DB33T 994-2015 西瓜品種枯萎病抗性評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范　

DB33Technicalspecificationforevaluatingresistanceofwatermelonagainstfusariumwilt浙江省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)與微生物研究所、浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：王漢榮、楊桂玲、王連平、方麗、陸劍飛、1西瓜品種枯萎病抗性評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范2發(fā)病率rateofinfected病情指數(shù)diseaseindex(DI)恒溫箱、超凈工作臺(tái)、高壓滅菌鍋、冰箱、可控溫的溫室（溫度保持在20℃~28℃)、塑料盆、鋁鍋、電爐、培養(yǎng)皿、試管、剪刀、鑷子、廣口瓶、酒精燈、后放在石棉網(wǎng)上，小火加熱，并用玻璃棒不斷攪拌，待瓊脂完全溶解后，再補(bǔ)充小塊放入鍋中，加水1000ml，在加熱器上加熱至沸騰，維持30min，用2層紗布趁熱在量杯上過濾，小火加熱至沸騰，再補(bǔ)充水分至1000ml。將配制的培養(yǎng)基分3配方為綠豆40g、氯化鈉8g，加蒸餾水至1000ml。按培養(yǎng)基配方稱取綠蒸餾水1000ml，在加熱器上加熱至沸騰，維持30min，用2層紗布趁熱在量杯上過濾，棄濾渣，液補(bǔ)充水分到1000ml；把濾液放入鍋中，加入氯化鈉8g，用玻璃棒攪拌后放在石棉網(wǎng)上，小火加熱至沸騰，再補(bǔ)充水分至1000ml。將配制的培養(yǎng)基分裝入500m），純化后，將西瓜枯萎病菌接種于PDA平板培養(yǎng)基上，并在接種點(diǎn)周圍放置一定數(shù)量的滅菌濾紙片，在25℃培養(yǎng)7d后，取出濾紙片，經(jīng)真空干燥于-20℃~-80℃的低溫冰箱中保存。或?qū)⑽鞴峡菸【臃N于PDA斜面養(yǎng)基上，在25℃培養(yǎng)7d后，置4℃~8℃的冰箱中保存。選擇當(dāng)?shù)匚鞴袭a(chǎn)區(qū)分離的西瓜枯萎病菌株，該菌應(yīng)屬于分布較種于裝有PL液體培養(yǎng)基或綠豆液體培養(yǎng)基的三角瓶中（液體培養(yǎng)基的體積以三角瓶容量的30%～35%為宜），置于25℃恒溫振蕩箱培養(yǎng)中，160r/min～180r/min振蕩培養(yǎng)5d～7d。培養(yǎng)液經(jīng)雙層紗布過濾，濾液以4000r/min離心10min，倒除上清液，加適量的無菌水稀釋，得到分生孢子懸浮液，供用無菌水稀釋上述供接種用的分生孢子懸浮液，鏡檢，將孢子懸浮液稀釋至4.0×106個(gè)／ml配制傷根，抖去珍珠巖或黃沙，置于接種液中浸根5min，每份待鑒定的西瓜品種（系）接種30株，重復(fù)3次。接種后移栽于裝有滅菌育苗基質(zhì)、直徑10將待鑒定的西瓜種子經(jīng)5%次氯酸鈉溶液浸種10min后，用蒸餾水清洗3次，再清水浸泡5墊有兩層濕潤濾紙的培養(yǎng)皿中，置于恒溫箱中，在30℃~32℃恒溫中催芽。為了保證植株間接種的一致性，挑選胚根長至0.2cm～0.3cm的種4每缽1株，共30株。置溫室中觀察發(fā)病，溫室溫度保持在23℃~28℃之間。缽中育苗基質(zhì)的濕度保持在60%～80%為宜，早晚注意溫度變化，防止溫度過高和過低。整個(gè)過程不使用殺菌劑。設(shè)置一個(gè)感病對(duì)照和一個(gè)抗病對(duì)照，抗病對(duì)照選擇指標(biāo)為在常規(guī)接菌量下病情指數(shù)小于20.00的品4病害調(diào)查與抗病性判定4.1病害調(diào)查4.2調(diào)查分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)其維管束部分變褐色。病情分級(jí)采用0級(jí)、1級(jí)、3級(jí)、5級(jí)、7級(jí)、9級(jí)的6級(jí)分級(jí)法，各病級(jí)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)參4.3調(diào)查結(jié)果的統(tǒng)計(jì)?????????nt——總株數(shù)。5?????????（2）4.4鑒定結(jié)果的校正K=(50.00/DIck)×100?????????（3）50.00——感病對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)病情指數(shù)；DIck——本次鑒定感病對(duì)照病情指數(shù)。用K值與本次鑒定中被鑒定品種的病情指數(shù)相乘，求得被鑒定品種的相對(duì)病情指數(shù)（RDIRDIRDI=DI×K?????????（4）4.5鑒定結(jié)果的評(píng)定12R345S66屬真菌界（Fungi），半知菌亞門（Deuteromycotina），絲孢綱（Hyphomycetes），瘤座孢目A.2培養(yǎng)特性和孢子形態(tài)A.2.1特性在PDA培養(yǎng)基上，菌絲為白色，培養(yǎng)時(shí)間稍長培養(yǎng)基經(jīng)常出現(xiàn)紫色，菌絲體透明，有分A.2.2.1大型分生孢子大型分生孢子著生在復(fù)雜而又有分枝的分生孢子?；蛄鰻畹逆咦幼希淑牭缎沃良忓N形，橢圓型彎曲基部有小柄，兩端尖，頂端呈鉤狀，有的呈喙?fàn)顝澢诒?。通常具?個(gè)～5個(gè)分隔，以3個(gè)分隔的常見，大小為（22.8μm～38.4μm）×），大型分生孢子通常有3種培養(yǎng)型，Ⅰ型為勻稱鐮刀形或紡錘形，頂細(xì)胞較長，足細(xì)胞明顯或不明有時(shí)可達(dá)8個(gè)分隔；Ⅲ型寬短，頂端呈鉤狀，有的呈喙?fàn)顝澢?，上?/3處變寬，基部細(xì)胞逐漸變窄，A.2.2.2小型分生孢子多數(shù)為單胞，少數(shù)有1個(gè)分隔，通常為卵形，有時(shí)為橢圓形、倒卵形、腎形、柱形，大小為（5μm～12μm）×（2.2μm～3.5μm），通常著生于菌絲側(cè)面的分生孢子梗，聚集成假頭狀。A.2.2.3厚垣孢子通常單生，有時(shí)雙生，多數(shù)在老熟的菌絲頂端和中間形成，有時(shí)亦可生于大型分生孢子上，表面7表B.1給出了西瓜品種枯萎病抗性鑒定結(jié)果原始