(高清版)DB32∕T 4368-2022 飼料中玉米赤霉烯酮的測定 時間分辨熒光免疫層析定量法　　

32DeterminationofzearalenoneinfeedsTimeresolvedfluorescenceimmunochromatographyquan 本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導(dǎo)則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定本文件起草單位：江蘇省家禽科學(xué)研究所、上海雄圖生物科技有本文件主要起草人：施壽榮、汪勁能、張鵬飛、肖蘊祺、胡艷、邵丹、沈一茹、張珊、王飼料中玉米赤霉烯酮的測定時間分辨熒光免疫層析定量法本文件規(guī)定了飼料中玉米赤霉烯酮測定的原理、試劑和材料、儀器和設(shè)備、樣品制備、樣品前處本文件適用于飼料原料、濃縮飼料、配合飼料、精下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格時間分辨熒光微球timeresolvedfluoresce形狀為球形，直徑在幾納米至幾十微米之間，微球表面或內(nèi)部負載有熒光物質(zhì)，在受到一定的能量激發(fā)時能夠發(fā)出熒光的微粒，比普通熒光半衰期長。微球表面修飾有合適密度的羧基或其它功能基團，用于與蛋白或抗體的共價偶聯(lián)；微球所包理的鑭系稀土元素經(jīng)過了鰲合，無需解離增強步驟。用時間分辨熒光微球標記抗原或抗體制作層析試紙條，根據(jù)時間分辨熒光微球的發(fā)光特點，用時間分辨技術(shù)測量熒光，同時檢測波長和時間兩個參數(shù)進行信號分辨的方法，可有效地排除非特異性熒試樣中玉米赤霉烯酮與時間分辨熒光微球標記的特異性抗體結(jié)合后，抑制了層析過程中標記抗體2時間分辨熒光強度比值和設(shè)定的標準曲線進行準確定量分析。除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的二級水。5.4氯化鈉(NaCl)。5.5鹽酸(HCl)。5.7蔗糖(C??H??O)。5.9磷酸鹽緩沖溶液：取2.178g磷酸氫二鈉(5.1)、0.144g磷酸二氫鉀(5.2)、0.12g氯化鉀(5.3)、4.8g氯化鈉(5.4),溶解于1L水中，用適量鹽酸(5.5)調(diào)pH至6.8~7.2。5.10提取液：取800mL甲醇(5.6)用純水定容至1L,用于樣品提取。5.11稀釋液：在1L磷酸鹽緩沖溶液(5.9)中分別加入1.0g蔗糖(5.7)、2.0g吐溫-20(5.8)混勻，用于樣品上清的稀釋。定容，混合均勻，制備成濃度為25mg/L的儲備液。5.15玉米赤霉烯酮時間分辨熒光免疫層析定量試紙條(圖1):靈敏度不低于20μg/kg。試紙條結(jié)C線T線a)正視圖b)側(cè)視圖6.2渦旋振蕩器：0r/min～2500讀取試紙條的熒光信號并自動計算定量的檢測渦旋振蕩器（6.2）振蕩提取5min，用離心機（6.3）4000r/mi），），9標準曲線制定），9.2分別吸取玉米赤霉烯酮標準儲備液（5.13）0.000mL、0.004mL、0.010mL、0.020mL、0.060mL、0.120mL、0.200mL、0.300別相當于0ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、300ng/mL、600ng/mL、1000ng/mL、1500行檢測（10）。儀器軟件可根據(jù)T線信號值與C線信號值的比值（T/C）和標準工作溶液濃度的自然對9.4同批次試紙條只需建立一次標準曲線，將建立好的標準曲線與項目信息存儲于ID卡中，便于樣10.3從鋁箔袋中取出玉米赤霉烯酮熒光免疫定量檢測試紙條（5.15），水平放置于干式恒溫孵育器10.5孵育結(jié)束后將試紙條（5.15）插入熒光免疫定量分析儀（6樣品中玉米赤霉烯酮含量以質(zhì)量分數(shù)X計，數(shù)值以