《游離DNA保存采血管》

ICS

CCS

團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)

T/FJASXXX—XXXX

游離DNA保存采血管

CellFreeDNAPreservativeTubes

（征求意見稿）

2023-xx-xx發(fā)布2023-xx-xx實(shí)施

福建省標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)發(fā)布

游離DNA保存采血管

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了游離DNA保存采血管的產(chǎn)品總體要求、試驗(yàn)方法、檢驗(yàn)規(guī)則及色標(biāo)、生產(chǎn)

商提供的信息、生產(chǎn)條件、運(yùn)輸及貯存、有效期等要求。

本標(biāo)準(zhǔn)適應(yīng)于游離DNA保存采血管制造商、開展游離DNA生物學(xué)功能及臨床應(yīng)用研究的

科研院所、開展游離DNA檢測(cè)（如NIPT、腫瘤液體活檢、病原微生物宏基因組檢測(cè)等）的

醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室等。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的條款通過本條款的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其

隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修改版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，凡是不注日期的引用

文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

WS/T224-2018真空采血管的性能驗(yàn)證

YY/T0314-2021一次性使用人體靜脈血樣采集容器

GB15979-2002一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

3.1

游離DNAcell-freeDNA

存在于外周血中、游離于細(xì)胞外的機(jī)體內(nèi)源性DNA。

3.2

游離DNA保存液cellfreeDNApreservationsolution

為了進(jìn)行預(yù)定的檢驗(yàn)，放置在采血管內(nèi)的便于血樣中游離DNA保存的物質(zhì)（不包括用于

內(nèi)表面處理的不能清除掉的物質(zhì)）。

3.3

保存容器container

采血管上除去附加物和丁基膠塞、安全帽用于裝血樣的部分。

3.4

丁基膠塞butylrubberclosures

1

用丁基橡膠制成用于密閉保存容器的組件。

3.5

安全帽protectivecap

避免手指或機(jī)械裝置觸及到丁基膠塞與血樣接觸的部分，以免造成污染所設(shè)計(jì)的屏障，

一般為塑料注塑件。

3.6

保水性water-retainingproperty

容器保存液體和防止液體流失、揮發(fā)方面的性能。

3.7

無創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測(cè)NIPTNoninvasiveprenataltesting

通過抽取孕婦外周血，提取血漿中的游離DNA，采用高通量測(cè)序技術(shù)，結(jié)合生物信息分

析方法，評(píng)估胎兒患21三體綜合征、18三體綜合征和13三體綜合征疾病風(fēng)險(xiǎn)的臨床檢驗(yàn)

方法。

3.8

腫瘤液體活檢LiquidBiopsy

通過檢測(cè)或分析外周血等體液中腫瘤細(xì)胞來源的游離DNA的相關(guān)信息，實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤的早

篩、診斷、預(yù)后評(píng)估和治療指導(dǎo)等。

3.9

病原微生物宏基因組檢測(cè)mNGSMetagenomicsNextGenerationSequencing

對(duì)感染樣本（包括血液樣本）中微生物的核酸(DNA/RNA)進(jìn)行高通量測(cè)序，將獲得的序

列與微生物數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)，從而確定樣本中存在的病原體，為臨床疑似感染病例的診斷提

供病原學(xué)證據(jù)。

3.10

YY/T0314-2021中確定的術(shù)語(yǔ)和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

4總體要求

4.1材料及結(jié)構(gòu)

4.1.1丁基膠塞和安全帽，應(yīng)光亮潔凈無銳邊；保存容器外觀應(yīng)無雜質(zhì)，沒有會(huì)導(dǎo)致使用者

的皮膚或手套受到意外劃傷、刺破或磨傷的銳邊、毛刺或粗糙表面。

4.1.2保存容器與丁基膠塞配合不應(yīng)松動(dòng)，安全帽應(yīng)完全蓋住丁基膠塞，塞子與保存容器

2

緊密結(jié)合；應(yīng)能經(jīng)受至少4次取下和裝上塞子，不出現(xiàn)泄漏。

4.1.3需要對(duì)保存容器、丁基膠塞的材料和預(yù)期的適用性進(jìn)行確認(rèn)，充分考慮其材料的可承

受離心力、耐壓、防摔、抗凍、耐輻照等性能。按規(guī)定的方法進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)，采血管縱軸方向

應(yīng)能承受最小3000g的離心加速度，且無斷裂、坍塌、裂縫或其他可見缺陷。

注：無菌管采用輻射（輻照）的滅菌方法，要求其材料滿足耐輻照的能力，輻照應(yīng)是一個(gè)確

認(rèn)的過程。

4.2游離DNA保存液

4.2.1應(yīng)為清亮透明液體，不得有沉淀、顆?；蛐鯛钗锛绑w積變少等現(xiàn)象。

4.2.2應(yīng)充分考慮保存液的穩(wěn)定性，pH值、光照、貯存溫度和時(shí)間等因素對(duì)其影響，PH值

5.5±10%。

4.2.3保存液的體積應(yīng)在規(guī)定體積的90%-110%之間。

4.3非無菌、無菌和無DNA管

4.3.1非無菌管

4.3.1.1采血管內(nèi)部的細(xì)菌菌落數(shù)≤10cfu/mL。

4.3.1.2采血管內(nèi)部不得檢測(cè)出大腸菌群。

4.3.1.3采血管內(nèi)部不得檢測(cè)出致病性化膿菌（綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌與溶血性鏈球

菌）。

4.3.1.4采血管內(nèi)部的真菌菌落數(shù)≤10cfu/mL。

4.3.2無菌管

用輻照滅菌方式實(shí)現(xiàn)，在產(chǎn)品有效期內(nèi)應(yīng)是無菌的。

注：對(duì)于無菌管，通常采用輻射（輻照）的滅菌方法，具體的滅菌過程確認(rèn)和常規(guī)控制，參

見GB18280（ISO11137）

4.3.3無DNA管

采血管內(nèi)部不得檢測(cè)出DNA殘留。

4.4抽吸體積

抽吸體積加上游離DNA保存液的體積應(yīng)在公稱容量的90%-110%以內(nèi)。

4.5保存有效期

游離DNA保存液應(yīng)能在常溫（6℃-37℃）靜置條件下保存人體靜脈血樣本中游離DNA

至少7天，常溫（6℃-37℃）運(yùn)輸條件下保存人體靜脈血樣本中游離DNA至少4天。

4.6凝血和溶血要求

3

4.6.1按照正確的采血步驟使用采血管采血后，充分混勻的樣本在保存有效期內(nèi)在采血管中

不應(yīng)出現(xiàn)凝塊。

4.6.2按照正確的采血步驟使用采血管采血后，充分混勻的樣本在保存有效期內(nèi)進(jìn)行離心，

血漿不應(yīng)出現(xiàn)溶血現(xiàn)象（臨床原因除外）。

4.7游離DNA保存效果

4.7.1使用采血管收集靜脈血并離心獲得血漿，提取血漿游離DNA，每1mL血漿中獲得的游

離DNA應(yīng)不少于10ng（除提取因素外）。

4.7.2對(duì)提取的游離DNA進(jìn)行片段大小檢測(cè)，主峰應(yīng)在166bp左右，且無大片段污染。

4.7.3臨床檢測(cè)項(xiàng)目可根據(jù)該項(xiàng)目的行業(yè)或企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)來判定是否滿足臨床檢測(cè)需求。

5試驗(yàn)方法

5.1材料及結(jié)構(gòu)

5.1.1在平均照度為300lx～750lx范圍內(nèi)且無放大條件下，以目力和手感檢測(cè)的方法進(jìn)

行檢驗(yàn)。

5.1.2保存容器與丁基膠塞配合采用拉拔試驗(yàn)進(jìn)行測(cè)試；安全帽是否完全蓋住丁基膠塞以目

測(cè)的方法進(jìn)行；熒光泄漏試驗(yàn)方法參考YY/T0314-2021附錄C。

5.1.3管體強(qiáng)度檢測(cè)方法參考WS/T224—20184.3。

5.2游離DNA保存液

5.2.1保存液外觀用目力檢測(cè)的方法進(jìn)行。

5.2.2在溫度25℃條件下，用經(jīng)校準(zhǔn)的pH計(jì)對(duì)保存液進(jìn)行pH值檢測(cè)。

5.2.3保存液體積測(cè)量方法

5.2.3.1儀器

經(jīng)校準(zhǔn)的電子天平，精確至小數(shù)點(diǎn)后三位，即0.001g。

架子，在稱重期間保持采血管直立且處于正確方位。

移液槍、離心機(jī)。

5.2.3.2試驗(yàn)步驟

5.2.3.2.1將采血管置于天平上，稱皮重（置零），記錄下數(shù)據(jù)A。

5.2.3.2.2將稱重后的采血管置于離心機(jī)中，3000g離心1mim，取下采血管。

5.2.3.2.3輕輕打開采血管的安全帽，使用移液槍緩慢吸取游離DNA保存液，直至完全吸盡

為止后蓋上安全帽。

4

5.2.3.2.4將無游離DNA保存液的空采血管置于電子天平上，稱重（置零），記錄下數(shù)據(jù)B。

5.2.3.2.5數(shù)據(jù)A-B即為游離DNA保存液質(zhì)量，再用V=M/ρ換算成體積。

5.3非無菌、無菌和無DNA管

5.3.1非無菌管

5.3.1.1采血管內(nèi)部的細(xì)菌菌落總數(shù)

按照GB15979-2002附錄B2方法進(jìn)行檢驗(yàn)。

5.3.1.2采血管內(nèi)部的大腸菌群

按照GB15979-2002附錄B3方法進(jìn)行檢驗(yàn)。

5.3.1.3采血管內(nèi)部的致病性化膿菌

5.3.1.3.1綠膿桿菌

按照GB15979-2002附錄B4方法進(jìn)行檢驗(yàn)。

5.3.1.3.2金黃色葡萄球菌

按照GB15979-2002附錄B5方法進(jìn)行檢驗(yàn)。

5.3.1.3.3溶血性鏈球菌

按照GB15979-2002附錄B6方法進(jìn)行檢驗(yàn)。

5.3.1.4采血管內(nèi)部的真菌菌落數(shù)

按照GB15979-2002附錄B7方法進(jìn)行檢驗(yàn)。

5.3.2無菌管

無菌及驗(yàn)證方法按WS/T224-2018中4.7條規(guī)定的方法進(jìn)行檢驗(yàn)。

5.3.3無DNA管

任意抽取需檢測(cè)的無DNA采血管3支，用10mL0.9%無菌氯化鈉溶液進(jìn)行振蕩溶解，

作為供試液備用。取2mL供試液提取供試DNA樣本。取2mL0.9%無菌氯化鈉溶液作為陰性

對(duì)照。取人細(xì)胞或大腸埃希菌DNA作為陽(yáng)性對(duì)照。用SYBRGreen熒光PCR法分別檢測(cè)供試

DNA樣本、陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照（引物參見附錄A）。供試品管和陰性對(duì)照熒光PCR法檢測(cè)

結(jié)果Ct值≥40或無Ct值，且陽(yáng)性對(duì)照結(jié)果﹤30時(shí)，供試品管為合格。供試品管Ct值﹤40，

陰性對(duì)照Ct值≥40或無Ct值，陽(yáng)性對(duì)照Ct值﹤30時(shí)，供試品管為不合格。陰性對(duì)照Ct

值﹤40或陽(yáng)性對(duì)照Ct值≥30或無Ct值時(shí)，實(shí)驗(yàn)無效。

5.4抽吸體積

抽吸體積的驗(yàn)證按WS/T224—2018中4.2條規(guī)定的方法進(jìn)行檢驗(yàn)。

5.5保存有效期

5

對(duì)抽取人體靜脈血樣本的采血管常溫（6℃-37℃）靜置貯存7天或常溫（6℃-37℃）運(yùn)

輸4天后，通過5.7游離DNA保存效果試驗(yàn)進(jìn)行判斷。

5.6凝血和溶血要求

5.6.1按照正確的采血步驟進(jìn)行采血后，充分混勻血液樣本，在樣本保存有效期內(nèi)任意一天，

在顯微鏡下觀察血液樣本應(yīng)無凝塊。

5.6.2按照正確的采血步驟進(jìn)行采血后，充分混勻血液樣本，在樣本保存有效期內(nèi)任意一天，

對(duì)血液樣本進(jìn)行離心，目力檢測(cè)上層血漿，不應(yīng)出現(xiàn)溶血現(xiàn)象（臨床原因除外）。

5.7游離DNA保存效果

5.7.1采血管對(duì)游離DNA的保存效果受到采血后樣本保存的時(shí)間、環(huán)境（溫濕度等）、采血

管批次等方面的影響，需要對(duì)采血管的性能進(jìn)行充分驗(yàn)證：

a)模擬臨床樣本的采集、運(yùn)輸及試驗(yàn)過程，比較在預(yù)定的條件和采集樣本后立即檢測(cè)兩種

情況下，通過對(duì)比實(shí)驗(yàn)參數(shù)判斷采血管在預(yù)定的條件下是否滿足要求。

b)模擬臨床樣本的采集、運(yùn)輸及試驗(yàn)過程，通過比較考察管與比對(duì)管的差異，進(jìn)行采血管

的性能驗(yàn)證，必要時(shí)可建立新的樣本采集、運(yùn)輸及保存的方式。

5.7.2檢測(cè)方法

5.7.2.1儀器

低溫離心機(jī)、核酸定量熒光計(jì)、毛細(xì)管電泳核酸分析儀。

5.7.2.2試劑

游離DNA提取試劑、熒光計(jì)配套的熒光染料法核酸檢測(cè)試劑、毛細(xì)管電泳核酸分析儀配套耗

材和試劑。

5.7.2.3檢測(cè)步驟

5.7.2.3.1采集3例以上血液樣本。

5.7.2.3.2將采血管在4℃條件下1600g離心10分鐘，將上清轉(zhuǎn)移至新的離心管中，注意不

要吸取到中間層白細(xì)胞；將所得上清在4℃條件下16000g離心10分鐘，將血漿轉(zhuǎn)移到一個(gè)

新的離心管中備用。

5.7.2.3.3使用游離DNA提取試劑從4mL血漿中的提取游離DNA。

5.7.2.3.4使用熒光染料法核酸檢測(cè)試劑和核酸定量熒光計(jì)檢測(cè)游離DNA的濃度，結(jié)果應(yīng)符

合4.7.1的要求。

5.7.2.3.5使用毛細(xì)管電泳核酸分析儀進(jìn)行游離DNA片段大小檢測(cè)，結(jié)果應(yīng)符合4.7.2的要

求。

6

6檢驗(yàn)規(guī)則

6.1檢驗(yàn)要求

有下列情況時(shí)都應(yīng)進(jìn)行檢驗(yàn)：

a)在新產(chǎn)品投產(chǎn)前或準(zhǔn)備用于臨床之前、轉(zhuǎn)廠生產(chǎn)，應(yīng)對(duì)要求中的所有指標(biāo)進(jìn)行充分檢驗(yàn)。

b)產(chǎn)品正常生產(chǎn)時(shí)，每年應(yīng)至少對(duì)要求中的所有指標(biāo)進(jìn)行檢驗(yàn)一次。

c)原料、工藝、配方有重大改變時(shí)，應(yīng)對(duì)可能影響的指標(biāo)進(jìn)行檢驗(yàn)。

d）停產(chǎn)一年后恢復(fù)生產(chǎn)時(shí)。

e)新的批次在出廠和使用前應(yīng)進(jìn)行抽檢。

f）省級(jí)以上藥品監(jiān)督管理部門對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量進(jìn)行監(jiān)督抽查時(shí)。

6.2判定規(guī)則

檢驗(yàn)有一項(xiàng)不合格，可加倍抽樣檢驗(yàn)，經(jīng)復(fù)驗(yàn)合格該批產(chǎn)品檢驗(yàn)合格，若復(fù)驗(yàn)仍有一項(xiàng)

不合格，則該批產(chǎn)品檢驗(yàn)不合格。

7色標(biāo)、生產(chǎn)商提供的信息、生產(chǎn)條件、運(yùn)輸及貯存、有效期

7.1色標(biāo)

游離DNA保存采血管應(yīng)與其他真空采血管區(qū)分，安全帽及標(biāo)簽色彩部分使用紫色PANTONE

236C。

注1：色號(hào)參考國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)色號(hào)：PANTONEColor（潘通色卡）。

注2：標(biāo)簽的色標(biāo)不是指整個(gè)標(biāo)簽的顏色，而是指其色彩部分。

注3：安全帽顏色是指安全帽的外觀顏色，不包括安全帽內(nèi)部的塞子顏色。

注4：本標(biāo)準(zhǔn)中的色標(biāo)為推薦色標(biāo)。

7.2生產(chǎn)商提供的信息

7.2.1采血管應(yīng)附有便于使用者能夠快速識(shí)別產(chǎn)品的信息，將產(chǎn)品的正確使用方法、功能、

要求方面的信息傳遞給使用者。這些信息應(yīng)標(biāo)注在采血管的標(biāo)簽上和（或）一個(gè)采血管或多

個(gè)采血管的包裝上（內(nèi)）。

7.2.2采血管的標(biāo)簽不應(yīng)將采血管全部環(huán)繞。標(biāo)簽內(nèi)容正確，清晰易辨識(shí)，粘貼平整，無皺

褶翹邊、劃破、污漬。

7.2.3最小銷售單元標(biāo)簽應(yīng)符合《醫(yī)療器械說明書和標(biāo)簽管理規(guī)定》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管

理總局令第6號(hào)）要求，標(biāo)簽上應(yīng)標(biāo)明必要信息，包含但不限于以下內(nèi)容：

a)制造商名稱或商標(biāo)和地址；

b)保存液的識(shí)別或用途；

c)相應(yīng)的“無菌”標(biāo)識(shí)，表明特定微生物狀態(tài)或潔凈程度說明；

7

d)避免二次使用標(biāo)識(shí)；

e)生產(chǎn)許可證編號(hào)、產(chǎn)品技術(shù)要求編號(hào)及注冊(cè)證編號(hào)；

f)批號(hào)，以批（LOT）開頭或系列號(hào)；

g)采血管或其部件能安全有效使用的陳述，即有效期，以年月日（CCYYMMDD）表示；

h)公稱液體容量；

i)充裝線；

j)特殊存儲(chǔ)條件和（或）處置條件；

k)如必要可有相應(yīng)的警示及其他特殊信息。

7.2.4應(yīng)在采血管標(biāo)簽上給出內(nèi)裝添加劑保存液及用途的說明，并用顏色進(jìn)行標(biāo)識(shí)。

注：標(biāo)簽上顏色部分應(yīng)與安全帽色標(biāo)一致。

7.3生產(chǎn)條件

游離DNA保存采血管生產(chǎn)應(yīng)嚴(yán)格按照《醫(yī)療器械生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》要求進(jìn)行生產(chǎn)，生

產(chǎn)車間應(yīng)符合GB50073-2013《潔凈廠房設(shè)計(jì)規(guī)范》和YY/T0033-2000《無菌醫(yī)療器具生產(chǎn)

管理規(guī)范》中十萬級(jí)（100000級(jí)）的相關(guān)規(guī)定，實(shí)驗(yàn)室區(qū)域應(yīng)符合萬級(jí)（10000級(jí)）的規(guī)定，

其他檢驗(yàn)設(shè)施設(shè)備應(yīng)符合相應(yīng)要求。

7.4運(yùn)輸及貯存

7.4.1未使用過的采血管應(yīng)在制造商規(guī)定的溫度下（一般為常溫6℃-37℃）避光運(yùn)輸和貯存。

7.4.2采血后，可在6℃-37℃保存和運(yùn)輸，溫度保持恒定。

7.5有效期

游離DNA保存采血管保質(zhì)期為1年。

8

附錄

（資料性附錄）

熒光PCR引物

物種序列名稱序列

正向引物5'-GTACACACCGCCCGTC-3'

18SrRNA

反向引物5'-TGATCCTTCTGCAGGTTCACCTAC-3'

正向引物5'-CCTAYGGGRBGCASCAG-3'

16SrRNA

反向引物5'-TTACCGCGGCTGCTGGCAC-3'

9

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