雜交瘤技術(shù)在成藥性抗體開發(fā)中的應(yīng)用

雜交瘤技術(shù)在成藥性抗體開發(fā)中的應(yīng)用抗體藥物概述AntibodyDrugs抗體類藥物由于其特異性高、不良反應(yīng)性低且可以針對(duì)特定靶點(diǎn)定向制備等優(yōu)點(diǎn)，已成為近年來新藥開發(fā)領(lǐng)域的中堅(jiān)力量。自1986年OrthocloneOKT3獲批以來，至今已有超過100種單克隆抗體(mAbs)被美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)批準(zhǔn)，適應(yīng)癥也逐步擴(kuò)展，覆蓋腫瘤、自身免疫性疾病、血液疾病、傳染病和中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病等多種疾病?？贵w藥物市場(chǎng)的銷售額也在逐年攀升，誕生了多個(gè)銷售額超過百億美元的重磅藥物。圖1.抗體類藥物數(shù)量爆發(fā)式增長抗體藥物制備流程AntibodyDrugs抗體藥物制備的一般流程包括靶點(diǎn)確認(rèn)、抗體類型確認(rèn)（單抗、雙抗或ADC等）、抗原制備及免疫（抗原類型、動(dòng)物類型選擇）、抗體篩選制備（制備技術(shù)的選擇）、抗體優(yōu)化、成藥性評(píng)估、動(dòng)物模型評(píng)估、穩(wěn)定株開發(fā)、工藝開發(fā)及生產(chǎn)、臨床前評(píng)估、臨床驗(yàn)證及產(chǎn)業(yè)化等。圖2.抗體藥物開發(fā)流程雜交瘤技術(shù)HybridomaTechnology抗體藥物的發(fā)展，得益于抗體制備技術(shù)的進(jìn)步。雜交瘤技術(shù)自1975年被發(fā)現(xiàn)以來，由于其技術(shù)路線成熟、可進(jìn)行多種功能性介入篩選、成本低、易操作等優(yōu)點(diǎn)，一直作為抗體發(fā)現(xiàn)常用的技術(shù)，目前獲批的相當(dāng)比例的抗體類藥物為采用雜交瘤技術(shù)篩選獲得的。圖3.義翹雜交瘤技術(shù)抗體制備流程利用雜交瘤技術(shù)進(jìn)行成藥性抗體篩選時(shí)需要注重幾個(gè)關(guān)鍵技術(shù)環(huán)節(jié)：1免疫原的選擇優(yōu)選具有生物活性的高純度重組蛋白①免疫劑量明確，免疫效果相對(duì)穩(wěn)定②血清篩選和抗體篩選可實(shí)現(xiàn)高通量③獲得抗體針對(duì)的靶點(diǎn)相對(duì)明確④表達(dá)存在技術(shù)挑戰(zhàn)，蛋白不易獲得，或表達(dá)獲得的蛋白結(jié)構(gòu)與天然蛋白存在差異選擇非蛋白類特殊抗原（DNA、細(xì)胞等）免疫作為有效補(bǔ)充手段①解決蛋白難表達(dá)的問題，免疫原更接近天然蛋白②需要提升免疫反應(yīng)強(qiáng)度，后期篩選鑒定相對(duì)困難2免疫方案的設(shè)計(jì)總體原則：因靶點(diǎn)和需求而異，考慮時(shí)間和資金成本平衡①增加早期投入力度，獲得更多候選抗體，應(yīng)對(duì)下游高淘汰率②動(dòng)物選擇③品系選擇：BALB/c、C57BL/6、SJL、轉(zhuǎn)基因小鼠等④數(shù)量選擇：靶點(diǎn)之間免疫效果差異較大，考慮動(dòng)物個(gè)體差異，建議每組不少于10只動(dòng)物免疫佐劑、劑量、周期、途經(jīng)以常規(guī)標(biāo)準(zhǔn)方案為基礎(chǔ)，根據(jù)初步免疫原性評(píng)估和歷史經(jīng)驗(yàn)，制定個(gè)性化方案（弱反應(yīng)增加劑量、淋巴結(jié)免疫、調(diào)整佐劑增加多樣性等）①免疫佐劑：包括弗氏佐劑、鋁佐劑、MF59、QS21等②免疫途徑：包括皮內(nèi)、皮下、腹腔、靜脈、淋巴結(jié)、脾內(nèi)等3高效融合及篩選融合效率：提升抗體制備效率，融合效率是關(guān)鍵因素之一，傳統(tǒng)PEG融合，對(duì)細(xì)胞傷害大，融合效率低，不利于后續(xù)篩選到好的抗體。電融合技術(shù)對(duì)于細(xì)胞傷害小，融合效率高，擴(kuò)大了篩選到更好多樣性抗體的范圍，為后續(xù)篩選到好的成藥性候選抗體提供了更多可能。相同脾細(xì)胞量圖：義翹對(duì)比PEG融合與電融合效率結(jié)果介入篩選：篩選階段除了常規(guī)基礎(chǔ)的ELISA篩選，增加競爭篩選、流式篩選、細(xì)胞篩選等介入篩選，可以更早的排除非目標(biāo)應(yīng)用抗體，縮小抗體范圍，高效鑒別出目標(biāo)克隆，減少后續(xù)的工作量及成本。義翹神州雜交瘤技術(shù)平臺(tái)HybridomaTechnology義翹神州擁有>10年抗體制備經(jīng)驗(yàn)，可以提供從抗原制備到抗體篩選及鑒定的一站式服務(wù)。抗體制備有雜交瘤技術(shù)、噬菌體展示技術(shù)、單B細(xì)胞流式分選技術(shù)、單B細(xì)胞Beacon技術(shù)可以選擇，均有眾多成功案例。針對(duì)經(jīng)典的雜交瘤平臺(tái)，義翹神州做了全面的優(yōu)化，擁有>19000株抗體成功制備經(jīng)驗(yàn)。目前義翹神州正在進(jìn)行抗體制備秋季促銷活動(dòng)，詳情請(qǐng)關(guān)注下面詳細(xì)介紹。平臺(tái)優(yōu)勢(shì)免疫多樣化①6500+種現(xiàn)貨蛋白選擇，打包抗體制備服務(wù)價(jià)格特殊優(yōu)惠②多種免疫原選擇：多肽、蛋白、DNA、細(xì)胞等③多種免疫方式：皮下、腹腔、脾臟等④多品系小鼠選擇：BALB/c、C57BL/6、SJL小鼠等⑤多方案選擇：常規(guī)與快速（最快60天即可拿到抗體）技術(shù)先進(jìn)化①多種佐劑選擇②高效的電融合技術(shù)：較PEG融合效率高3-5倍③高通量有限稀釋技術(shù)④雜交瘤體外無血清培養(yǎng)技術(shù)服務(wù)個(gè)性化①多節(jié)點(diǎn)介入篩選：血清、主克隆、亞克隆階段②多種檢測(cè)平臺(tái)：ELISA、FACS、WB、IHC、IF、Biacore、Cellassay等③梯度報(bào)價(jià)，按工作量收費(fèi)④專業(yè)項(xiàng)目經(jīng)理跟進(jìn)及溝通反饋服務(wù)列表中和抗體制備服務(wù)抗獨(dú)特型抗體制備服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)鼠單抗制備服務(wù)快速鼠單抗制備服務(wù)WB/IHC抗體制備服務(wù)案例展示良好細(xì)胞活性的鼠單抗Fig1.利用雜交瘤技術(shù)篩選獲得的鼠單抗，具有良好的抑制細(xì)胞增殖作用抗獨(dú)特型鼠單抗Fig