山東協(xié)和學(xué)院學(xué)生口腔齲活性實(shí)驗(yàn)

山東協(xié)和學(xué)院學(xué)生口腔齲活性實(shí)驗(yàn)【摘要】目的：研究齲活性試驗(yàn)（cariesactivitytest，CAT）之一的刃天青紙片法（Rezazurindisctest，RDtest）紙片變色程度與唾液、菌斑中致齲細(xì)菌以及齲失補(bǔ)牙數(shù)（dmft）的關(guān)系。方法：給300名受測(cè)試者應(yīng)用RD法檢查受測(cè)試者dmft，并取其唾液和菌斑樣本培養(yǎng)致齲細(xì)菌。結(jié)果RD法紙片變色程度與唾液、菌斑中致齲細(xì)菌以及dmft呈正相關(guān)關(guān)系，敏感度為58．8％，特異度為83．7％，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為70．2％。結(jié)論：RD法能反映唾液、菌斑中致齲細(xì)菌數(shù)量以及受測(cè)試者患齲現(xiàn)狀。【關(guān)鍵詞】齲活性試驗(yàn)；刃天青紙片法；菌斑；唾液；齲失補(bǔ)牙數(shù)齲齒是一種由口腔中多種因素復(fù)合作用所導(dǎo)致的牙體硬組織進(jìn)行性病損，表現(xiàn)為無(wú)機(jī)質(zhì)脫礦和有機(jī)質(zhì)分解，隨病程發(fā)展而從色澤改變到形成實(shí)質(zhì)性病損的演變過(guò)程。齲病是人類常見(jiàn)病、多發(fā)病，是造成牙齒丟失的主要疾病之一。齲齒是細(xì)菌性疾病，可以進(jìn)一步引起牙髓炎和根尖周炎，甚至能引起牙槽骨和頜骨炎癥。大學(xué)生這一特殊群體的口腔健康知識(shí)將直接影響其口腔衛(wèi)生行為和口腔健康狀況，從而對(duì)全社會(huì)的口腔預(yù)防保健產(chǎn)生深遠(yuǎn)的影響。但目前國(guó)內(nèi)大量調(diào)查資料發(fā)現(xiàn)，大學(xué)生的口腔保健意識(shí)薄弱，沒(méi)有較好地掌握正確的口腔衛(wèi)生行為，齲病、牙齦炎、牙周病等依然是影響大學(xué)生口腔健康的多發(fā)病和常見(jiàn)病。根據(jù)2016年《全球疾病負(fù)擔(dān)研究》報(bào)告顯示：齲病在全球最流行的疾病中排名第12位，影響了全球約5.6億人群。2017年9月發(fā)布的中國(guó)第四次全國(guó)口腔健康流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示：中國(guó)青少年的患齲率達(dá)70.9%，比十年前上升了5.8%，并有隨著年齡增加而增加的趨勢(shì)，但治療率僅有4.%。即使經(jīng)過(guò)治療，齲病的復(fù)發(fā)率可達(dá)39%-53%。對(duì)于齲病的預(yù)防和阻斷越來(lái)越成為口腔醫(yī)生的投入焦點(diǎn)：尤其是及早針對(duì)病因進(jìn)行的齲病的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估及預(yù)測(cè)體系，對(duì)早期阻斷青少年齲病的發(fā)生、發(fā)展意義重大。在齲病的風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)中，齲活性是齲病發(fā)生、發(fā)展的關(guān)鍵預(yù)測(cè)指標(biāo)，代表機(jī)體患齲的易感性和傾向性。齲活性檢測(cè)是篩選危險(xiǎn)和易感人群的有效方法，本實(shí)驗(yàn)主要是采用刃天青紙片法研究山東協(xié)和學(xué)院學(xué)生口腔中變形鏈球菌群的數(shù)量以及牙表面菌斑中細(xì)菌的產(chǎn)酸能力。刃天青紙片法（RDtest）是檢測(cè)致齲細(xì)菌的一種齲活性試驗(yàn)。其中刃天青紙片變色程度與唾液中致齲細(xì)菌、受測(cè)試者齲失補(bǔ)牙數(shù)和唾液中變形鏈球菌數(shù)有關(guān)。而齲病是由菌斑中致齲細(xì)菌在牙面持續(xù)產(chǎn)酸造成，目前尚無(wú)RD法與菌斑中致齲細(xì)菌相關(guān)性的報(bào)道。本試驗(yàn)進(jìn)行了RD法和受測(cè)試者齲失補(bǔ)牙數(shù)（dmft）、唾液、菌斑中致齲細(xì)菌相關(guān)性的研究。對(duì)象和方法：1.研究對(duì)象2022年8月～2022年10月期間山東協(xié)和學(xué)院口腔醫(yī)學(xué)專業(yè)學(xué)生100人和非口腔醫(yī)學(xué)專業(yè)學(xué)生200人。要求檢查前1h內(nèi)未進(jìn)食，1個(gè)月內(nèi)未服用過(guò)抗生素，6個(gè)月內(nèi)未服用過(guò)激素和免疫抑制劑，1個(gè)月內(nèi)無(wú)口腔局部用藥（如使用漱口水）全身無(wú)重大系統(tǒng)疾病。2.刃天青紙片制作和RD法按Maki試驗(yàn)的方法制作直徑8mm的刃天青紙片置于恒溫箱烘干備用。測(cè)試時(shí)將紙片置于受測(cè)試者舌下浸透，囑其輕閉嘴將紙片取出夾在兩片聚乙烯薄膜之間，夾于其腋下15min后觀察結(jié)果。固定由1名學(xué)生判斷結(jié)果：紫藍(lán)色（－）紫紅色（＋），紅色（＋＋），白色（＋＋＋）。3.標(biāo)本采集（1）唾液采集：上午9～11時(shí)用無(wú)菌口杯取受測(cè)試者的未刺激唾液約1ml，取0.1ml唾液置于裝有0.9ml林格氏液的無(wú)菌1.5ml離心管中,充分震蕩。（2）取唾液標(biāo)本后漱口,然后用無(wú)菌生理鹽水沖洗右下頜第二前磨牙、第一磨牙和第二磨牙的鄰間隙軟垢，隔濕，用消毒牙簽插入鄰間隙至接觸牙齒鄰面取該處菌斑，將牙簽頭折斷放在裝有1ml硫乙醇酸鈉傳送液的1.5ml離心管中，超聲波潔牙機(jī)間斷分散菌斑10s。4.細(xì)菌鑒定通過(guò)菌落性狀和菌落直接涂片革蘭氏染色后顯微鏡下觀察，初步判斷厭氧菌可能的屬性，隨機(jī)抽取3份受測(cè)試者的標(biāo)本（每份標(biāo)本分別包括唾液和菌斑接種的MSB和ROGOSA培養(yǎng)基）的菌落用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)后進(jìn)行分子生物學(xué)鑒定以細(xì)菌特征性基因（變形鏈球菌是gtfb基因，乳酸桿菌是laf基因）為基礎(chǔ)制作引物，以需檢測(cè)細(xì)菌的DNA為模板，進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，然后對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行序列測(cè)定并比對(duì)確定所檢測(cè)細(xì)菌的種類。5.記錄dmft根據(jù)WHO檢查標(biāo)準(zhǔn)，由1名醫(yī)師檢查并記錄dmft。根據(jù)世界衛(wèi)生組織計(jì)算失牙的標(biāo)準(zhǔn)，20歲以下的青少年喪失了不該脫落的牙，如磨牙或尖牙，即為齲失。6.結(jié)果判斷將dmft≥5定為齲易感人群，dmft＜5為對(duì)齲不易感人群；刃天青紙片變紅色和白色定為預(yù)測(cè)陽(yáng)性，紫藍(lán)色和紫紅色定為陰性。7.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS11．0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，RD法紙片變色程度與dmft、唾液和菌斑中的致齲細(xì)菌關(guān)系采用Spearman等級(jí)相關(guān)進(jìn)行分析。結(jié)果：1.本試驗(yàn)共檢查300名同學(xué)的dmft最小值為0，最大值為17，均數(shù)為5．78標(biāo)準(zhǔn)差為4.171。經(jīng)非參數(shù)檢驗(yàn)RD法與dmft之間Spearman檢驗(yàn)r值為0．427雙側(cè)檢驗(yàn)P＜0.01。2.唾液標(biāo)本中所培養(yǎng)的致齲細(xì)菌（CFU／ml）的均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差：鏈球菌（7．540±0．519）×105,變形鏈球菌（5．766±0．748）×104,乳酸桿菌（2．946±1．322）×102,放線菌（6．823±0.449）×105。表1RD法與唾液中致齲細(xì)菌Spearman等級(jí)相關(guān)統(tǒng)計(jì)分析統(tǒng)計(jì)分析鏈球菌變形鏈球菌乳酸桿菌放線菌r值0.4260.3310.3900.203雙側(cè)檢驗(yàn)P值0.0000.0010.0000.005菌斑樣本中所培養(yǎng)的致齲細(xì)菌（CFU／ml）的均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差：鏈球菌（7．746±0．550）×105,變形鏈球菌（6．194±0．540）×104,乳酸桿菌（3．248±1．292）×102,放線菌（7.069±0.737）×105。表2RD法與菌斑中致齲細(xì)菌Spearman等級(jí)相關(guān)統(tǒng)計(jì)分析統(tǒng)計(jì)分析鏈球菌變形鏈球菌乳酸桿菌放線菌r值0.2550.2460.3350.185雙側(cè)檢驗(yàn)P值0.0130.0170.0170.0744.細(xì)菌的分子生物學(xué)鑒定結(jié)果顯示鏈球菌和乳酸桿菌的測(cè)序結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)序列比對(duì)吻合率分別為96％和93％結(jié)果可充分證實(shí)細(xì)菌種類。討論：齲活性試驗(yàn)（CAT）是檢測(cè)個(gè)體和人群可能發(fā)生齲病危險(xiǎn)因素的敏感程度可為預(yù)防齲病提供信息。刃天青紙片法是CAT的一種,具有操作簡(jiǎn)單、得出結(jié)果時(shí)間短、成本低的特點(diǎn)。刃天青是一種氧化還原指示劑,在進(jìn)行RD法時(shí),唾液中的革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌利用刃天青紙片上的蔗糖進(jìn)行氧化還原反應(yīng),產(chǎn)生NADH等氫離子供體,在厭氧條件下使紙片變色。Maki的研究認(rèn)為刃天青紙片變色程度的致齲細(xì)菌呈正相關(guān)關(guān)系,而齲病是由菌斑中致齲細(xì)菌在牙面持續(xù)產(chǎn)酸造成,只有在菌斑中變形鏈球菌等數(shù)量,增加產(chǎn)酸度增強(qiáng)的情況下齲病才會(huì)發(fā)生。因此可以認(rèn)為通過(guò)了解菌斑中致齲細(xì)菌數(shù)量來(lái)預(yù)測(cè)齲活性更有意義。目前尚無(wú)RD法與菌斑中致齲細(xì)菌相關(guān)性的報(bào)道。本試驗(yàn)結(jié)果顯示紙片變色程度與唾液中的鏈球菌、變形鏈球菌、乳酸桿菌、放線菌呈正相關(guān)相關(guān)系數(shù)雙側(cè)檢驗(yàn)P＜0．01,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這與Maki的研究結(jié)果一致。紙片變色程度與菌斑中的鏈球菌,變形鏈球菌乳酸桿菌呈正相關(guān),相關(guān)系數(shù)雙側(cè)檢驗(yàn)P＜0．05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。由此可見(jiàn)RD法紙片變色程度不僅與唾液中致齲細(xì)菌呈正相關(guān),而且與菌斑致齲細(xì)菌呈正相關(guān),這可能是由于口腔內(nèi)細(xì)菌處于一種動(dòng)態(tài)平衡,唾液和菌斑中的致齲細(xì)菌保持一種較為恒定的關(guān)系。RD法紙片變色程度與dmft經(jīng)非參數(shù)檢驗(yàn),相關(guān)系數(shù)為0．427雙側(cè)檢驗(yàn)P＜0．01,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說(shuō)明RD法可以反映患齲現(xiàn)狀，這與劉鴻雁等的研究結(jié)果一致。Beck強(qiáng)調(diào)通過(guò)橫斷面調(diào)查進(jìn)行齲活性試驗(yàn)得出的有意義結(jié)果，需要進(jìn)行前瞻性的縱向研究驗(yàn)證，如果能預(yù)測(cè)新齲發(fā)生則更有意義。本試驗(yàn)尚需進(jìn)行前瞻性試驗(yàn)，觀察刃天青紙片變色是否與新齲發(fā)生有相關(guān)性。參考受測(cè)試者的齲均5．78將dmft≥5定為齲易感人群dmft＜5定為齲不易感人群，紙片變?yōu)榧t色和無(wú)色為預(yù)測(cè)陽(yáng)性，紙片為紫藍(lán)色和紫紅色為預(yù)測(cè)陰性，由此得出Sn58.8％、Sp83.7％,敏感度不夠理想這可能與齲病是多因素疾病有關(guān)。綜上所述,要充分發(fā)揮RD法的價(jià)值還應(yīng)該將其與其他因素聯(lián)合起來(lái)預(yù)測(cè),以提高敏感度。參考文獻(xiàn)：[1]VIVIENFENG,張羽,曹桂芝,吳日玥,陳曦.一種國(guó)產(chǎn)齲活性培養(yǎng)基與標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基一致性及有效性的實(shí)驗(yàn)檢測(cè)[J].口腔醫(yī)學(xué),2020,40(07):602-605.DOI:10.13591/ki.kqyx.2020.07.006.[2]于興茹.低齡兒童齲患者及其父母齲活性的調(diào)查與研究[D].河北醫(yī)科大學(xué),2013.[3]游弋,黃培城,