藥品衛(wèi)生與微生物學(xué)培訓(xùn)省公開課一等獎全國示范課微課金獎?wù)n件

藥品衛(wèi)生與微生物學(xué)培訓(xùn)PEKINGPHARMFIRST第1頁什么是微生物微生物是廣泛存在于自然界一群體形微?。ㄖ睆叫∮?mm）、結(jié)構(gòu)簡單、肉眼看不見，必須藉助光學(xué)或電子顯微鏡放大數(shù)百至數(shù)萬倍才能觀察到生物。第2頁微生物含有以下特點(diǎn)：1.體積小，面積大2.吸收多，轉(zhuǎn)化快（倍體重/h）3.生長旺，繁殖快（20min分裂一次）4.易變異，適應(yīng)強(qiáng)5.分布廣，種類多（10萬種以上）第3頁微生物怎樣分類？微生物按其生理結(jié)構(gòu)及化學(xué)組成差異可分成三大類：1.真核細(xì)胞型細(xì)胞核分化程度較高，有核膜、核仁和染色體；胞質(zhì)內(nèi)有完整細(xì)胞器（如內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、核糖體及線粒體等）。真菌屬于這類型微生物。第4頁微生物怎樣分類？2.原核細(xì)胞型細(xì)胞核分化程度低，僅有原始核質(zhì)，沒有核膜與核仁；細(xì)胞器不很完善。這類微生物種類眾多，有細(xì)菌、支原體、衣原體、立克次體、螺旋體和放線菌。第5頁微生物怎樣分類？3.非細(xì)胞型沒有經(jīng)典細(xì)胞結(jié)構(gòu)，亦無產(chǎn)生能量酶系統(tǒng)，只能在活細(xì)胞內(nèi)生長繁殖。體積微小，能經(jīng)過除菌濾器。病毒屬于這類型微生物。第6頁微生物分布微生物在自然界里分布非常廣泛土壤：土壤含有保溫性，土壤環(huán)境適合微生物生長水環(huán)境：水中溶解和懸浮有機(jī)、無機(jī)物，流動水有氧滲透可供微生物生長環(huán)境空氣：空氣不是微生物生長繁殖主要場所，不過空氣中飄浮著許多微生物。第7頁在普通空氣中，微生物達(dá)800~3500個(gè)/m3，在土壤中達(dá)1~500×108個(gè)/g，在嚴(yán)重污染水中可達(dá)107個(gè)/ml。人頭皮上有140萬個(gè)/cm2，兩手上約有4~40萬個(gè)，1g指甲污垢有38億個(gè)，1g糞便可達(dá)10~1000億個(gè)。能夠說微生物是無處不在，無處不有。

微生物分布第8頁中等大小細(xì)菌，1000個(gè)疊加在一起只有句號那么大。想像一下一滴牛奶，每毫升腐敗牛奶中約有5千萬個(gè)細(xì)菌。細(xì)菌繁殖速度之快是驚人。大腸桿菌代時(shí)為20分鐘，以此計(jì)算，在最正確條件下8小時(shí)后，1個(gè)細(xì)胞可繁殖到200萬上，10小時(shí)后可超出10億，微生物大小與繁殖速度第9頁1．細(xì)菌（原核單細(xì)胞生物）細(xì)菌按形狀可分為：球菌（0.5~2μm）、桿菌（長1~5μm，寬0.3~1μm）和螺形菌（大小與桿菌相同）。按革蘭氏染色法染色不一樣，分為革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌。微生物形態(tài)結(jié)構(gòu)第10頁2．霉菌（絲狀真菌通稱，真核多細(xì)胞生物）霉菌是真菌一部分。在培養(yǎng)基上長成絨毛狀或棉絮狀菌絲體真菌統(tǒng)稱為霉菌。霉菌細(xì)胞呈狹長管狀，稱為菌絲。菌絲直徑比細(xì)菌、放線菌大，約2~10μm。菌絲分枝連接，交織集合在一起總體稱為菌絲體。第11頁3．酵母菌（真核單細(xì)胞生物，屬真菌）酵母菌以單細(xì)胞存在，呈圓形、卵圓形和香腸形，比細(xì)菌大，細(xì)胞長5~30μm，寬1~5μm。酵母菌是主要工業(yè)微生物，用于釀酒，生產(chǎn)單細(xì)胞蛋白、B族維生素、核酸、輔酶A、細(xì)胞色素C等。普通對人體無害第12頁4．放線菌（原核單細(xì)胞生物）放線菌有生長發(fā)育良好菌絲體，呈分枝狀，菌絲寬為0.2~1.2μm，革蘭氏陽性。菌落常呈幅射狀，所以稱放線菌。第13頁5．病毒病毒是一類體積十分微小，結(jié)構(gòu)簡單，只含一個(gè)核酸（DNA或RNA），沒有產(chǎn)生能量酶系統(tǒng)，只能在活細(xì)胞內(nèi)以復(fù)制方式增殖非細(xì)胞型微生物。病毒是最常見致病微生物，人類傳染病中大約75%是由病毒引發(fā)。第14頁1．營養(yǎng)物2．pH值：大多數(shù)細(xì)菌最適pH為6.8~7.43．溫度：普通細(xì)菌最適溫度為30~40℃，真菌為20~30℃。細(xì)胞生長溫度極限為-7℃～90℃微生物生長影響原因第15頁4．氧氣：大多數(shù)細(xì)菌和全部霉菌都是需氧菌，少數(shù)細(xì)菌是厭氧菌，有些細(xì)菌和酵母菌是兼性需氧厭氧5．滲透壓：微生物細(xì)胞膜和全部生物膜一樣是一個(gè)半透膜，可讓水自由經(jīng)過，對溶質(zhì)則有選擇性。6．表面張力：表面活性劑可降低表面張力，它是影響細(xì)菌生長原因之一第16頁1．熱原質(zhì)（Pyrogen）:熱原質(zhì)即菌體中脂多糖，大多是革蘭氏陰性菌產(chǎn)生。注入人或動物體內(nèi)能引發(fā)發(fā)燒反應(yīng)，故名熱原質(zhì)。熱原質(zhì)耐高熱，高壓蒸汽滅菌（121℃，20’）不能使其破壞，加熱（180℃4h;250℃45';650℃1'）才使熱原質(zhì)失去作用。熱原質(zhì)可經(jīng)過普通細(xì)菌濾器，但沒有揮發(fā)性，所以，除去熱原質(zhì)最好方法是蒸餾。微生物產(chǎn)物：第17頁2．毒素：細(xì)菌可產(chǎn)生內(nèi)、外毒素，與細(xì)菌致病性親密相關(guān)。內(nèi)毒素（Endotoxin）即革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁脂多糖，其毒性成份為類脂A。菌體死亡崩解后釋放出來。外毒素(Exotoxin)是由革蘭氏陽性菌及少數(shù)革蘭氏陰性菌在生長代謝過程中釋放至菌體外蛋白質(zhì)。含有抗原性強(qiáng)、毒性強(qiáng)、作用特異性強(qiáng)突出特點(diǎn)。3.抗生素第18頁人是潔凈室最大污染源，占90%左右。普通男性每人每分鐘向周圍排放1000個(gè)以上含菌粒子，女性為750個(gè)以上。穿無菌服時(shí)，靜止時(shí)發(fā)菌量為10~300個(gè)/min，普通活動時(shí)發(fā)菌量為150~1000個(gè)/min，行走時(shí)發(fā)菌量為900~2500個(gè)/min。咳嗽一次發(fā)菌量為70~700個(gè)/min，噴嚏一次為4000~60000個(gè)/min。所以在潔凈室中，人數(shù)量和活動應(yīng)有尤其嚴(yán)格限制。人是最大污染源？第19頁為何GMP中要控制微生物？微生物種類繁多，有對人有益，有有害，有無益也無害。但在藥品生產(chǎn)過程中，不可能對環(huán)境中各種微生物加以區(qū)分對待，為確保藥品安全有效，需要對其進(jìn)行控制?？諝庵形⑸锒鄶?shù)附著在灰塵上，或以芽孢形式懸浮于空氣中，1μm以下者處于懸浮狀態(tài)，10μm以上者會逐步沉下來而形成菌塵。所以也要對塵粒進(jìn)行控制。第20頁大量臨床資料表明，注射劑（尤其是靜脈注射劑）如污染了7~12μm塵粒，可造成熱原反應(yīng)、肺動脈炎、微血栓或異物肉芽腫等，嚴(yán)重還會致人死命。而假如污染了細(xì)菌，輕則局部紅腫化膿，重則引發(fā)全身細(xì)菌性感染。第21頁“欣弗事件”

反應(yīng)了我國一些企業(yè)在微生物控制方面存在嚴(yán)重問題；而更為嚴(yán)重是一些企業(yè)普遍存在無菌檢驗(yàn)認(rèn)識誤區(qū)！第22頁藥品生產(chǎn)潔凈室（區(qū)）空氣潔凈度等級《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（年修訂)》潔凈度級別懸浮粒子最大允許數(shù)/立方米靜態(tài)動態(tài)(3)≥0.5μm≥5μm(2)≥0.5μm≥5μmA級(1)352020352020

B級352029352900C級35290035029000D級35029000不作要求不作要求第23頁水和一些物料衛(wèi)生學(xué)（法定）標(biāo)準(zhǔn)飲用水一些輔料#二部片劑二部膠囊劑%XX霜*細(xì)菌總數(shù)100/ml1000/g1000/g1000/g100/g霉菌、酵母菌數(shù)100/g100/g100/g10/g大腸桿菌3/100ml－－－NC沙門氏菌NCNCNCNC銅綠假單胞菌NCNCNC－金黃色葡萄球菌NCNCNC－注：#：包含有乳糖、藥用炭、淀粉、葡萄糖、糊精。%：XX膠囊屬中藥制劑，含胎盤粉，按中國藥典版一部要求，還不得檢出沙門菌。*：XX霜屬中藥制劑，用于創(chuàng)傷、燒傷，故要求細(xì)菌總數(shù)≤100個(gè)/g、霉菌數(shù)≤10個(gè)/g。說明：－：表示每1g或每1ml不得檢出。

NC：表示無要求。可不檢驗(yàn)。第24頁Disinfection殺死物體上病原微生物方法,并不一定能殺死含芽胞細(xì)菌或非病原微生物殺滅物體上全部微生物方法。不存在活菌意思。

預(yù)防或抑制體外細(xì)菌生長繁殖方法。消毒：滅菌：無菌：防腐：AsepsisSterilizationAntisepsis消毒與滅菌基本概念第25頁

無菌制劑——不存在活微生物制劑（GMP指南）。

非無菌制劑——所含活微生物量符合衛(wèi)生學(xué)標(biāo)準(zhǔn)制劑（GMP指南）。第26頁

熱力滅菌法慣用滅菌方法高溫殺滅細(xì)菌焚燒----最徹底滅菌方法燒灼----直接用火焰滅菌方法干烤----加熱160-180℃2小時(shí)干熱滅菌法第27頁濕熱滅菌法加壓蒸汽滅菌法最有效滅菌方法121℃，20-30分鐘煮沸消毒法水煮100℃5分鐘(繁殖體)-2小時(shí)(芽胞)流通蒸汽消毒法巴氏消毒法間歇蒸汽滅菌法水蒸汽100℃，15-30分鐘(繁殖體)重復(fù)屢次流動蒸汽間歇加熱滅菌較低溫度（61℃30分鐘）殺滅致病菌第28頁濕熱滅菌與干熱滅菌比較同一溫度下，濕熱滅菌比干熱滅菌效果好1、濕熱中細(xì)菌菌體蛋白較易凝固2、濕熱穿透力比干熱大3、濕熱蒸汽有潛熱第29頁

化學(xué)消毒滅菌法

利用化學(xué)試劑殺滅微生物方法類別作用機(jī)制慣用種類酚類蛋白變性，細(xì)胞膜損傷石炭酸醇類蛋白變性乙醇氧化劑氧化、蛋白沉淀高錳酸甲、過氧乙酸、碘酒重金屬鹽氧化、蛋白酶變性紅汞、硫柳汞表面活性劑蛋白變性，細(xì)胞膜損傷新潔而滅染料干擾氧化、抑制繁殖龍膽紫慣用消毒劑種類第30頁消毒劑常用量用途乙醇①70%~75%水溶液②0.5%洗必泰溶于70%乙醇，再加入2%甘油用于皮膚、器具等消毒供洗手用消毒異丙醇75%水溶液用于皮膚、器具等消毒甲醛37%~40%甲醛液8~9ml，再加入4~5g高錳酸鉀每m3熏蒸量，密閉12~24h。刺激性強(qiáng)戊二醛2%水溶液用于空氣、器具等消毒。廣譜、高效、低毒，可殺芽孢和病毒。刺激性較輕。慣用消毒劑用量及用途第31頁

新潔爾滅（苯扎溴銨）0.1%水溶液用于皮膚、粘膜、器具等消毒，有清潔和消毒雙重功效?？咕V較窄。

杜滅芬（消毒寧）0.05%~0.1%水溶液用于皮膚、器具等消毒

過氧乙酸①0.2%~0.5%水溶液②新配0.5%水溶液③1g/m3用于器具等消毒抗菌譜廣，可用于皮膚消毒殺滅一些病毒熏蒸，但性質(zhì)不穩(wěn)定

乳酸①0.33~1mol/L②1~1.5ml/m3熏蒸或與等量苯酚適用熏蒸噴霧，用于空氣消毒，有強(qiáng)殺菌作用熏蒸，密閉12h以上

麝香草酚5%麝香草酚溶于50%乙醇噴灑墻面、地面，殺霉菌第32頁消毒劑使用注意

長久使用同一個(gè)消毒劑，往往會使細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性，達(dá)不到應(yīng)有效果所以，在實(shí)際生產(chǎn)使用中，

應(yīng)定時(shí)更換不一樣消毒劑。第33頁輻射有兩種類型：一個(gè)是電磁波輻射，如紫外線、紅外線、微波；一個(gè)是電離輻射，如可引發(fā)被照射物電離X射線、γ射線。

輻射滅菌法

第34頁

輻射滅菌法

§紫外線紫外光波長在136~390nm之間，其中260nm左右能破壞核酸，殺菌作用最強(qiáng)。紫外線消毒效果與光源功率、光源與被照射物距離、照射時(shí)間、溫度和濕度等原因相關(guān)。紫外燈輸出功率隨使用時(shí)間增加而降低。國產(chǎn)紫外燈平均壽命普通為h，超出平均壽命時(shí)必須更換。紫外線穿透力很弱，不能穿透普通包裝材料，如玻璃、塑料薄膜、紙等。第35頁§紅外線經(jīng)過加熱碳化硅板產(chǎn)生輻射熱能，由空氣傳導(dǎo)加熱滅菌。如紅外線烤箱，溫度可達(dá)180℃左右。熱效應(yīng)特點(diǎn)是由表及里。§微波

微波滅菌主要是因其熱效應(yīng)。微波加熱升溫快，溫度高且均勻，殺菌作用強(qiáng)。熱效應(yīng)特點(diǎn)是由里及表。不一樣性質(zhì)物品吸收微波能力不一樣，其熱效應(yīng)和消毒效果也不一樣。第36頁§60Co滅菌放射性同位素60Co（或137Cs）衰變時(shí)可放射出γ射線，γ射線能量高、穿透力強(qiáng)，可使細(xì)胞內(nèi)各種活性物質(zhì)發(fā)生化學(xué)改變，從而使細(xì)菌損傷或死亡。經(jīng)60Co輻射滅菌物品溫度升高極少，普通僅約5℃，故又稱“冷滅菌”。第37頁

濾過除菌法

用物理阻留方法將液體或空氣中細(xì)菌除去,以到達(dá)除菌目標(biāo)。濾菌器含有微細(xì)小孔<0.22微米,只允許液體或氣體經(jīng)過,而大于孔徑細(xì)菌等顆粒不能經(jīng)過。適用范圍血清、毒素、抗生素以及空氣等除菌第38頁濾菌過程第39頁臭氧是一個(gè)高效廣譜殺菌劑，對細(xì)菌、病毒、霉菌、芽孢、真菌和微生物等都含有極強(qiáng)殺滅力。臭氧殺菌能力比紫外線高20%，且在空氣中自行擴(kuò)散，殺菌無死角，在水中殺菌速度比氯快600倍。它滅活病毒機(jī)理是經(jīng)過直接破壞其RNA或DNA物質(zhì)來完成，而殺滅細(xì)菌、霉菌類微生物，則是臭氧首先作用于細(xì)胞核，繼而破壞膜內(nèi)組織，直至殺死。因?yàn)槌粞踝罱K還原為氧氣，所以它對人體和環(huán)境沒有任何副作用，沒有二次污染。它不但對大腸桿菌、綠膿桿菌及雜菌等有消毒能力，而且對霉菌也很有效。

臭氧滅菌第40頁

◆GMP所制訂條款主要是針對毀滅任何藥品生產(chǎn)中隱患，這種隱患是無法靠對成品檢驗(yàn)完全預(yù)防。這里指隱患基本上有兩個(gè)方面：即生產(chǎn)過程中交叉污染和混藥差錯(cuò)

◆進(jìn)入潔凈室(區(qū))空氣必須凈化，并依據(jù)生產(chǎn)