2024-2025學(xué)年高中生物第一章無菌操作技術(shù)實(shí)踐第一節(jié)微生物的分離和培養(yǎng)第2課時(shí)微生物分離和培養(yǎng)的技術(shù)操作以大腸桿菌為例學(xué)案蘇教版選修1

PAGEPAGE1第2課時(shí)微生物分別和培育的技術(shù)操作(以大腸桿菌為例)學(xué)習(xí)導(dǎo)航明目標(biāo)、知重點(diǎn)難點(diǎn)了解培育基的配制過程及培育基的配制原則。(重點(diǎn))駕馭無菌操作和接種技術(shù)。(重、難點(diǎn))[學(xué)生用書P9]閱讀教材P10～14分析大腸桿菌的接種與分別培育1．配制牛肉膏蛋白胨培育基eq\x(配制培育基)→eq\x(調(diào)整pH)→eq\x(分裝)→eq\x(包扎)→eq\x(滅菌)→eq\x(擱置斜面)2．斜面接種和培育大腸桿菌斜面接種大腸桿菌的主要目的有菌種轉(zhuǎn)移、擴(kuò)大培育和保存純凈菌種等。詳細(xì)操作步驟：eq\x(打算接種)→eq\x(接種環(huán)滅菌)→eq\x(試管口滅菌)→eq\x(挑取少許菌種)→eq\x(劃線接種)→eq\x(培育大腸桿菌)→eq\x(保存菌種)3．平板劃線分別和培育大腸桿菌在試驗(yàn)室中，平板經(jīng)常被用來培育、分別細(xì)菌等微生物。(1)牛肉膏蛋白胨固體培育基的平板制作配制好的培育基裝瓶eq\o(→,\s\up7(加棉塞))滅菌→倒平板操作(A.打開瓶塞→B.灼燒瓶口滅菌→C.倒培育基→D.倒置平板)(2)平板劃線分別與培育大腸桿菌①平板劃線法的含義：用帶有微生物的接種環(huán)在平板培育基表面通過分區(qū)劃線而純化分別微生物的一種方法。②留意事項(xiàng)：接種和劃線操作時(shí)須要在酒精燈火焰旁邊進(jìn)行。③培育結(jié)果：可以得到由單個(gè)細(xì)菌增殖而形成的菌落。判一判(1)錐形瓶的瓶口通過火焰灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培育基。(√)(2)平板冷凝后，將平板倒置，既可以使培育基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培育基，造成污染。(√)(3)制備細(xì)菌培育基的操作依次為配制培育液、調(diào)整pH、滅菌、分裝。(×)(4)運(yùn)用已滅菌的接種環(huán)、培育基，操作過程中不再滅菌。(×)連一連培育基的配制[學(xué)生用書P10]利用培育基培育微生物首先要把微生物接種到培育基上，在試驗(yàn)室中，平板經(jīng)常被用來培育、分別細(xì)菌等微生物。結(jié)合教材P10～14內(nèi)容完成以下探究。探究1下表是牛肉膏蛋白胨固體培育基的成分，請說出各成分供應(yīng)的養(yǎng)分培育基組分供應(yīng)的主要養(yǎng)分物質(zhì)牛肉膏5.0g碳源、氮源、磷酸鹽和維生素蛋白胨10.0g碳源、氮源和維生素NaCl5.0g無機(jī)鹽H2O定容至1000mL氫元素、氧元素探究2完善下面牛肉膏蛋白胨培育基的配制步驟，學(xué)會(huì)培育基的配制配制培育基↓調(diào)整pH至7.2↓分裝：培育基的高度約為試管長度的1/5↓包扎↓滅菌：高壓蒸汽滅菌是常用的滅菌方法之一↓擱置斜面：待試管冷卻至50_℃左右，斜面長度不超過試管總長的1/21．培育基的配制原則(1)目的明確：不同微生物需求不同，依據(jù)培育目的進(jìn)行配制。(2)養(yǎng)分要協(xié)調(diào)：養(yǎng)分物質(zhì)的濃度和比例要相宜。(3)pH要相宜：為維持pH的相對恒定，可在培育基中加入緩沖劑，常用磷酸氫二鉀或磷酸二氫鉀。2．培育基配制中的留意事項(xiàng)(1)用天平稱量時(shí)，留意放等大的稱量紙。(2)培育基熔化中的留意事項(xiàng)①在瓊脂熔化時(shí)要不斷用玻璃棒攪拌，防止瓊脂糊底而導(dǎo)致燒杯裂開。②熔化后須要先調(diào)整pH，再分裝，后滅菌。(3)培育基倒平板時(shí)的留意事項(xiàng)①培育基滅菌后要冷卻到50℃左右時(shí)起先倒平板。其緣由是瓊脂是一種多糖，在98℃以上熔化，在44℃以下凝固，倒平板時(shí)高于50℃會(huì)燙手，低于50℃時(shí)，若不能剛好操作，瓊脂會(huì)凝固。②倒平板時(shí)，要使錐形瓶的瓶口通過火焰。通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培育基。倒平板整個(gè)過程要在酒精燈火焰旁進(jìn)行，避開雜菌污染。③平板冷凝后，要將平板倒置。因?yàn)槠桨謇淠?，皿蓋上會(huì)凝聚水珠，培育基表面的溫度也較高，平板倒置后，既可使培育基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可防止皿蓋上的水珠落入培育基，造成污染。④在倒平板的過程中，假如不當(dāng)心將培育基濺在皿蓋與皿底之間的部位，那么這個(gè)平板不能用來培育微生物，因?yàn)榭諝庵械奈⑸锟赡茉诿笊w與皿底之間的培育基上滋生。1．下列有關(guān)培育基配制原則的表述，正確的是()A．任何培育基都必需含有碳源、氮源、礦質(zhì)元素、水及生長因子B．碳源和氮源必需具有肯定比例，碳元素的含量最多，其次為氮元素C．微生物的生長除受養(yǎng)分因素影響外，還受到pH、氧氣、滲透壓的影響D．養(yǎng)分物質(zhì)的濃度越高越好解析：選C。培育基中一般含有碳源、氮源、無機(jī)鹽和水等，有些培育基中還需加入生長因子。培育基中的碳源和氮源要有肯定的比例，并不肯定碳元素含量最多。養(yǎng)分物質(zhì)濃度過高會(huì)導(dǎo)致微生物失水死亡。2．下列關(guān)于制備牛肉膏蛋白胨固體培育基的敘述，錯(cuò)誤的是()A．操作依次為計(jì)算、稱量、熔化、擱置斜面、滅菌B．將稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯C．待培育基冷卻至50℃左右時(shí)進(jìn)行擱置斜面D．斜面培育基形成的斜面的長度不超過試管總長的1/2答案：A大腸桿菌的接種[學(xué)生用書P11]視察下圖接種操作程序，學(xué)會(huì)斜面接種和培育大腸桿菌。打算接種：用一只手的大拇指和其他四指夾住菌種試管，管口并齊，管內(nèi)培育基斜面對上↓接種環(huán)滅菌：手持接種環(huán)，將接種環(huán)的環(huán)端和接種時(shí)可能進(jìn)入試管內(nèi)的部分放在酒精燈火焰上，來回灼燒多次，以達(dá)到快速徹底滅菌的目的↓試管口滅菌：在火焰邊用握有接種環(huán)的手的小指、無名指、中指和掌心拔去兩支試管上的試管塞，快速將試管口通過火焰2～3次，以殺滅試管口上的微生物↓挑取少量菌種：將接種環(huán)伸入有菌種的試管內(nèi)，讓環(huán)部先接觸培育基斜面頂端或其他無菌的部位使其冷卻。然后，輕輕挑取少許菌種，在抽出接種環(huán)時(shí)，其帶菌部位不要觸及試管壁，也不要通過火焰處↓劃線接種：將上述帶菌的接種環(huán)伸入待接種的試管中，在培育基斜面上由底部向上輕輕劃“S”型曲線。留意劃曲線時(shí)不要將培育基表面劃破↓抽出接種環(huán)：將試管口和試管塞分別通過火焰2～3次，快速塞緊試管。多次灼燒接種環(huán)確保無菌，冷卻后，放回原處↓培育：將接種過菌種的試管放在恒溫箱中(37℃)培育24h，視察接種和培育的結(jié)果↓保存菌種：將增殖的菌種放置在冰箱冷藏室中(4℃)保存1．接種勝利的標(biāo)準(zhǔn)假如培育基上生長的菌落的顏色、形態(tài)、大小基本一樣，并符合大腸桿菌菌落的特點(diǎn)，則說明接種操作是符合要求的；假如培育基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接種過程中，無菌操作還未達(dá)到要求，試驗(yàn)失敗，須要分析緣由，再次接種。2．接種時(shí)的幾個(gè)留意事項(xiàng)(1)接種過程須要兩支試管：一支試管含有菌種，另一支試管含有培育基，用于接種；(2)接種過程中為殺滅試管口上沾染的微生物要對試管口進(jìn)行滅菌；(3)帶菌的接種環(huán)抽出試管時(shí)帶菌部分不行觸及試管壁；(4)接種劃線時(shí)不要將培育基的表面劃破。1．下列關(guān)于接種操作過程的敘述，不正確的是()A．要將接種環(huán)灼燒滅菌B．取下棉塞后要將試管口灼燒滅菌C．將接種環(huán)伸入試管內(nèi)，先接觸長菌多的部位D．接種后還要將管口滅菌加塞解析：選C。接種環(huán)伸入試管內(nèi)后先接觸未長菌的部位，待接種環(huán)冷卻后再接觸長菌部位。2．下列關(guān)于接種微生物的敘述，錯(cuò)誤的是()A．用玻璃涂布器進(jìn)行涂布平板接種B．用接種針進(jìn)行穿刺接種C．常用接種工具有玻璃涂布器、接種環(huán)等D．運(yùn)用接種工具時(shí)不用滅菌答案：D大腸桿菌的分別和培育[學(xué)生用書P12]完善下面示意圖，學(xué)會(huì)分別和培育大腸桿菌。1．平板劃線法的類型：有扇形劃線、連續(xù)劃線、交叉劃線、方格劃線等(如下圖)。2．平板劃線操作的留意事項(xiàng)(1)第一次劃線及每次劃線之前都須要灼燒接種環(huán)，劃線結(jié)束后仍需灼燒接種環(huán)，三次灼燒的目的不同。項(xiàng)目目的第一次劃線前灼燒避開接種環(huán)上可能存在的微生物污染培育物每次劃線前灼燒殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種，使每次劃線的菌種均來自上次劃線末端劃線結(jié)束灼燒殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避開細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者(2)灼燒接種環(huán)之后，要待其冷卻后才能伸入菌液中，以免溫度太高殺死菌種。(3)除第一次劃線外，每次劃線都從上一次劃線的末端起先，這樣能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步削減，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落。(4)劃線用力要大小適當(dāng)，防止用力過大將培育基劃破。1．斜面培育基正確的劃線示意圖是()解析：選A。正確的接種方法是將帶菌的接種環(huán)伸入待接種的試管中，在培育基表面上由底部向上輕劃“S”型曲線，將菌種接種到培育基上。2．下列有關(guān)平板劃線操作的敘述，不正確的是()A．第一次操作前灼燒接種環(huán)是為了避開接種環(huán)上可能存在的微生物污染培育物B．每次劃線前，灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種C．在其次區(qū)域內(nèi)劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種干脆來源于菌液D．劃線結(jié)束后，灼燒接種環(huán)能剛好殺死接種環(huán)上的菌種，避開細(xì)菌污染環(huán)境或感染操作者解析：選C。平板劃線法通過接種環(huán)在瓊脂固體培育基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培育基的表面，以形成單菌落。因此，每次劃線時(shí)，都應(yīng)將接種環(huán)上原有的菌體殺死，劃線時(shí)分散的菌體來自上次劃線結(jié)束時(shí)的菌體。核心學(xué)問小結(jié)[網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建][關(guān)鍵語句]在無菌條件下將微生物接入培育基的操作過程叫做接種。細(xì)菌培育基的配制過程：配制培育基→調(diào)整pH→分裝→包扎→滅菌→擱置斜面。[隨堂檢測][學(xué)生用書P13]學(xué)問點(diǎn)一培育基的配制1．在培育基的配制過程中，具有如下步驟，其正確依次為()①熔化②調(diào)pH③加棉塞④包扎⑤分裝⑥稱量A．①②⑥⑤③④B．⑥①②⑤③④C．⑥①②⑤④③D．①②⑤④⑥③解析：選B。上述步驟中，培育基的配制依次為稱量→熔化→調(diào)pH→分裝→加棉塞→包扎。2．牛肉膏蛋白胨培育基中加入瓊脂這一志向的凝固劑，下列關(guān)于瓊脂的說法，不正確的是()A．不被所培育的微生物分解利用，對所培育的微生物無毒害作用B．在微生物生長溫度范圍內(nèi)保持固體狀態(tài)C．瓊脂凝固點(diǎn)低，利于微生物的生長D．瓊脂在滅菌過程中不會(huì)被破壞，透亮度好，凝固力強(qiáng)解析：選C。在液體培育基中加入凝固劑如瓊脂后，制成固體培育基，它是試驗(yàn)室中最常用的培育基之一。固體培育基中可形成肉眼可見的單個(gè)細(xì)胞繁殖而來的子細(xì)胞群體，即菌落，用于微生物的分別、計(jì)數(shù)和菌種鑒定等。瓊脂作為一種志向的凝固劑，是其性質(zhì)確定瓊脂不會(huì)被微生物利用且對微生物無毒害作用，在滅菌過程中不會(huì)被破壞，透亮度好，凝固力強(qiáng)。瓊脂在98℃以上可溶解于水，在45℃以下凝固，所以在微生物生長溫度范圍內(nèi)保持固體狀態(tài)。學(xué)問點(diǎn)二無菌操作和接種技術(shù)3．做“微生物的分別與培育”試驗(yàn)時(shí)，下列敘述正確的是()A．高壓滅菌加熱結(jié)束時(shí)，打開放氣閥使壓力表指針回到零后，開啟鍋蓋B．倒平板時(shí)，應(yīng)將打開的皿蓋放到一邊，以免培育基濺到皿蓋上C．為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落D．用記號筆標(biāo)記培育皿中菌落時(shí)，應(yīng)標(biāo)記在皿底上解析：選D。A項(xiàng)，在高壓滅菌的操作過程中，加熱結(jié)束后應(yīng)讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，待壓力表的壓力降到零時(shí)，打開排氣閥，旋松螺栓，打開蓋子。B項(xiàng)，倒平板時(shí)，用左手將培育皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，而不是完全取下放到一邊。C項(xiàng)，接種環(huán)經(jīng)火焰灼燒滅菌后應(yīng)在火焰旁冷卻后再挑取菌落。D項(xiàng)，在微生物的培育中，一般將培育皿倒置，在皿底上用記號筆做標(biāo)記。4．下圖為試驗(yàn)室培育和純化大腸桿菌過程中的部分操作步驟，下列說法錯(cuò)誤的是()A．①②③步驟操作時(shí)須要在酒精燈火焰旁進(jìn)行B．步驟①中待倒入的培育基冷卻后蓋上培育皿的皿蓋C．步驟③中，每次劃線前后都需對接種環(huán)進(jìn)行滅菌處理D．劃線接種結(jié)束后，將圖④平板倒置后放入培育箱中培育解析：選B。由圖可知，①是倒平板，②是用接種環(huán)沾取菌液，③是進(jìn)行平板劃線，④是培育。①②③步驟操作時(shí)須要在酒精燈火焰旁進(jìn)行，防止被雜菌污染，A正確；倒完平板后馬上蓋上培育皿，冷卻后將平板倒過來放置，B錯(cuò)誤；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種干脆來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目漸漸削減，以便得到菌落，C正確；劃線接種結(jié)束后，將平板倒置后放入培育箱中培育，有利于表面的水分更好的揮發(fā)和防止皿蓋上的水珠落入培育基造成污染，D正確。5．如圖是微生物平板劃線示意圖。劃線的依次為1→2→3→4→5。下列操作方法正確的是()A．操作前要將接種環(huán)放在火焰邊灼燒滅菌B．劃線操作應(yīng)在火焰上進(jìn)行C．在5區(qū)域中才可以得到所需菌落D．在1、2、3、4、5區(qū)域中劃線前后都要對接種環(huán)滅菌解析：選D。在每次劃線前后都要對接種環(huán)進(jìn)行滅菌，接種環(huán)的滅菌方法應(yīng)是在火焰上灼燒，接種時(shí)劃線操作是在火焰旁進(jìn)行。在5個(gè)區(qū)域中，只要有單個(gè)活細(xì)菌，通過培育即可獲得所需菌落。6．“創(chuàng)衛(wèi)”是創(chuàng)建衛(wèi)生城市的簡稱。“衛(wèi)生城市”是一個(gè)城市綜合功能和文明程度的重要標(biāo)記。某同學(xué)欲利用所學(xué)習(xí)的微生物培育學(xué)問，通過試驗(yàn)證明痰液中含有細(xì)菌，來提倡同學(xué)們不要隨地吐痰，為“創(chuàng)衛(wèi)”添一份力。請回答下列問題：(1)欲培育細(xì)菌必需先制備可供細(xì)菌生長的培育基。試驗(yàn)室中常用牛肉膏蛋白胨固體培育基來培育微生物，該培育基的組成成分包括牛肉膏、蛋白胨、NaCl、________、H2O等；該培育基中微生物所需的氮源來自________；制備該培育基的步驟是：配制培育基→調(diào)整pH→分裝→包扎→滅菌→倒平板，其中滅菌常用的方法是______________；培育基滅菌后，須要冷卻到________℃左右才能倒平板，等平板冷凝后，還須要將平板倒置，主要目的是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(2)為了使試驗(yàn)更有勸服力，該同學(xué)設(shè)置了空白比照組和若干試驗(yàn)組，其中比照組的作用是__________________。若在某次調(diào)查中，某一試驗(yàn)組平板上的平均菌落數(shù)為39個(gè)，而空白比照組的平板上出現(xiàn)了9個(gè)菌落，這種結(jié)果說明在此次調(diào)查中出現(xiàn)了________現(xiàn)象。答案：(1)瓊脂牛肉膏、蛋白胨高壓蒸汽滅菌法50防止皿蓋上的水珠落入培育基，造成污染(2)解除試驗(yàn)組中非測試因素對試驗(yàn)結(jié)果的影響(答案合理即可)污染[課時(shí)作業(yè)][學(xué)生用書P63(單獨(dú)成冊)]一、選擇題1．下面關(guān)于斜面接種大腸桿菌的主要目的，表述錯(cuò)誤的是()A．菌種轉(zhuǎn)移B．?dāng)U大培育C．保存純凈菌種D．消毒答案：D2．下列有關(guān)微生物培育的敘述，正確的是()A．培育前均須要對培育基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌B．均要確保培育基中含有所需的全部養(yǎng)分物質(zhì)C．平板劃線法和涂布平板法均可用于鑒定菌種D．均須要放在恒溫培育箱中通入氧氣培育解析：選C。微生物接種前，要對培育基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，A錯(cuò)誤；培育基中只須要含有滿意微生物生長須要的養(yǎng)分物質(zhì)，B錯(cuò)誤；平板劃線法和涂布平板法均可用于鑒定菌種，C正確；有些微生物屬于厭氧型，就不須要氧氣，D錯(cuò)誤。3．某探討小組從有機(jī)廢水中分別微生物用于廢水處理。下列敘述正確的是()A．培育基分裝到培育皿后進(jìn)行滅菌B．轉(zhuǎn)換劃線角度后需灼燒接種環(huán)再進(jìn)行劃線C．接種后的培育皿需放在光照培育箱中培育D．培育過程中每隔一周視察一次解析：選B。微生物分別中培育基的制備應(yīng)是先滅菌再倒平板，A項(xiàng)錯(cuò)誤；每一次劃線前都要灼燒接種環(huán)，以殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種，B項(xiàng)正確；接種后的培育皿應(yīng)在恒溫培育箱中進(jìn)行培育，C項(xiàng)錯(cuò)誤；培育過程中視察的間隔時(shí)間不能太長，相宜條件下視察一次一般不超過24h，D項(xiàng)錯(cuò)誤。4．斜面培育基形成的斜面的長度不超過試管總長的()A．1/5 B．2/3C．1/4 D．1/2解析：選D。擱置斜面長度不超過試管總長度的1/2。5．測定3類細(xì)菌對氧的需求，讓它們在3個(gè)不同的試管中生長，如圖顯示了細(xì)菌的生長層。據(jù)此推斷：只能在有氧培育基中繁殖、只能在無氧培育基中繁殖、在有氧和無氧的培育基中都能繁殖的細(xì)菌依次是()A．Ⅲ、Ⅰ、ⅡB．Ⅲ、Ⅱ、ⅠC．Ⅰ、Ⅱ、ⅢD．Ⅰ、Ⅲ、Ⅱ答案：A6．要從多種細(xì)菌中分別某種細(xì)菌，培育基要用()A．加入青霉素的培育基B．固體培育基C．加入高濃度食鹽的培育基D．液體培育基解析：選B。假如加入青霉素則抑制大部分細(xì)菌生長；若加入高濃度食鹽，則只能選擇出金黃色葡萄球菌；液體培育基多用于生產(chǎn)，分別鑒定一般不用液體培育基。7．下列關(guān)于平板劃線操作的敘述，錯(cuò)誤的是()A．每次劃線前都要灼燒接種環(huán)B．灼燒接種環(huán)后，要馬上用接種環(huán)接種，防止雜菌污染接種環(huán)C．要在酒精燈火焰旁進(jìn)行D．接種前，要將菌種試管口通過火焰解析：選B。灼燒接種環(huán)后，將接種環(huán)伸入管內(nèi)，讓環(huán)端先接觸培育基上未長菌的部位，使其冷卻，然后輕輕挑取少量菌體，再進(jìn)行接種。灼燒接種環(huán)后，不行馬上用接種環(huán)接種，以免接種環(huán)溫度過高，將菌種殺死。8．微生物培育是微生物工程中的基礎(chǔ)技術(shù)。下列相關(guān)敘述正確的一項(xiàng)是()A．病毒和細(xì)菌的培育基成分相同B．平板劃線法中的劃線是連續(xù)進(jìn)行的C．微生物培育基中并不都必需添加碳源或氮源D．在培育的過程中，細(xì)胞種類、數(shù)目都不斷地增加解析：選C。病毒和細(xì)菌的培育基成分有區(qū)分。平板劃線法中的劃線可以是連續(xù)的，也可以是間斷的。微生物的培育過程中，細(xì)胞數(shù)目不斷增加，細(xì)胞的種類不變。9．下列關(guān)于對大腸桿菌的接種的敘述，不正確的是()A．接種環(huán)在接種的試管斜面上輕輕劃“S”型曲線B．在微生物培育操作過程中，為防止雜菌污染，需對培育基、培育皿和接種環(huán)進(jìn)行消毒C．不能用剛剛灼燒過的接種環(huán)干脆挑取菌種D．運(yùn)用過的培育基及其培育物必需經(jīng)過滅菌處理后才能丟棄解析：選B。滅菌是指采納劇烈的物理或化學(xué)方法使物體內(nèi)外全部的微生物恒久丟失生長繁殖實(shí)力，所以，對培育基、培育皿和接種環(huán)進(jìn)行滅菌而不是消毒；因?yàn)樽茻^的接種環(huán)溫度太高，干脆接觸菌種會(huì)將菌種殺死，所以要將接種環(huán)接觸沒有菌種的培育基的頂端待溫度降低后再挑取菌種；有的大腸桿菌會(huì)釋放一種劇烈的毒素，所以運(yùn)用過的培育基及其培育物必需經(jīng)過滅菌處理后才能丟棄，以防止培育物的擴(kuò)散。10．如何推斷制作的培育基是否滅菌徹底()A．看培育基是否透亮B．有沒有殲滅細(xì)菌菌體C．未接種的培育基在恒溫箱中保溫1～2天后檢驗(yàn)有無菌落生長D．是否殲滅了微生物的芽孢、孢子解析：選C。配制好的培育基是否滅菌徹底通常在運(yùn)用前，在恒溫箱中保溫1～2天后檢驗(yàn)有無菌落生長，若無則說明滅菌徹底。11．下列操作屬于滅菌的是()A．接種前用火焰灼燒接種環(huán)B．接種前用酒精擦拭雙手C．將平板倒置，放入培育箱中培育D．接種在酒精燈的火焰旁完成解析：選A。要正確區(qū)分滅菌、消毒和防止雜菌污染。A項(xiàng)屬于滅菌，B項(xiàng)屬于消毒，C、D項(xiàng)都是試驗(yàn)操作過程中防止雜菌污染的措施，與滅菌無關(guān)。12．下列依次表示倒平板、接種的位置，以及劃線法接種的路徑示意圖，其中錯(cuò)誤的是()解析：選D。倒平板時(shí)，用左手將培育皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培育基倒入培育皿，左手馬上蓋上培育皿的皿蓋，防止空氣中的雜菌污染，故A正確；接種時(shí)，左手將培育皿打開一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)快速伸入平板內(nèi)，故B正確；劃線時(shí)要從上一次劃線的末端起先進(jìn)行，讓菌種來源于上一次劃線末端，故C正確，D錯(cuò)誤。二、非選擇題13．急性腸胃炎、手足口病分別是由細(xì)菌、病毒通過消化道進(jìn)入人體導(dǎo)致的。因此檢驗(yàn)飲用水的細(xì)菌、病毒的含量是有效監(jiān)控疾病發(fā)生的必要措施。請回答下列與檢驗(yàn)飲用水有關(guān)的問題：(1)檢驗(yàn)大腸桿菌含量時(shí)，通常將水樣進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的水樣用玻璃涂布器分別涂布到固體培育基的表面進(jìn)行培育，記錄菌落數(shù)量，這種方法稱為________。下圖所示的四種菌落分布圖中，不行能由該方法得到的是________。(2)用該方法統(tǒng)計(jì)樣本菌落數(shù)量是否須要比照組？________。為什么？________________________________________________________________________。(3)有三種材料或用具須要消毒或滅菌：①培育細(xì)菌用的培育基與培育皿；②玻璃棒、試管、燒瓶和吸管；③試驗(yàn)操作者的雙手。其中須要消毒的是________，須要滅菌的是________。(4)已知大腸桿菌能發(fā)酵乳糖并產(chǎn)酸產(chǎn)氣，現(xiàn)供應(yīng)足量的已滅菌的乳糖蛋白胨培育液和具塞試管，應(yīng)如何推斷待檢水樣中是否含有大腸桿菌？________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。解析：(1)平板劃線法所得菌落集中呈線狀，D的菌落分布狀況可推斷為平板劃線法接種。(2)為推斷培育基滅菌是否合格，本試驗(yàn)須要比照。(3)消毒是指運(yùn)用較溫柔的物理或化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)。滅菌是指運(yùn)用劇烈的理化因素殺死物體內(nèi)外全部的微生物，包括芽孢和孢子。對人的手不能進(jìn)行滅菌。(4)依據(jù)題意大腸桿菌能產(chǎn)生氣體，對培育基進(jìn)行接種視察有無氣泡產(chǎn)生來推斷大腸桿菌的有無。答案：(1)涂布平板法D(2)須要因?yàn)轫氁茢嗯嘤欠癖浑s菌污染(培育基滅菌是否合格)(3)③①②(4)通過無菌操作向試管內(nèi)注入肯定量待測水樣。再注入已滅菌的乳糖蛋白胨培育液將試管充溢，塞上塞子，混勻后置于37℃恒溫箱培育24h。若試管內(nèi)有氣泡生成，則說明水樣中有大腸桿菌14．炭疽病是由炭疽桿菌引起的一種人畜共患傳染病。炭疽桿菌兩端截平、呈竹節(jié)狀排列，菌落呈卷發(fā)狀。對炭疽病疑似患者，可依據(jù)噬菌體的宿主專一性，通過試驗(yàn)確診。(1)細(xì)菌培育：采集疑似患者的樣本，分別培育，獲得可疑菌落。(2)細(xì)菌鑒定：試驗(yàn)流程如圖所示①對配制的液體培育基等需實(shí)行________法滅菌；試驗(yàn)所用液體培育基的碳源為________(填“無機(jī)碳”或“有機(jī)碳”)。②選擇可疑菌落制片后，用________視察，可看到呈竹節(jié)狀排列的桿菌。③接種可疑菌后，35℃培育24小時(shí)，液體培育基變渾濁，緣由是____________________。比照組試管中應(yīng)加入________，與試驗(yàn)組同時(shí)培育6小時(shí)后，若試驗(yàn)組液體培育基的渾濁度比比照組________(填“高”或“低”)，則可明確疑似患者被炭疽桿菌感染，反之則解除。解析：(2)①培育可疑炭疽桿菌之前應(yīng)先將液體培育基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。由于炭疽桿菌是異養(yǎng)生物，因此培育基中的碳源應(yīng)是有機(jī)碳。②視察細(xì)菌應(yīng)用顯微鏡。③接種可疑菌24小時(shí)后，液體培育基變渾濁的緣由是細(xì)菌大量繁殖。答案：(2)①高壓蒸汽滅菌有機(jī)碳②顯微鏡③細(xì)菌大量繁殖等量生理鹽水低15．某化工廠的污水池中含有一種有害的難以降解的有機(jī)化合物A。探討人員用化合物A、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制的培育基，勝利篩選到能高效降解化合物A的細(xì)菌(目的菌)。試驗(yàn)的主要步驟如圖所示。請分析回答下列問題：(1)培育基中加入化合物A的目的是________，這種培育基屬于________培育基。(2)“目的菌”生長所需的氮源和碳源是來自培育基中的________。試驗(yàn)須要振蕩培育，由此推想“目的菌”的代謝類型是________________。(3)在上述試驗(yàn)操作過程中，獲得純凈“目的菌”的關(guān)鍵是________________________________________________________________________。