細(xì)菌鑒定的總體思路ppt課件

1、.,1,臨床常見(jiàn)細(xì)菌鑒定的思路,檢驗(yàn)科 張?jiān)姾?.,2,細(xì)菌鑒定的指南,一、培養(yǎng)特性 1、溫度 2、氣體 3、營(yíng)養(yǎng)要求 4、PH 5、濕度,.,3,細(xì)菌鑒定的指南,二、生長(zhǎng)特性 1、生長(zhǎng)速度 2、菌落特征 3、液體培養(yǎng)基的生長(zhǎng)特性 三、細(xì)菌的形態(tài)與染色 四、生理及生化特性 五、血清學(xué)診斷 六、致病性試驗(yàn)：動(dòng)物接種,.,4,細(xì)菌的分類及鑒定步驟,細(xì)菌的分類單位 由高到低 分7個(gè)層次， 界 門 綱 目 科 屬 種 有的種還分血清型（如沙門菌及志賀菌等）和生物型（如流感、副流感嗜血桿菌1-8生物型等）還有噬菌體分型（如傷寒沙門菌、銅綠等）。,.,5,細(xì)菌鑒定步驟,1、首先必須分離有單個(gè)菌落的純培養(yǎng)

2、2、革蘭氏染色，先確定是G-b，G+b，G+c，G-c 3、如為G-b，G-c先做氧化酶試驗(yàn)，如為G+c或G+b先做觸酶，根據(jù)結(jié)果，選擇最少幾項(xiàng)關(guān)鍵性鑒定試驗(yàn)。,.,6,G+c(動(dòng)力、觸酶、O/F),w/- F,+ O/-,+ F,+/- - F,微 球 菌,氣 球 菌,鏈 球 菌,葡 萄 球 菌,.,7,革蘭陽(yáng)性球菌 之葡萄球菌,一、革蘭陽(yáng)性球菌，排列成葡萄狀，觸酶（+） ：首先做血漿凝固酶試驗(yàn)、甘露醇、尿素及對(duì)新生霉素的敏感性，如果確定不了，再加做麥芽糖、蔗糖、蕈糖、木糖、硝酸鹽，同時(shí)結(jié)合菌落顏色和溶血情況。,.,8,幾種常見(jiàn)葡萄球菌的鑒定,凝固酶 甘露醇 尿素 新生 金葡 + + - S

3、 中間 + - - S 表皮 - - d S 腐生 - + + R 溶血 - d - S,.,9,革蘭陽(yáng)性球菌 之鏈球菌,二、革蘭陽(yáng)性球菌，排列成鏈狀，觸酶（-） ： 根據(jù)溶血情況， 先做七葉苷 6.5%NaCl 肉湯。,溶血： 1、 - - 沉淀生長(zhǎng)，加做桿菌肽S為化膿性鏈球菌 2、 - - 微混，加做CAMP+為B群鏈球菌（無(wú)乳鏈球菌） 3、 - - 沉淀生長(zhǎng)，加做桿菌肽R，為溶血性鏈球 菌（非A、B） 4、 + 沉淀生長(zhǎng)，加做桿菌肽R，為咽峽鏈球菌（草鏈中的一種）,.,10,革蘭陽(yáng)性球菌之鏈球菌, 溶血： 1、 -或+ - 沉淀生長(zhǎng)，為草鏈 2、 - - 混濁生長(zhǎng)，加做膽汁溶菌試驗(yàn)+，菊

4、糖+， Optochin S，為肺炎鏈球菌,不溶血或 溶血： 1、 + - 混濁生長(zhǎng)，為D群鏈球菌 2、 + + 混濁生長(zhǎng)，為腸球菌,.,11,革蘭陽(yáng)性球菌,如D群鏈球菌和腸球菌要進(jìn)一步鑒定：,D群鏈球菌 乳糖 + - 牛鏈 馬腸鏈,腸球菌 山梨醇 + - 棉子糖 甘露醇 + - + - 糞腸球 禽腸球 屎腸球 堅(jiān)忍腸球,.,12,革蘭陽(yáng)性球菌之綠色氣球菌,綠色氣球菌是一種條件致病菌，它可引創(chuàng)面感染、敗血癥等。 綠色氣球菌在血平板上生長(zhǎng)灰色、光滑、有 溶血的菌落。革蘭染色為G+C，排列呈四聯(lián)狀。 綠色氣球菌生化反應(yīng) 試驗(yàn) +% 試驗(yàn) +% 試驗(yàn) +% 觸酶* 0 麥芽糖 100 阿拉伯糖 48

5、 硝還* 0 蔗糖 100 棉子糖 19 七葉苷 * 100 乳糖 90 木糖 10 6.5%NaCl * 100 果糖 100 山梨醇 0 葡萄糖* 100 蕈糖 90 甘露醇* 86 水楊苷 76 *為確診試驗(yàn),.,13,革蘭陽(yáng)性球菌之溶血孿生球菌,本菌染色多變，可以染成陰性，呈單個(gè)或成雙、短鏈排列。血板上35度培養(yǎng)24h形成較大的菌落，呈水滴狀，易融合生長(zhǎng)，48h后菌落周圍出現(xiàn)寬大的透明溶血環(huán)，有自溶現(xiàn)象，類似肺炎鏈球菌的菌落。肉湯培養(yǎng)中呈混濁生長(zhǎng)，6.5%高鹽肉湯中能生長(zhǎng)。 生化反應(yīng)：觸酶-，氧化酶-，分解葡萄糖、果糖；不分解乳、麥、菊、蔗、阿拉伯糖、甘露醇、衛(wèi)矛醇；七葉苷-，靛基質(zhì)-

6、。對(duì)青、氯霉素敏感，對(duì)丁胺卡那耐藥。,.,14,革蘭陽(yáng)性球菌之馬紅球菌,馬紅球菌是馬、豬和牛的致病菌，近來(lái)發(fā)現(xiàn)本菌也可引起艾滋病、血液病和腎移植病人的肺部感染。,本菌為革蘭陽(yáng)性無(wú)動(dòng)力桿菌，為多形態(tài)，有時(shí)呈桿狀， 有時(shí)呈球狀。在血平板上35 24-48h，可長(zhǎng)出淡桔紅色 到粉紅色的粘液樣大菌落，不溶血。,生化反應(yīng)：觸酶+，氧化酶-，硝還+，靛基質(zhì)-，枸鹽-， 明膠酶-，脲酶不定，不分解糖類，可形成類CAMP樣 反應(yīng)。,.,15,G-c(觸酶、氧化酶、 O/F),+ + o,腦膜炎奈瑟氏菌 淋病奈瑟氏菌 其他奈瑟菌,布蘭漢菌屬 金黃色奈瑟菌,.,16,革蘭陰性雙球菌,氧化酶+ 腦膜炎 卡他布 淋病

7、 雙球菌 蘭漢菌 奈瑟菌 葡萄糖 + - + 麥芽糖 + - - 硝還 - + - DNA酶 +,.,17,G-b(動(dòng)力、氧化酶、觸酶、O/F),- + + -,莫 拉 菌 屬,+ + + -,- + + fw-,- + + -,+ + + 0/f,- + + f,+ + + F,- - + O/-,- - - F,+ + +,+ - + -,嗜 血 桿 菌,黃 色 桿 菌,莫 拉 菌 屬,假 單 胞 菌,巴 斯 德 菌,弧 菌 屬,不 動(dòng) 桿 菌,產(chǎn) 堿 桿 菌,軍 團(tuán) 菌 屬,彎 曲 桿 菌 屬,鄰 單 胞,氣 單 胞,+ +/- - F,腸 桿 菌 科,.,18,革蘭陰性桿菌之嗜血桿菌,

8、嗜血桿菌為G-小桿菌，在巧克力平板上生長(zhǎng)灰色、透明的小菌落，似露滴狀，有時(shí)呈球桿菌，有時(shí)呈絲狀，一般情況下在血平板上不生長(zhǎng)。,氧化酶（弱+），在血平板和MH上同時(shí)做衛(wèi)星試驗(yàn)， 兩種平板上均陽(yáng)性，為副流桿菌嗜血桿菌，血平板上 陽(yáng)性、MH上陰性，為流感嗜血桿菌。,注：杜克嗜血桿菌是軟性下疳的病原菌，72h后才生長(zhǎng) 細(xì)小的菌落，陰道分泌物培養(yǎng)時(shí)要注意。,.,19,革蘭陰性桿菌手工鑒定的主要生化試驗(yàn),涂片為革蘭陰性桿菌，做氧化酶試驗(yàn)。 1、氧化酶- 做全套生化 克氏雙糖、尿素、苯丙氨酸、葡萄糖酸鹽、 葡萄糖、甘露醇、IMViC、硝酸鹽,.,20,革蘭陰性桿菌手工鑒定的主要生化試驗(yàn),致病性大腸埃希菌 克

9、氏雙糖、苯丙氨酸、葡萄糖酸鹽、甘露醇、IMViC、山梨醇。,遷徙生長(zhǎng)，可能為變形桿菌 克氏雙糖、尿素、苯丙氨 酸、葡萄糖酸鹽、甘露醇、靛基質(zhì)、麥芽糖。,灰凸的菌落，染色為典型的陰性球桿菌 克氏雙糖、葡 萄糖、甘露醇、靛基質(zhì)、枸櫞酸鹽、硝酸鹽、丙二酸鹽 、42。,灰黃色菌落 可能為嗜麥芽窄食假單胞菌 同氧化酶+ 生化試驗(yàn)。,.,21,革蘭陰性桿菌手工鑒定的主要生化試驗(yàn),2、氧化酶+ 全套生化 克氏雙糖、葡萄糖、甘露醇、靛基質(zhì)、枸櫞酸鹽、硝酸鹽、七葉苷、乙酰胺。 可疑氣單胞菌 克氏雙糖、葡萄糖、甘露醇、靛基質(zhì)、枸櫞酸鹽、硝酸鹽、七葉苷、賴氨酸、蔗糖、VP（25）。 可疑弧菌 同氣單胞菌生化試驗(yàn)，另

10、加不同濃度的NaCl。,.,22,腸桿菌科,腸桿菌科為一大群革蘭陰性桿菌，氧化酶陰性. 多數(shù)菌種為周毛菌，能運(yùn)動(dòng)，少數(shù)無(wú)鞭毛，不能運(yùn)動(dòng)。 絕大多數(shù)菌種在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂上生長(zhǎng)良好。 發(fā)酵葡萄糖，還原硝酸鹽。 臨床常見(jiàn)的10多個(gè)菌屬，30多個(gè)種。,.,23,腸桿菌科與其他科細(xì)菌的區(qū)別,試驗(yàn) 腸桿菌科 弧菌科 非發(fā)酵菌 葡萄糖發(fā)酵 F F O/- 氧化酶 - + +* 形態(tài) 桿狀 弧形或桿狀態(tài) 桿狀 鞭毛 周毛或無(wú) 單毛 單毛、叢毛、 周毛或無(wú) * 不動(dòng)桿菌和嗜麥芽窄食假單胞菌除外。,.,24,腸桿菌科的初步分類,腸桿菌科初步分類 菌屬 苯丙氨酸 葡萄糖酸鹽 埃希菌屬 志賀菌屬 沙門菌屬 枸櫞酸桿菌屬

11、 愛(ài)德華菌屬 耶爾森菌屬 克雷伯菌屬 + 腸桿菌屬 + 沙雷菌屬 + 哈夫尼亞菌屬 + 變形桿菌屬 + 摩根菌屬 + 普羅維登斯菌屬 + ,.,25,苯丙氨酸、葡萄糖酸鹽陰性各菌屬的鑒別,枸櫞酸 愛(ài)德華 結(jié)腸 試驗(yàn) 埃希菌屬 志賀菌屬 沙門菌屬 桿菌屬 菌屬 耶爾森菌 動(dòng)力 +/- - + + + -* 硫化氫 - - +/- +/- + - 靛基質(zhì) + -/+ - -/+ + -/+ 枸櫞酸鹽 - - +/- + - - 脲酶 - - - -/+ - +/- 賴氨酸 +/- - +/- - - +/- *25-30培養(yǎng)動(dòng)力+,.,26,葡萄糖酸鹽陽(yáng)性各菌屬的鑒別,試驗(yàn) 克雷伯菌屬 腸桿菌屬

12、沙雷菌屬 哈夫尼亞菌屬 動(dòng)力 - + + + 山梨醇 + +/- + - DNase - - + - 明膠酶 - - + -,.,27,苯丙氨酸陽(yáng)性各菌屬的鑒別,試驗(yàn) 變形桿菌屬 摩根菌屬 普羅維登斯菌屬 硫化氫 + - - 枸櫞酸鹽 +/- - +/- 鳥(niǎo)氨酸 +/- + -,.,28,大腸埃希菌與其他3種埃希菌的鑒別,黃色素 吲哚 乳糖 山梨醇 戊五醇 大腸埃希菌 - + + + - 弗格森埃希菌 - + - - + 赫曼尼埃希菌 + + d - - 傷口埃希菌 d - -/+ - -,.,29,志賀菌屬的生化反應(yīng),試驗(yàn) 反應(yīng) 試驗(yàn) 反應(yīng) 葡萄糖產(chǎn)氣 -* 吲哚 d 乳糖 -* 甲基紅 +

13、 蔗糖 - VP - 甘露醇 +/- 枸櫞酸鹽 - 衛(wèi)矛醇 - 丙二酸鹽 - 肌醇 - KCN - 水楊苷 - 明膠酶 - 硫化氫 - 賴氨酸 - 脲酶 - 動(dòng)力 - *福氏6型某些生物型、鮑氏志賀菌13、14型可產(chǎn)生少量氣體。 *宋內(nèi)志賀菌可遲緩發(fā)酵乳糖,.,30,志賀菌屬的血清反應(yīng),本菌屬僅有菌體（O）抗原，而無(wú)鞭毛（H）抗原。某些菌株在新分離時(shí)，有表面（K）抗原，可阻止O抗原與相應(yīng)診斷血清發(fā)生凝集反應(yīng)。K抗原不耐熱，加熱10060min即可破壞，而O抗原為多糖復(fù)合物，耐熱，加熱后不被破壞，仍可與特異性抗血清凝集。 根據(jù)生化反應(yīng)和O抗原之不同，可將志賀菌屬分為四個(gè)血清群。 A群 即痢疾志賀

14、菌，均有K抗原，國(guó)內(nèi)僅發(fā)現(xiàn)1、2型。 B群 福氏志賀菌， C群 鮑氏志賀菌， D群 宋內(nèi)志賀菌，僅1個(gè)血清型。,.,31,沙門菌屬的生化反應(yīng),試驗(yàn) 反應(yīng) 試驗(yàn) 反應(yīng) 葡萄糖產(chǎn)氣 +* 吲哚 - 乳糖 - 甲基紅 + 蔗糖 - VP - 甘露醇 + 枸櫞酸鹽 +/- 麥芽糖 + 丙二酸鹽 - 鼠李糖 + KCN - 水楊苷 - 明膠酶 - 硫化氫 +* 賴氨酸 +* 脲酶 - 動(dòng)力 +* *傷寒沙門菌不產(chǎn)氣 *雞沙門菌和雛沙門菌無(wú)動(dòng)力 *甲型副傷寒沙門菌賴氨酸、硫化氫均為陰性。,.,32,枸櫞酸桿菌屬的鑒別,菌種 硫化氫 吲哚 側(cè)金盞花醇 丙二酸鹽 弗勞地枸櫞桿菌 + - - -/+ 異型枸櫞酸

15、桿菌 - + + + 丙二酸鹽陰性枸櫞酸桿菌 - + - -,.,33,愛(ài)德華菌屬,愛(ài)德華菌屬有3個(gè)菌種，只有遲緩愛(ài)德華菌有臨床意義，可引起腹瀉、傷口感染和敗血癥。 生化特性是發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，不分解甘露醇、乳糖，產(chǎn)硫化氫，IMViC為+-。動(dòng)力+，賴氨酸、鳥(niǎo)氨酸+，精氨酸-。,.,34,耶爾森菌屬,耶爾森菌屬包括11個(gè)菌種，其中最重要的為3個(gè)菌種。 3種耶爾森菌的生化鑒別 菌種 動(dòng)力 VP 吲哚 脲酶 山梨醇 鳥(niǎo)氨酸 鼠疫耶爾森菌 25- - - d - - 35- - 假結(jié)核耶爾森菌 25d - - + - - 35- - 小腸結(jié)腸炎耶爾森菌 25+ +/- d +/- + + 35-

16、-,.,35,7種克雷伯菌屬種間的主要鑒別,菌種 吲哚 甲基紅 VP 枸鹽 丙二 鳥(niǎo)氨酸 42 4 肺炎克雷伯菌 - - + + + - + - 產(chǎn)酸克雷伯菌 + -/+ + + + - + - 臭鼻克雷伯菌 - + - -/+ - - + - 鼻硬結(jié)克雷伯菌 - + - - + - + - 解鳥(niǎo)氨酸克雷伯菌 + + +/- + + + + + 植生克雷伯菌 -/+ + + + + - + + 土生克雷伯菌 - d + d + -/+ - +,.,36,4種腸桿菌種間生化反應(yīng)鑒別,菌種 山梨醇 脲酶 賴氨酸 精氨酸 陰溝腸桿菌 + +/- - + 產(chǎn)氣腸桿菌 + - + - 格高菲腸桿菌 -

17、+ + - 坂崎腸桿菌 - - - +,.,37,3種沙雷菌的生化鑒別,試驗(yàn) 粘質(zhì)沙雷菌 液化沙雷菌 深紅色沙雷菌 阿拉伯糖 - + + 棉子糖 - + + 木糖 - + + 乳糖 - - + 山梨醇 + + - 丙二酸鹽 - - + 鳥(niǎo)氨酸 + + -,.,38,3種變形桿菌的鑒別,菌種 吲哚 麥芽糖 鳥(niǎo)氨酸脫羧酶 普通變形桿菌 + + - 奇異變形桿菌 - - + 潘氏變形桿菌 - + -,.,39,3種普羅威登斯菌的生化鑒別,菌種 脲酶 甘露醇 側(cè)金盞花醇 鼠李糖 雷極普羅威登斯菌 + + + +/- 斯圖普羅威登斯菌 -/+ - - - 產(chǎn)堿普羅威登斯菌 - - + -,.,40,摩根

18、菌屬,摩根菌屬只有一個(gè)菌種，即摩根摩根菌， 生化反應(yīng)不活潑，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸，脲酶陽(yáng)性，IMViC+-，苯丙、鳥(niǎo)氨酸+，賴氨酸、精氨酸-。,.,41,非發(fā)酵菌的初步鑒定,1、氧化酶試驗(yàn) 2、葡萄糖發(fā)酵試驗(yàn) 3、動(dòng)力及鞭毛 4、色素 5、還原硝酸鹽及產(chǎn)N2,.,42,幾種非發(fā)酵菌與弧菌科菌的鑒別,血平板 氧化酶 克氏 葡糖 甘 動(dòng)力 靛 枸 硝 七 乙 明膠 銅綠 灰綠，溶血 + -/- （O） - + - + + - + + 嗜麥芽 灰黃色 - -/- （O） - + - + +/- + - + 腐敗 紅棕色 + -/-H2S （O） - + - - +/- - - + 惡臭 灰白色 + -/-

19、 （O） - + - +/- - - - - 熒光 灰色 + -/- （O） - + - + -/+ - - + 洋蔥 黃色（多B R）（+)/- -/- （O） - + - +/- -/+ +/- +/- +/- 產(chǎn)堿 灰色，溶血 + -/- （O)/- - + - + -/+ - -/+ - 不動(dòng) 灰白色 - -/- （O)/- - - - +/- - - - -/+ 莫拉 灰色 + -/- - - - - - +/- ND ND -/+ 黃桿菌 黃色 + -/- （F)/- - - (+)/- + -/+ +/- +/- 黃單胞 黃色 + -/- （O)/- - + - (+)/- -

20、+/- +/- 氣單胞 暗灰綠，溶血 + -/+ F + + + -/+ + +/- ND + 鄰單胞 灰白或灰色 + -/+ F - + + - + - ND - 注：（O）：弱陽(yáng)性； O：氧化型； F：發(fā)酵型； ND：無(wú)資料,.,43,非發(fā)酵菌之不動(dòng)桿菌屬,不動(dòng)桿菌屬菌為革蘭陰性球桿菌，氧化酶-，觸酶+，靛基質(zhì)-，甘露醇- ，動(dòng)力- ，硝還- 。,不動(dòng)桿菌屬6個(gè)種的生化特性 醋酸鈣 鮑曼 溶血 瓊氏 約翰遜 洛菲 生長(zhǎng)于:44 - + - - - - 41 - + - + - - 37 + + + + - + 明膠 - - + - - - 溶血 - - + - - - 枸櫞酸鹽 + + +

21、 +/- + - 丙二酸鹽 + + - - -/+ - 葡萄糖 + + +/- - - - 木糖 - + +/- - - - 乳糖 + + - + + -,.,44,非發(fā)酵菌之黃桿菌屬,黃桿菌屬為革蘭陰性桿菌，氧化酶+，觸酶+，動(dòng)力- ，菌落產(chǎn)黃色素。,臨床常見(jiàn)黃桿菌的生化反應(yīng) 腦膜敗血 芳香 短小 吲哚 +* - +* 硝酸鹽還原 - - - ONPG + - - DNA水解 + + + 七葉苷水解 + - - 明膠酶 + + + 尿素酶 - + -/+ 枸櫞酸鹽 - - - *:量很少，要用二甲苯提取后才能測(cè)出,.,45,弧菌科,氧化酶+，發(fā)酵葡萄糖。 弧菌科3個(gè)菌屬的鑒別 氣單胞菌屬 鄰

22、單胞菌屬 弧菌屬 甘露醇 + - +/- 鳥(niǎo)氨酸 - + +/- 精氨酸 +/- + +/- 嗜鹽性 - - +/-,.,46,致病弧菌的生化特性,試 驗(yàn) 霍亂 擬態(tài) 副溶血 創(chuàng)傷 溶藻 河流 靛基質(zhì) + + + + +/- - V-P +/- - - - + - 西蒙枸櫞酸鹽 +/- +/- + + +/- + 葡萄糖產(chǎn)氣 - - - - - - 蔗糖 + - - - + + 甘露醇 + + + +/- + + 阿拉伯糖 - - + - - + 水楊苷 - - - + - - 硝酸鹽還原 + + + + + + 賴氨酸脫羧酶 + + + + + - 鳥(niǎo)氨酸脫羧酶 + + + + +/- -

23、精氨酸雙水解酶 - - - - - + 0g/L NaCl + + - - - - 30.0g/L NaCl + + + + + + 60.0g/L NaCl - - + +/- + + 100.0g/L NaCl - - - - + -,.,47,7種嗜溫氣單胞菌生化特性,親水 豚鼠 溫和 維隆 舒伯特 簡(jiǎn)達(dá) 易損 葡萄糖產(chǎn)氣 + - + + - + + V-P(25) + - + + V + - 七葉苷/水楊素 + + - + - - - 甘露醇/靛基質(zhì) + + + + - - + 蔗糖 + + + + - - - 纖維二糖 - +/- +/- + - - + 精氨酸雙水解酶 + + +

24、- + + + 賴氨酸脫羧酶 + - + + + + + 鳥(niǎo)氨酸脫羧酶 - - - + - - -,.,48,G+b(動(dòng)力、觸酶、O/F),動(dòng)力、觸酶、O/F,動(dòng)力 、溶血、菌落,丹毒死絲菌屬 乳桿菌屬 棒狀桿菌屬 李斯特菌屬 庫(kù)特菌屬 羅氏菌屬 奴卡菌屬,芽孢,-,+,炭疽芽孢桿菌,.,49,.,50,革蘭陽(yáng)性桿菌之奴卡菌屬,奴卡氏菌:革蘭陽(yáng)性桿狀、球桿狀，不同種類可產(chǎn)生不同的色素，如橙紅、粉紅、黃、黃綠、紫及其他顏色，有皺褶，顆粒狀。 抗酸染色呈弱陽(yáng)性，主要是星形奴卡菌和巴西奴卡菌。,.,51,奴卡菌的生化特性,星形 巴西 豚鼠 明膠 - + - 50 8h + - + 七葉苷 - + +