熒光探針課件

1、熒光探針,熒光探針就是以熒光物質作為指示劑,并在一定波長光的激發(fā)下使指示劑產生熒光,通過檢測所產生的熒光實現對被檢測物質的定性或者定量分析。 熒光探針受到周圍環(huán)境的影響，使其發(fā)生熒光發(fā)射發(fā)生變化，從而使人們獲知周圍環(huán)境的特征或者環(huán)境中存在的某種特定信息。,什么是熒光探針？,熒光探針的優(yōu)點,靈敏度高 選擇性好 使用方便 成本低 不需預處理 不受外界電磁場影響 遠距離發(fā)光 特別是在分子生物學、生物化學、醫(yī)學等領域中有較廣泛的應用。,熒光分子探針的結構,熒光分子探針通常由三部分組成： 識別基團（receptor） 熒光基團（fluorophore） 連接體部分（spacer）,識別基團決定了探針分子

2、的選擇性和特異性，熒光基團則決定了識別的靈敏度，而連接體部分則可起到分子識別樞紐的作用。,熒光基團和識別基團二者連接在同一個共軛體系中，熒光基團是該體系中最基本的組成部分，一般為芳香族的稠環(huán)化合物，其目的是將分子識別轉換成不同形式的熒光信號，如熒光強度的增強或減弱、熒光壽命的變化、光譜的移動等。識別基團是為了實現這一選擇性識別而合成的探針結構單元，是決定熒光分子探針和被檢測體結合的靈敏度與選擇性的部分，通常也稱為受體。,香豆素作為熒光基團的，鄰氨基苯硫醚作為識別基團，兩者以席夫堿相連，加入鋅離子后，與硫醚上的硫原子、席夫堿上的氮原子及香豆素上的氧原子配位得到結構2，抑制了席夫堿上c=n鍵的旋轉

3、，實現了熒光從無到有的變化,鋅離子熒光探針,新型熒光探針-分子信標,分子信標是一種基于熒光能量轉移原理而設計的發(fā)夾型寡聚核酸熒光探針。它通過與核酸等靶分子相互作用后發(fā)生構象的變化而產生熒光信號，對靶分子的檢測具有靈敏度高、選擇性強、適合于活體實時檢測等優(yōu)點。分子信標技術的建立正是滿足了人們 迫切需要一種具有高靈敏度和高親和力的生物分子探針的需求，因而這種技術很快就廣泛地應用于基礎醫(yī)學和生物學等諸多領域。,分子信標是一種由寡聚核酸形成的發(fā)夾型分子。它包括一個環(huán)，環(huán)由與靶分子互補的核酸堿基序列組成；干為兩列互補的堿基序列，在分子信標中，熒光基團共價地連接在其干部分的一個末端，猝滅基團也靠共價鍵連接

4、在干部分的另一末端。,分子信標未與靶分子結合時，由于干部分兩列互補堿基對之間的氫鍵連接，使得熒光基團與猝滅基團距離很近，熒光基團將能量轉移給猝滅基團而發(fā)生熒光猝滅；當分子信標與序列互補的靶分子結合時，環(huán)與靶序列雜交而形成了比干部分更長更穩(wěn)定的堿基對氫鍵連接，分子信標發(fā)生構型的變化，干部分被打開，從而使熒光基團遠離猝滅基團，熒光基團產生的熒光得到幾乎100%恢復，且所檢測到的熒光強度與溶液中靶標的量成正比。,經典分子信標結構,分子信標在生物分子檢測中的應用,實時監(jiān)測聚合酶鏈反應 基因變異的檢測 分子信標生物傳感器 活細胞中rna的檢測 dna與蛋白質相互作用研究,展望,隨著熒光探針技術的不斷發(fā)展和完善,必然會給目前較為熱門的基因組學、蛋白質