毛發(fā)中安非拉酮等7種減肥藥的液相色譜-質(zhì)譜檢驗(yàn)方法

1毛發(fā)中安非拉酮等7種減肥藥的液相色譜-質(zhì)譜檢驗(yàn)方法本文件描述了毛發(fā)中安非拉酮、苯甲曲秦、芬氟拉明、芬美曲秦、芬特明、馬吲哚和西布曲明的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢驗(yàn)方法，包括原理，試劑、儀器和設(shè)備，定性分析，定量分析以及分析結(jié)果評(píng)價(jià)。本文件適用于毛發(fā)中安非拉酮、苯甲曲秦、芬氟拉明、芬美曲秦、芬特明、馬吲哚和西布曲明的定性分析和定量分析。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GA/T122毒物分析名詞術(shù)語(yǔ)3術(shù)語(yǔ)和定義GA/T122界定的術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。毛發(fā)樣品經(jīng)清洗和冷凍濕法研磨后，以超聲法提取，采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀進(jìn)行檢測(cè)，經(jīng)與平行操作的空白樣品和添加樣品作對(duì)照，以保留時(shí)間、質(zhì)譜特征離子對(duì)峰和離子對(duì)豐度比進(jìn)行定性分析；以定量離子對(duì)峰面積或峰面積比值為依據(jù)，采用外標(biāo)法或內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行定量分析。5試劑、儀器和設(shè)備試驗(yàn)用水應(yīng)為符合GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。所用試劑及要求如下。a)甲醇：色譜純。b)乙腈：色譜純。c)甲酸：含量≥98%,色譜純。d)乙酸銨：色譜純。f)丙酮：分析純。g)溶液配制：1)含8%乙腈的2mmol/L甲酸銨緩沖溶液：稱取甲酸銨0.063g,置于500mL容量瓶中，加水溶解，然后加入1%甲酸溶液115μL和乙腈40mL,最后加水定容至刻度，搖勻備用，H約為5.3:2)提取溶液：取甲醇、乙腈、符合5.1g)1)的含8%乙腈的2mmol/L甲酸銨緩沖溶液適量配制體積比為25:25:50的提取溶液：3)含0.1%甲酸的20mmol/L乙酸銨緩沖溶液：分別取乙酸銨1.54g和甲酸1mL,置于1000L容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，搖勻備用，陽(yáng)約為4。h)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液：1)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)儲(chǔ)備溶液：根據(jù)安非拉酮、苯甲曲秦、芬美曲秦、芬特明、芬氟拉明、馬吲哚和西布曲明標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的純度和鹽型換算后，分別精密稱取適量，用甲醇配制成質(zhì)量濃度為21.0mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)儲(chǔ)備溶液。密封，置于冰箱中冷凍保存，有效期12個(gè)月，或采用市售標(biāo)準(zhǔn)溶液：2)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)工作溶液：試驗(yàn)中所用其他濃度的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)工作溶液均由符合5.1h)1)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)儲(chǔ)備溶液用甲醇稀釋得到。密封，置于冰箱中冷藏保存，有效期3個(gè)月。i)內(nèi)標(biāo)溶液：1)內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備溶液：精密稱取地西泮-d(或其他合適內(nèi)標(biāo)物)適量，用甲醇配制成1.0mg/mL的內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備溶液。密封，置于冰箱中冷凍保存，有效期12個(gè)月，或采用市售標(biāo)準(zhǔn)溶液：2)內(nèi)標(biāo)工作溶液：Ing/mL的內(nèi)標(biāo)工作溶液由符合5.1i)1)的內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備溶液用符合5.1g)2)的提取溶液稀釋得到。密封，置于冰箱中冷藏保存，有效期3個(gè)月。5.2儀器和設(shè)備儀器和設(shè)備及要求如下。a)液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源(ESI)。b)電子天平：分度值≤0.1mg。d)超聲波清洗儀。聚四氟乙烯濾膜：0.22μm.h)移液器。6定性分析6.1樣品前處理依次用適量的水和丙酮將毛發(fā)樣品振蕩洗滌兩次，晾干后剪成約1mm段，稱取毛發(fā)樣品20mg于2L研磨管中。加研磨珠適量，再加1ng/mL內(nèi)標(biāo)工作溶液1mL,置冷凍研磨儀中粉碎，冰浴超聲30min,12000r/min離心3min,取上清液，經(jīng)濾膜過(guò)濾，濾液供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀分析。6.1.2空白樣品稱取空白毛發(fā)樣品20mg作為空白樣品，按6.1.1的方法，與檢材樣品平行操作。6.1.3添加樣品稱取空白毛發(fā)樣品20mg,添加100ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)工作溶液10μL,配制成0.05ng/mg添加樣品，然后按6.1.1的方法，與檢材樣品平行操作。6.2儀器檢測(cè)6.2.1儀器條件6.2.1.1液相色譜條件以下為參考條件，可根據(jù)不同品牌儀器等實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)整。a)色譜柱：五氟苯基柱(100m×2.1mm.5μm)或其他等效柱。b)流動(dòng)相：流動(dòng)相A為含0.1%甲酸的20mmol/L乙酸銨緩沖溶液，流動(dòng)相B為乙睛：采用梯度洗脫方法，梯度洗脫程序見(jiàn)表1。c)柱溫：室溫。3表1流動(dòng)相梯度洗脫程序06.2.1.2質(zhì)譜條件6.2.1.2.1以下為參考條件，可根據(jù)不同品牌儀器等實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)整。a)離子源：電噴霧電離-正離子模式(ESI+)。b)檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)。d)碰撞氣、氣簾氣、霧化氣、輔助氣均為高純氮?dú)?，使用前調(diào)節(jié)各氣流流量以使質(zhì)譜靈敏度達(dá)到檢測(cè)要求。e)去簇電壓、碰撞能量?jī)?yōu)化至最佳靈敏度。6.2.1.2.2在符合6.2.1.1和6.2.1.2的液相色譜條件和質(zhì)譜條件下，目標(biāo)物和內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)譜參數(shù)和保留時(shí)間參見(jiàn)表2。表2目標(biāo)物和內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)譜參數(shù)和保留時(shí)間目標(biāo)物wV地西泮-d(內(nèi)標(biāo)物)分別吸取空白樣品提取液、檢材樣品提取液和添加樣品提取液，按6.2.1的條件進(jìn)樣分析。記錄空白樣品、檢材樣品和添加樣品中目標(biāo)物可疑色譜峰的保留時(shí)間、質(zhì)譜特征離子對(duì)和離子對(duì)豐度比。4以保留時(shí)間、質(zhì)譜特征離子對(duì)峰和離子對(duì)豐度比作為定性判斷依據(jù)。若檢材樣品中出現(xiàn)目標(biāo)物的兩對(duì)定性離子對(duì)的色譜峰，保留時(shí)間與添加樣品中相應(yīng)目標(biāo)物的色譜峰保留時(shí)間比較，相對(duì)誤差在±2.5%內(nèi)，且定性離子對(duì)豐度比與添加樣品的離子對(duì)豐度比之相對(duì)誤差不超過(guò)表3規(guī)定的范圍，則可判斷檢材樣品中檢出該種目標(biāo)物。表3離子對(duì)豐度比的最大允許相對(duì)誤差稱取檢材樣品毛發(fā)20mg兩份，然后按6.1.1的方法操作。與檢材樣品平行操作。目標(biāo)物的相關(guān)信息及方法線性范圍、檢出限與定量限見(jiàn)附錄A。檢材樣品中目標(biāo)物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)應(yīng)在工作曲線的線性范圍內(nèi)。配制單點(diǎn)質(zhì)量分?jǐn)?shù)的添加樣樣品中目標(biāo)物質(zhì)量分?jǐn)?shù)應(yīng)在添加樣品目標(biāo)物質(zhì)量分?jǐn)?shù)的(100±50)%范圍內(nèi)。儀器條件應(yīng)符合6.2.1的規(guī)定。記錄檢材樣品、系列質(zhì)量分?jǐn)?shù)的添加樣品或單點(diǎn)質(zhì)量分?jǐn)?shù)的添加樣品中目標(biāo)物及內(nèi)標(biāo)物(內(nèi)標(biāo)法)定量離子對(duì)的峰面積值，然后計(jì)算檢材樣品中目標(biāo)物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。在系列質(zhì)量分?jǐn)?shù)的添加樣品中，以目標(biāo)物定量離子對(duì)的峰面積值(D為縱坐標(biāo)、目標(biāo)物質(zhì)量分?jǐn)?shù)(0為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得線性方程。根據(jù)檢材樣品中目標(biāo)物的峰面積值，按式(1)計(jì)算檢材樣品中目標(biāo)物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。C——檢材樣品中目標(biāo)物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，單位為納克每毫克(na—線性方程的截距：b—線性方程的斜率。根據(jù)檢材樣品和添加樣品中目標(biāo)物的峰面積值，按式(2)計(jì)算檢材樣品中目標(biāo)物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。5式中：C—材樣品中目標(biāo)物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，單位為納克每毫克(ng/ng):A——檢材樣品中目標(biāo)物的峰面積值：c——添加樣品中目標(biāo)物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，單位為納克每毫克(ng/g)。在系列質(zhì)量分?jǐn)?shù)的添加樣品中，以目標(biāo)物與內(nèi)標(biāo)物定量離子對(duì)的峰面積比值(D為縱坐標(biāo)、目標(biāo)根據(jù)檢材樣品中目標(biāo)物及內(nèi)標(biāo)物定量離子對(duì)的峰面積比值，按式(3)計(jì)算檢材樣品中目標(biāo)物的質(zhì)C——檢材樣品中目標(biāo)物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，單位為納克每毫克(ng/mg);b—線性方程的斜率。根據(jù)檢材樣品和添加樣品中目標(biāo)物與內(nèi)標(biāo)物定量離子對(duì)的峰面積比值，按式(4)計(jì)算檢材樣品中c——檢材樣品中目標(biāo)物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，單位為納克每毫克(ng/g);A—檢材樣品中目標(biāo)物與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值；A——添加樣品中目標(biāo)物與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值；c——添加樣品中目標(biāo)物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，單位為納克每毫克(ng/mg)。7.3.4計(jì)算相對(duì)相差檢材樣品平行測(cè)定兩份，相對(duì)相差按式(5)計(jì)算。C.C——兩份檢材樣品中目標(biāo)物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，單位為納克每毫克(ng/ng);C兩份檢材樣品中目標(biāo)物質(zhì)量分?jǐn)?shù)的平均值(G+C/2,單位為納克每毫克(ng/mg)。陰性結(jié)果評(píng)價(jià)包括：a)