乙肝五項操作規(guī)程

乙肝五項操作規(guī)程乙型肝炎表面抗原（HBsAg）操作步驟：配液：配制工作濃度洗滌液（以純化水做25倍稀釋）編號：將樣品對應微孔按序編號（共預留陰性對照孔3孔、陽性對照1孔、建議預留空白對照1孔）加樣：加入75微升待測樣本和陰、陽性對照與反應孔中。溫育：用封片紙覆蓋反應板后，置37oc溫育60分鐘。加酶標抗體：取出反應板，撕去封片，在已加入待測樣本和陰性、陽性對照孔中加入50微升酶結合物。微孔振蕩器或手工輕輕振蕩10秒鐘。溫育：用封片紙覆蓋反應板后，置37oc溫育30分鐘。洗滌：手工：扣去孔內液體，用洗滌液注滿各孔，靜置20秒，扣去洗滌液，重復5次在吸水紙上拍干。洗板機：將孔內液體甩干。選擇5次洗滌程序，洗板后在吸水紙上拍干。顯色：每孔加入顯色劑A，B液各1滴（50微升），輕輕振蕩勻，用封板紙覆蓋反應板后，將反應板放置37oc孵化30分鐘。終止：每孔加終止液1滴（50微升），混勻。測定：用酶標儀讀數(shù)，波長450nm。（建議使用雙波長的酶標儀比色，參考波長630nm或630相近的波長）若需扣除顯色劑空白，則先用顯色劑空白對照孔校零，然后讀取各孔OD值。結果判斷目測：在白色背景下觀察各孔顯色情況，有明顯黃色者為乙型肝炎表面抗原（HBsAg）陽性；無色者為乙型肝炎表面抗原（HBsAg）陰性。酶標儀檢測：臨界值（CUT/OFF）計算：COV:Cut-offValue參考值PC：陽性對照OD值NCx：陰性對照平均OD值。NCx=(NC1+NC2+NC3)÷3檢測有效性：NCx≤0.1、PC≥1.0，則檢測結果有效。COV=NCx+0.100S：待測樣品的OD值，S/COV：待測樣本和COV的比值。陽性判定：樣品OD值S/COV≥1.0者判定為HBsAg陽性。陰性判定：樣品OD值S/COV<1.0者判定為HBsAg陰性。

乙型肝炎表面抗體（抗-HBs）、操作步驟：配液：濃縮洗滌液配置前充分混勻（如有結晶析出應充分溶解），將濃縮洗滌液（20*）用蒸餾水或去離子水按1:19稀釋后使用。編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰陽性對照各2孔和空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑）加樣：分別在相應孔中加入待測樣品50微升和陰，陽對照50微升及質控血清。加酶標抗體：空白對照孔不加酶標試劑，每孔加入酶結合物50微升，輕輕振蕩混勻。溫育：置37oc溫育30分鐘。洗滌：手工：扣去孔內液體，用洗滌液注滿各孔，靜置5秒，扣去洗滌液，重復5次在吸水紙上拍干。洗板機：將孔內液體甩干。選擇4次洗滌程序，洗板后在吸水紙上拍干。顯色：每孔加入顯色劑A，B液各1滴（50微升），輕輕振勻，37oc避光顯色15分鐘。終止：每孔加終止液1滴（50微升），混勻。測定：用酶標儀讀數(shù)，取波長450nm（建議使用雙波長的酶標儀比色，參考波長630nm）測定各孔OD值先用空白孔校零，然后讀取各孔OD值。結果判斷目測：在白色背景下觀察核孔顯色情況，有明顯黃色者為乙型肝炎表面抗體（抗－HBs）陽性；無色者為乙型肝炎表面抗體（抗－HBs）陰性。酶標儀檢測：臨界值（CUT/OFF）計算：COV=陰性對照平均OD值×2.1。（陰性對照孔OD值低于0.05者按0.05計算，高于0.05按實際OD值計算。陽性判定：樣品的OD值大于或等于COV值時，說明HBsAg陽性。陰性判定：樣品OD值小于COV值時，說明為HBsAg陰性。

乙型肝炎核心抗體（抗-HBc）操作步驟：配液：濃縮洗滌液配置前充分混勻（如有結晶析出應充分溶解），將濃縮洗滌液（25*）用蒸餾水或去離子水按1:19稀釋后使用。編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰陽性對照各2孔和空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑）加樣：將待測樣本用生理鹽水1:30稀釋。（稀釋樣本檢測結果為臨床意義；樣本原液加樣，檢測結果為流行病學意義。用戶可根據(jù)實際情況選擇。）分別在相應孔中加入稀釋樣本50微升和陰，陽對照50微升及質控血清。加酶標抗體：空白對照孔不加酶標試劑，每孔加入酶結合物50微升，輕輕振蕩混勻。溫育：置37oc溫育30分鐘。洗滌：手工：扣去孔內液體，用洗滌液注滿各孔，靜置20秒，扣去洗滌液，重復5次在吸水紙上拍干。洗板機：將孔內液體甩干。選擇4次洗滌程序，洗板后在吸水紙上拍干。顯色：每孔加入顯色劑A，B液各1滴（50微升），輕輕振勻，37oc避光顯色15分鐘。終止：每孔加終止液1滴（50微升），混勻。測定：用于酶標儀讀數(shù)，取波長450nm（建議使用雙波長的酶標儀比色，參考波長630nm）測定各孔OD值先用空白孔校零，然后讀取各孔OD值。結果判斷目測：在白色背景下觀察核孔顯色情況，有明顯黃色者為乙型肝炎表面抗體（HBcAb）陽性；無色者為乙型肝炎表面抗體（HBcAb）陰性。酶標儀檢測：臨界值（CUT/OFF）計算：未稀釋樣品CUT/OFF=陰性對照孔OD均值N×0.3。1:30稀釋樣品CUT/OFF=陰性對照孔OD均值N×0.5。陽性判定：樣品OD值小于COV，說明該樣品HBcAb陽性。陰性判定：樣品OD值大于或等于COV，說明該樣品HBcAb陰性。

乙型肝炎e抗原（HBeAg）操作步驟：配液：濃縮洗滌液配置前充分混勻（如有結晶析出應充分溶解），將濃縮洗滌液（25*）用蒸餾水或去離子水按1:19稀釋后使用。編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰陽性對照各2孔和空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑）加樣：分別在相應孔中加入待測樣品50微升和陰，陽對照50微升及質控血清。加酶標抗體：空白對照孔不加酶標試劑，每孔加入酶結合物50微升，輕輕振蕩混勻。溫育：置37oc溫育30分鐘。洗滌：手工：扣去孔內液體，用洗滌液注滿各孔，靜置浸泡30～60秒，扣去洗滌液，重復5次在吸水紙上拍干。洗板機：將孔內液體甩干。選擇4次洗滌程序，洗板后在吸水紙上拍干。顯色：每孔加入顯色劑A，B液各1滴（50微升），輕輕振勻，37oc避光顯色15分鐘。終止：每孔加終止液1滴（50微升），混勻。測定：用于酶標儀讀數(shù)，取波長450nm（建議使用雙波長的酶標儀比色，參考波長630nm）測定各孔OD值先用空白孔校零，然后讀取各孔OD值。結果判斷目測：在白色背景下觀察各孔顯色情況，有明顯黃色者為乙型肝炎e抗原（HBeAg）陽性；無色者為乙型肝炎e抗原（HBeAg）陰性。酶標儀檢測：臨界值（CUT/OFF）計算：CUT/OFF=陰性對照孔OD均值N×2.1。（陰性對照孔OD值低于0.05者按0.05計算，高于0.05按實際OD值計算）陽性判定：樣品OD值大于或等于COV值時，說明該樣品HBeAg陽性。陰性判定：樣品OD值小于COV值時，說明該樣品HBeAg陰性。

乙型肝炎e抗體（抗-HBe）操作步驟：配液：濃縮洗滌液配置前充分混勻（如有結晶析出應充分溶解），將濃縮洗滌液（25*）用蒸餾水或去離子水按1:19稀釋后使用。編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰陽性對照各2孔和空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑）加樣：分別在相應孔中加入待測樣品50微升和陰，陽對照50微升及質控血清。加酶標抗體：空白對照孔不加酶標試劑，每孔加入酶結合物50微升，輕輕振蕩混勻。溫育：置37oc溫育30分鐘。洗滌：手工：扣去孔內液體，用洗滌液注滿各孔，靜置20秒，扣去洗滌液，重復5次在吸水紙上拍干。洗板機：將孔內液體甩干。選擇4次洗滌程序，洗板后在吸水紙上拍干。顯色：每孔加入顯色劑A，B液各1滴（50微升），輕輕振勻，37oc避光顯色15分鐘。終止：每孔加終止液1滴（50微升），混勻。測定：用于酶標儀讀數(shù)，取波長450nm（建議使用雙波長的酶標儀比色，參考波長630nm）測定各孔OD值先用空白孔校零，然后讀取各孔OD值。結果判斷目