醫(yī)學(xué)產(chǎn)淀粉酶芽孢桿菌的篩選專題課件

產(chǎn)淀粉酶芽孢桿菌的篩選淀粉酶的作用及來源目前生產(chǎn)應(yīng)用的淀粉酶主要來源于微生物，并集中在幾種細(xì)菌和真菌中，尤其以芽孢桿菌所產(chǎn)的淀粉酶較多。其原因首先芽孢桿菌屬(Bacillus)中能產(chǎn)生淀粉酶的菌種較多;其次，芽孢桿菌屬產(chǎn)的淀粉酶有較好的應(yīng)用價(jià)值，如凝結(jié)芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、嗜熱芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌產(chǎn)的淀粉酶具有耐熱性;再次，芽孢桿菌應(yīng)用歷史悠久，廣泛用于飼料添加劑，其安全性有保證。2※實(shí)驗(yàn)材料1、實(shí)驗(yàn)儀器：磁力攪拌器、水浴鍋、移液槍、恒溫箱、超凈工作臺、搖床、涂布棒、接種環(huán)、槍頭200μL、顯微鏡、牙簽（需滅菌）2、實(shí)驗(yàn)試劑：無菌水、淀粉、酵母膏、蛋白胨、MgSO4·7H2O、Na2HPO4、瓊脂、盧戈氏碘液、NaCl、碘、碘化鉀3※實(shí)驗(yàn)方法采用初篩、復(fù)篩得到理想的菌種。4※實(shí)驗(yàn)步驟1、土樣采集從面粉廠附近采集土壤表層土樣，去除表層土，在表層土下５到10ｃｍ處取樣，用無菌器具采樣并裝入袋中，記錄采樣時(shí)間，地點(diǎn)，環(huán)境等，帶回實(shí)驗(yàn)室。2、產(chǎn)淀粉酶菌株的初篩（1）稱取土樣1g，放于300mL無菌水中打散，制成菌懸液，將菌懸液置于80℃水浴20min，梯度稀釋至10－5。取200μL10-3、10-4和10－5菌懸液涂布于篩選培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)48h。（2）根據(jù)菌落形態(tài)篩選：待長出菌落后，先進(jìn)行菌落形態(tài)觀察，有芽孢的細(xì)菌往往長出外觀粗糙、“干燥”、不透明且表面多褶的菌落。從而去除放線菌、真菌等雜菌的影響。5※實(shí)驗(yàn)步驟（3）根據(jù)是夠產(chǎn)生淀粉水解圈篩選：在菌落周圍滴加盧戈氏碘液，觀察菌落周圍是否出現(xiàn)透明水解圈，（如果擔(dān)心碘液會將菌種殺死，則采用點(diǎn)種法將菌種接種到另外一個(gè)培養(yǎng)基上）并測定菌落及水解圈直徑，計(jì)算其比值(HC比值)。挑取HC比值較大的8個(gè)不同的單菌落，進(jìn)行斜面培養(yǎng)，作為初篩菌種編號保藏。（斜面培養(yǎng)基依然采用淀粉篩選培養(yǎng)基）6※實(shí)驗(yàn)步驟3、產(chǎn)淀粉酶菌株的復(fù)篩將初篩得到的8個(gè)菌株在篩選培養(yǎng)基上劃線分離，37℃培養(yǎng)24~48h，長出單菌落后，選擇直徑為1mm的單菌落，滴加盧戈氏碘液，觀察是否有透明水解圈，選取HC值較大的菌種作為復(fù)篩菌株即實(shí)驗(yàn)菌株，進(jìn)行菌種鑒定。4、菌種的鑒定對所篩選的菌種進(jìn)行革蘭氏染色、芽孢染色，通過顯微觀察及菌落形態(tài)進(jìn)行鑒定，得到最終的目的菌種。具體實(shí)驗(yàn)方法參考微生物實(shí)驗(yàn)課本。7※菌種保藏5、菌種保藏將初步鑒定好的菌種接種在sday斜面培養(yǎng)基上，在37℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待其長滿菌絲后。放在4℃冰箱中進(jìn)行菌種保藏。8※培養(yǎng)基配方培養(yǎng)基的配方：篩選培養(yǎng)基:淀粉20.0g，酵母膏5.0g，蛋白胨10g，Na2HPO45.0g，MgSO4·7H2O0.1g，NaCl0.1g，瓊脂20.0g，水1000mL，pH7.0－7.4。Sday培養(yǎng)基配方：葡萄糖、酵母浸膏、瓊脂9※注意事項(xiàng)采樣時(shí)應(yīng)該盡可能保持相對無菌。所采集的樣本必須具有某種代表性。采好的樣必須完整地標(biāo)上樣本的種類及采集日期、地點(diǎn)以及采集地點(diǎn)的地理、生態(tài)參數(shù)等；注意采樣的季節(jié)性和時(shí)間因素；及時(shí)處理采好的樣，暫時(shí)不能處理的應(yīng)該貯藏4℃下，但貯存時(shí)間不宜過長。10※參考文獻(xiàn)參考文獻(xiàn)：［1］唐麗江，王振華，王迪．高產(chǎn)淀粉酶芽孢桿菌菌株的篩選［J］．安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，(12)．［2］張雙民．土壤中淀粉酶高產(chǎn)菌株的分離及產(chǎn)酶條件的優(yōu)化［J］．土壤肥料，2006，(2)．［3］劉雅琴，陳?？?，孔令全．α－淀粉酶產(chǎn)生菌的分離篩選與誘變選育［J］．畜牧與飼料科學(xué)，2010，(9)．［4］徐?。a(chǎn)淀粉酶芽孢桿菌的篩選和分離［J］．齊魯師范學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，26(5):144-