性反應(yīng)不影響新藥審 批；不可逆損傷一般不批臨床； 6. 解救措施： 尤對毒性強猛、安全范圍小的藥；,基本要求,課題負(fù)責(zé)人：扎實理論、經(jīng)驗、法規(guī)； 試驗者： 受過專門訓(xùn)練、業(yè)內(nèi)人士 在試驗記錄上簽字； 受試物： 制備工藝基本穩(wěn)定，質(zhì)控成 熟；試劑：批號、廠家、規(guī)格； 動物： 符合國家科技部規(guī)定的等級動物 要求（SPF,Special Pathogen Free）。 一般用成年；必要時用特定年 齡、性別、模型動物,儀器設(shè)備：符合要求、廠家、規(guī)格、專人定期 校驗、誤差在允許范圍內(nèi)。試驗設(shè)計：隨機、對照、重復(fù)三原則。試驗記錄：要求客觀采用的儀器記錄、

18、表格化、 標(biāo)準(zhǔn)化。遇有未預(yù)見的現(xiàn)象及時記 錄；試驗中差錯應(yīng)立即在記錄中寫明 情況。原始記錄至少要保持到藥品 上市后5年。 結(jié)果： 統(tǒng)計學(xué)處理，結(jié)合客觀實際恰當(dāng)下結(jié) 論。,急性毒性試驗 在新藥安全性評價中的作用,急性毒性試驗,是指動物24hr內(nèi)單次或多次給藥后在7d或14d中，連續(xù)觀察動物所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)及死亡情況。,定性：毒性反應(yīng)性質(zhì)（中毒表現(xiàn)）、毒性出現(xiàn)和消失的時間、毒性涉及的組織器官、中毒過程中的特征、可能的死亡原因等。,定量：觀察毒性反應(yīng)與劑量的關(guān)系、近似致死量（ALD）、最大耐受量（MTD）或最大給藥量、半數(shù)致死量（LD50）、致死劑量（LD）；小動物以LD50 作指標(biāo)，大動物以ALD

19、作指標(biāo)。,意 義,了解新藥的急性毒性強度； 為臨床研究、試驗、使用時的毒副反 應(yīng)檢測提供參考依據(jù)； 為不同提取工藝產(chǎn)品的毒性比較以及 配伍用藥或聯(lián)合用藥時藥物的相互 作用情況提供參考依據(jù)。,.可計算新藥相對毒性參數(shù)： TI（治療指數(shù)）=LD50/ED50、 SM（安全范圍）=（LD1/ED99-1） 100%；（LD1無害量）,.為長期毒性、蓄積毒性及特殊毒性試驗（如生殖毒性試驗高劑量為母鼠的最大耐受量，微核試驗的最高劑量一般采用1/2LD50，長期毒性試驗的高劑量一般采用同種動物1/51/10LD50）的觀察指標(biāo)及劑量選擇提供參考依據(jù)；,目前對急毒試驗的看法,LD50測定存在明顯的不足：動物

20、消耗量大， 獲得的信息有限，不需要精確的LD50值, 從安全性評價角度來講，需要的不是精確的 LD50 ，而是更多的毒性信息，目前ICH（人 用藥品注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會議）三方已 主張不采用LD50測定的方法,對急毒試驗的主要要求,原則上：用盡可能少的動物獲得盡可能 多的急性毒性信息（3R）； 內(nèi)容上：只需提供其近似致死量（最大 耐受量）和詳細(xì)觀察記錄中毒 表現(xiàn)； . 方法上：最大耐受量試驗，固定劑量法、 近似致死量法。,半數(shù)致死量（LD50）測定,試驗環(huán)境 受試藥物 實驗動物 給藥途徑 給藥劑量 給藥容積 觀察指標(biāo),試驗環(huán)境： 符合GLP實驗室的規(guī)范要求溫度(1826C)，濕度(4070%

21、)，照度(300450Lux，局部150Lux)，換氣次數(shù)(1015次/h)，壓力(150Pa)，菌落數(shù)等。試驗單位應(yīng)具有實驗動物使用許可證。,受試藥物： 一般為浸膏。其工藝基本穩(wěn)定成型、質(zhì)量可控，批號、來源明確，可用適當(dāng)?shù)娜軇┤芙饣蚧鞈揖鶆?。必要時應(yīng)設(shè)溶媒對照。,實驗動物： 注明種屬、品系、來源。應(yīng)出具實驗動物供應(yīng)單位的實驗動物生產(chǎn)許可證和實驗動物質(zhì)量合格證。一般依體重確定，小鼠1822g，大鼠120150g，雌雄各半。 類新藥必須用2種動物（嚙齒類和非嚙齒類各一種，其中非嚙齒類宜用Beagle犬）。類新藥建議選用2種動物；,給藥途徑： 類新藥及可溶于水的至少選用兩種給藥途徑， 其中一種必須

22、是臨床給藥途徑。其它類至少有一種臨床給藥途徑； 小動物以LD50 作指標(biāo)，大動物以ALD作指標(biāo)；,給藥劑量： 小動物一般設(shè)56個劑量組，隨機分組；劑距一般以0.650.85為宜。大動物可用50%等量遞升法，求出近似致死劑量（ALD）和最大耐受量（MTD）。,給藥容積： 一般用不等濃度等容量給藥，常規(guī)給藥容量為小鼠 ig 0.20.4ml/10g， ip，sc和iv 0.10.2ml /10g；大鼠 ig 11.5ml/100g， ip，sc和iv 0.51ml/100g；,觀察指標(biāo)： 給藥當(dāng)天，尤其是給藥后4h內(nèi)應(yīng)嚴(yán)密觀察并記錄，連續(xù)觀察714天。重點記錄動物毒性反應(yīng)情況和死亡情況，包括中毒癥

23、狀、中毒發(fā)生時間、持續(xù)時間、恢復(fù)期及最短死亡時間和最長死亡時間表，體重變化表。建議采用Bliss法計算LD50值。,最大給藥量試驗,在最大濃度和最大給藥體積 （一日內(nèi)23次給藥）的情況 下不引起動物死亡的劑量。,長期毒性試驗 在新藥安全性評價中的作用,目 的 觀察反復(fù)給藥情況下，實驗動物對受試物出現(xiàn)的毒性反應(yīng)，劑量毒性效應(yīng)的關(guān)系，主要靶器官，毒性反應(yīng)的性質(zhì)和損害程度及可逆性等；實驗動物能耐受的劑量范圍，無毒反應(yīng)劑量、毒性反應(yīng)劑量及安全劑量范圍。 還可以了解毒性產(chǎn)生時間、持續(xù)時間、可能反復(fù)產(chǎn)生毒性反應(yīng)的時間、有否遲發(fā)性毒性反應(yīng)、有否蓄積毒性或耐受性等。,特 點 長期毒性是研究周期最長，困難最大，

24、耗資最多，難以重復(fù)的試驗。但它對于新藥研究的成功與否起著舉足輕重的作用。 如果說臨床前安全性評價對保證臨床安全用藥有很大作用的話，則長毒試驗起著最主要的作用。,意 義 長毒試驗是臨床前毒性評價的主要內(nèi)容，是新藥審評的重點內(nèi)容之一，是能否過渡到臨床試用的主要依據(jù)。 其結(jié)果為臨床安全用藥的劑量設(shè)計提供參考依據(jù)，為臨床毒副反應(yīng)的監(jiān)護(hù)及生理生化指標(biāo)監(jiān)測提供依據(jù)。,總之，長期毒性試驗是判斷一個候選藥物是否有進(jìn)一步開發(fā)的價值、通過權(quán)衡利弊能否過渡到臨床的重要依據(jù)之一。,一般原則,試驗設(shè)計：周到合理，實驗條件嚴(yán)格控制； 觀察指標(biāo)：力求全面并針對受試藥特點選擇相應(yīng)的敏感指標(biāo)； 實驗數(shù)據(jù)：應(yīng)經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理（屬正態(tài)

25、分布的，可用t檢驗或方差分析；若屬非正態(tài)分布，應(yīng)選用非參數(shù)統(tǒng)計分析法，如Ridit分析或秩和檢驗）； 試驗結(jié)果：應(yīng)認(rèn)真分析，辨別真?zhèn)?，以判斷?shù)據(jù)結(jié)果的變化是否與藥物有關(guān)； 試驗結(jié)論：應(yīng)能說明受試藥長期服用時毒性反應(yīng)的主要特點及安全劑量范圍，提示在臨床試驗時應(yīng)注意觀察哪方面的毒性反應(yīng)。,長期毒性試驗的具體要求,長期毒性試驗應(yīng)在藥理學(xué)試驗（藥效，藥代，一般 藥理，急毒試驗）之后進(jìn)行；試驗設(shè)計應(yīng)由藥學(xué)、 藥理、毒理、臨床研究人員共同制定； 長毒試驗的研究設(shè)計必須科學(xué)、周到和合理； 嚴(yán)格掌握試驗條件、盡量排除干擾； 觀察指標(biāo)力求全面并能針對新藥的作用特點，突重點； 認(rèn)真、科學(xué)地分析實驗結(jié)果，實事求是辨

26、別真?zhèn)危?數(shù)據(jù)經(jīng)合理的統(tǒng)計學(xué)處理； 結(jié)論能明確回答新藥毒副反應(yīng)的主要特點及安全劑量的 主要范圍。,試驗環(huán)境：同急性毒性試驗的要求；受試藥物：處方固定，工藝和質(zhì)量基本穩(wěn) 定。口服制劑建議用提取物或浸 膏灌胃；外用制劑、注射劑可用 原制劑，為提高劑量可進(jìn)行濃縮。 考慮到中試供樣量，可采用混批。實驗動物：動物種屬、品系、來源清晰。 應(yīng)出具實驗動物供應(yīng)單位的實驗 動物生產(chǎn)許可證和實驗動物質(zhì)量 合格證。,應(yīng)采用敏感動物進(jìn)行試驗: 嚙齒類動物一般選SD或Wistar大鼠，一般為68周齡，試驗周期3個月以上者可選56周齡； 非嚙齒類動物選Beagle犬412月，雜種犬5歲以下。年輕動物對藥敏感，另外可觀察對

27、生長發(fā)育的影響。 試驗開始時體重差異不應(yīng)超過該次試驗動物平均體重的20%。若用于兒童患者則應(yīng)根據(jù)具體情況采用幼年動物。,動物數(shù)：原則上應(yīng)滿足統(tǒng)計學(xué)的要求，具體應(yīng)根據(jù)動物可能的消耗情況來設(shè)計（藥物毒性特點、試驗要達(dá)到的目標(biāo)、指標(biāo)變異情況、檢測次數(shù)和給藥周期長短等）。 大鼠:每組至少20只，如試驗周期為三個月以上，應(yīng)根據(jù)需要增加數(shù)量至每組3040只； 犬:每組動物至少6只，雌（無孕）雄各半（單性別用藥者例外），隨機分組，對試驗周期為6個月或9個月的長毒，應(yīng)根據(jù)試驗需要相應(yīng)增加動物數(shù)。,給藥途徑：給藥途徑應(yīng)與推薦臨床的途徑一致，否則要說明理由。臨床用藥途徑為靜脈注射時，如有困難亦可用其它適宜的注射途

28、徑代替，詳細(xì)說明給藥方法。若摻食法給藥應(yīng)提供數(shù)據(jù)，說明如何保證給藥劑量的一致性，藥物的均一性和穩(wěn)定性；外用藥長毒試驗要注意詳細(xì)說明實驗條件（環(huán)境溫度、濕度等）和試驗方法（給藥部位、面積、固定方法、持續(xù)時間、給藥厚度等）。,劑量設(shè)計,可參考藥效學(xué)有效劑量、急性毒性試驗（LD50法，MTD法）以及預(yù)試驗的結(jié)果來設(shè)計高、中、低三個劑量組和一個對照組（必要時設(shè)溶劑或賦形劑對照組），以找到無毒劑量、中毒劑量和藥物安全范圍。 要求高劑量組原則上力求使動物產(chǎn)生明顯的或嚴(yán)重的毒性反應(yīng)，或個別動物死亡；低劑量組應(yīng)高于同種動物的有效劑量（或按體表面積折算）而不出現(xiàn)毒性反應(yīng)；在高、低劑量組之間應(yīng)按等比關(guān)系再設(shè)1個中

29、劑量組。,劑量設(shè)計,如果小鼠急性毒性試驗在最大給藥量情況下仍不出現(xiàn)毒性反應(yīng)和死亡或僅個別動物有毒性反應(yīng)時，可按動物藥效劑量或臨床擬用劑量科學(xué)合理的倍數(shù)進(jìn)行設(shè)計。 建議高劑量組應(yīng)考慮采用最大給藥濃度及動物的最大給藥容量來完成長毒試驗，或相當(dāng)于犬和大鼠藥效學(xué)有效劑量的2030倍。,給藥周期,應(yīng)根據(jù)臨床用藥的實際情況并結(jié)合適應(yīng)證的特點來定，具體要求我國已基本參照ICH達(dá)成的一致，中藥的毒性試驗在充分考慮其特殊性的前提下，也建議與ICH一致。具體規(guī)定： 臨床用藥期 長期毒性試驗 1周內(nèi)者, 2周 2周內(nèi)者, 4周 24周, 13周 4周3月， 26周 3個月以上者， 大鼠26周，犬9個月 此為最長試驗

30、周期。對需長期反復(fù)應(yīng)用的藥物，應(yīng)做最長試驗周期的長期毒性試驗。,給藥周期,對功能主治有若干項的，應(yīng)按臨床最長療程的功能主治來確定長毒給藥周期； 對一些慢性病的治療藥，應(yīng)根據(jù)疾病臨床實際所需療程按最長試驗周期提供長期毒性資料。,為加快申報速度減少浪費，鼓勵在長毒試驗進(jìn)行至與期臨床試驗療程相等的給藥時間時提交申報資料。,觀測指標(biāo),1）注意根據(jù)受試藥特點選擇針對性強的檢測指標(biāo)以反映其毒性特點： PP、GP特點下的過量給藥； AT結(jié)果、LT預(yù)試結(jié)果預(yù)測可能的毒性 文獻(xiàn)報道或臨床預(yù)試的不良反應(yīng)； 處方中已知成分的毒性。,2）設(shè)計指標(biāo)檢測的最佳時機和次數(shù)（可參考藥代動力學(xué)數(shù)據(jù)）；,3）對實驗動物一般狀況的

31、觀察是最基本、最重要的內(nèi)容： 體重的變化率與動物的攝食量在大多數(shù)情況下的變化是一致的。 出現(xiàn)早、反應(yīng)靈。所以必須計算體重和攝食量。 其他：瞳孔反射、步態(tài)、精神狀態(tài)等。,4）注意在試驗中觀察與免疫毒性相關(guān)的指標(biāo)；,5）要重視臟器病理組織學(xué)指標(biāo)的全面檢查，出具正式病理部門簽章的、書寫規(guī)范（高劑量組、空白對照組）的22個臟器的病理報告書，并提供病理照片（尤其是表現(xiàn)出病變的臟器）。,毒理學(xué)試驗結(jié)果的綜合分析,分析目的： 數(shù)據(jù)變化是否與受試物有關(guān)；以確定無毒反應(yīng)劑量、毒性反應(yīng)劑量及安全劑量范圍。,2. 差異的生物學(xué)意義與統(tǒng)計學(xué)意義的關(guān)系： 沒有統(tǒng)計學(xué)意義不等于沒有生物學(xué)意義； 有統(tǒng)計學(xué)意義也不等于有生物

32、學(xué)意義； 分析原則：綜合分析，注意系統(tǒng)性和關(guān)聯(lián)性。,3.分析步驟 分析計數(shù)和計量資料，數(shù)據(jù)屬于正態(tài)分布，用t檢驗或方差分析；數(shù)據(jù)是非正態(tài)分布，應(yīng)用非參數(shù)統(tǒng)計分析Ridit或秩和檢驗（如半定量的計分?jǐn)?shù)據(jù)）是否有差異及統(tǒng)計學(xué)意義；差異是否有生物學(xué)意義。,4.具體分析方法（計數(shù)和計量資料）,統(tǒng)計學(xué)家：往往強調(diào)P值，不考慮實際情況； 臨床醫(yī)生：更多考慮臨床的實際意義； 藥理毒理工作者：應(yīng)將二者結(jié)合起來考慮，才是客觀、可信、可靠的結(jié)論。,不能只求與對照組的比較，還要說明給藥組兩兩之間的比較，以說明并分析量毒關(guān)系。 如尿量、RBC、WBC及血小板計數(shù)等，由于系統(tǒng)誤差可能有統(tǒng)計學(xué)意義，P0.05，但因為一般

33、都在正常范圍內(nèi)（指自己實驗室的背景值范圍）的波動,無量毒關(guān)系，所以無臨床的實際意義。,綜合考慮同一指標(biāo)的均數(shù)計量和個體計數(shù)結(jié)果的統(tǒng)計學(xué)和生物學(xué)意義。 如：ALT的“均數(shù)SD”，往往因SD過大而使各組間的統(tǒng)計學(xué)分析無顯著差異。 此時應(yīng)注意分析，SD過大通常是由于某幾例動物個體數(shù)值的異常變化所致。雖然統(tǒng)計學(xué)無差異，但就某一個體來說，其數(shù)據(jù)的變化是異常的。此時，應(yīng)列出個體數(shù)據(jù)再加以分析。,注意選擇敏感指標(biāo) 如：血液檢查常常只注意紅細(xì)胞計數(shù)而忽視網(wǎng)織紅細(xì)胞的檢查。事實上RBC計數(shù)不論在反映溶血或反映紅系造血抑制上都不靈敏。因為RBC壽命很長，120d。在此期間，骨髓紅系造血即使受到抑制，外周血也表現(xiàn)不出來，因為機體可以從貯存庫將紅細(xì)胞動員出來，外周血的紅細(xì)胞不致明顯下降。但網(wǎng)織紅細(xì)胞卻是一個很敏感的指標(biāo)，其計數(shù)下降表明紅系造血障礙和溶血加強。不能因為RBC無統(tǒng)計學(xué)意義而忽略其可能的毒性，甚至是毒性靶器官。,又如：ALT、AST、ALP、Tbill是檢測肝功的指標(biāo)。ALT是敏感指標(biāo)；AST受標(biāo)本溶血影響大；ALP受動物年齡影響大，應(yīng)強調(diào)組間對照。ALP、AST非肝臟特異性酶，也可來自機體的其他器官，在分析時要注意。 狗BUN